胸腔内注射:成体のゼブラフィッシュの心臓への化合物送達

- まず、ペトリ皿にスリットを入れた濡れたスポンジを置きます。次に、成魚をトリカイン溶液で麻酔し、腹側を上にして慎重にスリットに移します。ペトリ皿を実体顕微鏡の下に置き、皮膚の下で鼓動する心臓の動きを観察します。

ミンクロインジェクション針を、体軸から45度の角度で、蓋と胸帯の間にある鼓動する心臓の上に配置します。.針を皮膚を通して心臓を囲む薄い膜である心膜にゆっくりと進めます。注射ミックスを心膜に送達します。

ショットには、溶液の動きを追跡するためのフェノールレッドなどのトレーサー染料が含まれています。胸部から針を引き抜きます。魚をすぐにシステム水の入った回収タンクに移し、麻酔から完全に回復するまで監視します。次のプロトコールでは、胸腔内注射を行って試験化合物を送達し、心臓の再生への影響を調べます。

- 網を使用して成魚を捕まえ、麻酔液に移します。1〜2分後、魚が泳ぐのをやめ、蓋の動きが減少したら、プラスチックのスプーンで魚に触れて、魚が接触に反応しないことを確認します。次に、腹側を上にして、魚を濡れたスポンジの溝にすばやく慎重に移します。魚の頭は、オペレーターの利き手から離れている必要があります。

実体顕微鏡の下で、魚の皮膚の下で鼓動する心臓の動きを注意深く観察します。視覚的には、鼓動する心臓の上と腹側軟骨板によって定義される三角形の中央にある注入点を決定します。キャピラリーの先端を、体の軸に対して30〜45度の角度で挿入します。マイクロキャピラリーの先端で心膜にやさしく皮膚を浸透させます。

針が心膜の内側に入ったら、マイクロインジェクターデバイスのペダルを踏んで注射を完了します。注射後、毛細血管を胸部から静かに引き抜き、すぐに魚をシステム水の入った水槽に移して回復させます。麻酔から完全に回復するまで魚を監視します。注射の効果を分析するには、目的の時点で心臓を採取し、さらなる分析のために準備します。