バクテリオファージを列挙するための定量的ポリメラーゼ連鎖反応

濃度が不明な 10 個のバイオパンドファージサンプルと 3 倍鎖の標準濃度の 7 個のサンプルの qPCR プレミックスを調製し、255 マイクロリットルの qPCR マスターミックス、51 マイクロリットルのプライマー、および 102 マイクロリットルの水を含む 51 サンプルのプレミックスが得られます。

調製したPCRミックスの8マイクロリットルを96ウェルqPCRプレートの51ウェルに分注します。次に、これらの各ウェルに2マイクロリットルの加熱処理T7ファージサンプルを加え、qPCRプレミックスの表面下に分注します。粘着フィルムを使用して、プレートを密封します。

蛍光光退色を最小限に抑えるためにプレートをアルミホイルで包み、その後、qPCR装置上でプレートを泳動させます。サイクリング条件と融解曲線の設定を、テキストプロトコルで概説されているように設定します。