超音波ガイド下移植:膵管腺癌細胞を成体マウスに移植する技術

- 超音波は、腫瘍細胞注入中の炎症を最小限に抑えて、特定の組織部位にがん細胞を移植するのに役立つ高解像度の画像を提供します。主に、同所性モデルを使用して、腫瘍細胞を腫瘍起源の関連臓器に移植します。この臓器は、元の腫瘍微小環境を模倣し、転移を促進します。

まず、腫瘍細胞を冷たいPBSに懸濁してpHを維持し、チューブを氷の上に置きます。次に、麻酔マウスを超音波ステージに置き、手足をラボテープで固定します。剃毛した腹部に必要量の超音波ジェルを塗布し、膵臓がはっきりと見えるまで超音波プローブの位置を調整します。シリンジに腫瘍細胞懸濁液をロードし、細胞を慎重に膵臓に注入します。

超音波画像に液体の泡が現れ、移植が成功したことを確認します。細胞の逆流を防ぐために5秒間待ち、針をそっと取り外します。動物を清潔なケージに戻し、麻酔から回復するまで監視します。注射後数週間以内に、膵臓に注入されたがん細胞は急速に分裂して腫瘍を形成します。次のプロトコルでは、マウス由来の膵管腺癌細胞の超音波ガイド下移植を同所モデルの膵臓に移植します。

- 手順を開始する前に、目的の膵管腺癌細胞株を氷上の無菌冷PBSの適切な量に再懸濁します。ケージを摂氏37度の加温プレートに置き、生物学的安全キャビネット、誘導チャンバー、超音波ステージを適切な滅菌剤で徹底的に洗浄します。超音波ステージの加温機能を摂氏37度に設定し、麻酔導入後、最初の動物の目に軟膏を塗布します。

マウスを超音波ステージの背側横臥位に置き、上肢と下肢をテープでステージに優しく固定します。滅菌済みの綿先アプリケーターを使用して、腹部の左上腹部の脾臓の正中線までの領域に脱毛クリームのたっぷりとした層を塗布します。1分後、乾いたガーゼパッドを使用して髪をやさしく取り除き、生理食塩水の湿ったガーゼで余分な脱毛クリームを取り除きます。次に、マウスをウォーマーの新しい清潔なケージの1つに置きます。

超音波ガイド下腫瘍細胞移植の場合は、表面が床と平行になるように超音波プラットフォームを調整し、マウスの頭を右に向けて動物の左側に立ちます。腹部横方向の画像が得られるようにトランスデューサーの位置を調整し、マウスの手足をテープでプラットフォームに固定します。トランスデューサーをゆっくりと下げてマウスの腹部に接触させ、膵臓がはっきりと見えるまでトランスデューサーを調整します。左腎臓と脾臓の位置を特定し、腹腔内の正確な向きを提供します。

注射部位が特定されたら、29ゲージ、半インチのインスリン注射器に25マイクロリットルの腫瘍細胞懸濁液をロードし、滅菌アルコール調製パッドで針先を拭きます。鈍いエッジ鉗子を使用してマウスの皮膚と腹膜壁をつかみ、注射部位の張力を高めます。シリンジを超音波プラットフォームの表面に対して約25〜45度の角度で保持し、針を皮膚と腹膜壁をゆっくりと進めます。針が腹膜壁に穴を開けたことを確認してから、超音波の視覚化を利用して針を直接膵臓に導きます。

針が所定の位置にあるとき、腫瘍細胞をゆっくりと注入します。膵臓内の流体ボーラスの形成は、超音波によって正しく注入された膵臓で明らかになります。懸 ?? 液の全量が注入され、超音波で液体ボーラスを観察できるようになったら、注射器を数秒間静止させてから、注射針をマウス腹部からゆっくりと引っ込めます。.次に、マウスをウォーマーの新しい清潔なケージに入れ、完全に回復するまで監視します。

- 針の深さや角度など、膵臓に針を適切に配置することは、このプロトコルの重要なステップです。輸液ボーラスの可視化は、腫瘍注射の成功を確認するのに役立ちます。注入の深さを制御することは最も難しい側面です。私のアドバイスは、トリパンブルー注射で練習し、超音波と剖検の両方で液体ボーラスを確認することです。