C.エレガンスMovement Tracking:線虫の移動を評価する方法

- C.エレガンスの移動を評価するには、カメラを使用して寒天プレート上の線虫の動きを記録し、記録中にプレートが均一に照らされるようにします。プレートの周りのワームの動きを制限するには、銅のリングを使用します。銅はC.エレガンスに嫌悪感を抱くため、ワームはリング内に囲い込まれます。

複数の銅リングを1つのプレートに配置して、各リング内のワームを同時に追跡します。これにより、対照動物と実験動物の評価を同じ条件下で行うことができ、日々のばらつきを減らし、並べて比較することが可能になります。設定された時間間隔でワームの動きを記録し、コンピューターソフトウェアを使用して、移動速度や移動距離など、機関車の挙動の特徴を分析します。

このプロトコルの例では、ワームの移動速度に対するアルコールの影響をテストする運動追跡アッセイのデモンストレーションを見ていきます。

- まず、2分以内で各実験グループから10匹の線虫を順化板上の銅リングの中心に移します。こちらはエタノール不使用のプレートです。ワームと一緒に食べ物を移すことは、ワームの動きを減らすため、避けてください。また、ワームが穴を掘るので、寒天の表面を傷つけないようにしてください。プレートへのロード時間を記録し、各プレートへのワームの移動を2分以上ずらして、各プレートを適切な時間間隔で個別に撮影できるようにしてください。

各順化プレートを室温で30分間インキュベートします。次に、順化プレート上にワームを配置するために使用した順序に従って、ワームをアッセイプレートに移します。バクテリアを含まない薄いエッジの平らなワームピックを使用して、すくい取り動作を使用して平らなピックの上にワームを集めます。次に、プレートを実験用フィルムで密封して、気化によるエタノールの損失を最小限に抑えます。

- このステップで動物が移送される速度は非常に重要です、なぜなら転移した動物はより長くエタノールにさらされるからです。したがって、実験の反復間でプレート上に最初に配置されるひずみをローテーションすることをお勧めします。

- 現在、ワームを撮影するには、高解像度のビデオカメラを備えた顕微鏡が必要です。3インチ四方のバックライトなどの照明も、分析に不可欠です。次に、コントラストを維持するために、プレートメディア側を上にしてイメージングします。

120フレーム、12ビット、グレースケール、タイムラプスムービーを1秒あたり1フレームでキャプチャするための画像解析ソフトウェアを準備します。十分な画像解像度を維持しながら出力ファイルのサイズを小さくするには、2 x 2 ビニング モードを使用します。

次に、各プレートから2分間のムービーを録画します。これは、最後のワームがそのプレートに置かれてから10分後です。次に、ワームをプレートに置いてから30分後に、2回目の2分間の