細胞の不均一性を決定するためのシングルセルウェスタンブロッティング

炎症部位には、単球、マクロファージ、白血球など、さまざまな免疫細胞が含まれています。

シングルセルウェスタンブロッティングで不均一な細胞集団を同定するには、ブロック状にパターン化された光活性化可能なポリアクリルアミドゲルからなるプレハイドレートブロッティングチップを取ります。各ブロックには多数のマイクロウェルがあります。複数のブロックにパターニングすると、複数のセルが並行してキャプチャされます。

不均一な細胞集団を含む懸濁液を添加します。ウェルの寸法により、単一セルを沈降させることができます。チップを適切なバッファーで満たされた電気泳動チャンバーに浸します。バッファー内の界面活性剤分子は細胞の膜を破壊し、細胞内容物を放出します。

電界を印加します。放出されたタンパク質はゲル上を移動し、異なるサイズのバンドに分離します。チップを洗浄バッファーで洗浄して、非特異的に結合した分子を除去し、目的のマーカータンパク質を含む細胞タンパク質のみを残します。

ゲルを紫外線にさらし、その表面を活性化し、タンパク質を固定します。

各細胞タイプに特有のマーカータンパク質に特異的に結合する一次抗体のカクテルを添加し、タンパク質-一次抗体複合体を形成します。蛍光タグ付き二次抗体の混合物を分注し、それぞれの一次抗体に結合し、対応する細胞特異的マーカータンパク質を標識します。

チップをスキャナーに入れます。サンプル細胞懸濁液の単一細胞に特異的な対応するタンパク質マーカーの発現レベルに比例する蛍光強度を測定します。