大人からOenocytesの解剖キイロショウジョウバエ

こんにちは、私の名前はジョシュア・クルップです。私はトロント大学ミシサガ校のジョエル・レヴィン研究室の博士研究員です。このビデオ記事では、果実の蓋の食道のマルガスターから別の昆虫として果実のバエから成体細胞を分離するために開発した解剖技術を示します。

炭化水素化合物で構成されるワックス状の層が、キューティクルの外面をコーティングします。このワックス状の層は、乾燥に対する耐性を提供し、動物を他の環境問題から保護します。これらの特定の炭化水素化合物のいくつかは、記号化学的シグナルとしても機能します。

そのため、ホルモンのコミュニケーションを仲介し、行動に影響を与えます。細胞、ゲルの細胞は、これらの特定の炭化水素化合物の生産のための主要なサイトであると考えられている解剖方法を示しています。ここで示した解剖された調製物は、成虫のショウジョウバエからの細胞の詳細な分子的および遺伝的分析を可能にします。

この解剖手順には、いくつかの基本的な解剖ツールが必要です。まず、冷やした昆虫培地を分注するためには、パスツールピペットが必要です。第2のタングステンフィラメントは、タングステンフィラメントが最初に細い穴の皮下注射針を通して挿入されるこの針を製造するために細い解剖針を作るために必要です。

これにより、タングステンフィラメントに必要なサポートが提供されます。その後、tsinはゆっくりと炎の中を通過します。これにより、先端のtsinの一部が燃え尽き、非常に細くて非常に鋭い針が作成されます。

次に、SOガード解剖プレートが必要ですので、ガードはいくつかのグレーの色合いで提供されます、または透明にすることができます。SOガードは、解剖ピンを挿入できる柔らかい解剖面を提供します。最後に、必要に応じて細かいナンバー5、解剖鉗子のセットです。

私は解剖ピンを扱うために、古い鈍い鉗子を手元に置いています。これにより、新しい鉗子のセットが損傷するのを防ぎます。次の手順では、その後の細胞の除去のために腹部を準備します。

同じ手順を、キューティクルの内面に付着した他の組織の調製にも使用できます。これらには、心臓と脂肪体が含まれます。生後60日齢の野生型オスを解剖します。

ハエは最初にCO2に素早く麻酔をかけました。フライは解剖プレートに移されます。その後、フライを解剖プレートに固定します。

胸部に細かい解剖ピンを配置することにより、ハエの脚と翼が取り除かれ、3番目の脚のセットが取り除かれ、胸部が腹部と出会うちょうど前のポイントにキューティクルが開きます。次いで、ハエの腹部は、生殖器セグメントに第2の解剖ピンを配置することによって所定の位置に固定される。次に、ハエをシールド、シールド、昆虫細胞で覆います。

中程度の閉じ込められた空気は、PEツアーピペットで吸い出すことで除去されます。次に、鉗子を使用して、腹部の腹側正中線に沿って切開を行います。切開部は、開口部と脚を切除して作成されたキューティクルから生殖器セグメントまで続きます。

これで、腹部から腸と生殖腺を取り外すことができます。腹部と胸部をつなぐキューティクルと気管は、今や切断されています。腹部と胸部をつなぐ唯一の組織は心臓です。

腹部のキューティクルの最前端の角が平らに固定されています。最初のピンを挿入すると、胸部を取り外すことができます。キューティクルの上部ピンを平らに引っ張ると、キューティクルの後部の角、 性器セグメントのピンは、キューティクルを平らにするために再配置する必要があるかもしれません。

これで、解剖の最初の部分は完了です。次に、サイトを削除する方法を示します。腹部フィレ調製物は、キューティクルおよび付着組織の内面を露出させる。

これらの組織には、心臓、脂肪体、気管系、体壁、筋肉、表皮、および細胞が含まれます。心臓は背側正中線脂肪体に沿っています。不透明な組織は、内部のクチクラ表面気管の大部分を覆っています。

白い管状構造は、横方向の球状の開口部から伸びて広範な枝を形成し、脂肪体の下にあるこれらの他の組織に浸潤します。色素沈着した細胞、琥珀色、色は、各セグメントの後部領域でキューティクルの正中線から外側の縁まで放射状に広がり、細胞はキューティクルの暗く日焼けした領域の真下にあり、その位置に関する予備知識がなければ特定が難しい場合があります。各腹部セグメントでは、脂肪体の顕著な葉が細胞の前方にあります。

この脂肪体組織は、多くの場合、その前のセグメントの細胞を覆っています。細胞を露出させるためには、まず背側の血管と脂肪体を取り除く必要があります。成体細胞を解剖する最初のステップは、球状から発せられる気管幹を切断することです。

タングステン解剖針を使用して、キューティクルの内面への接続を切断することにより、脂肪体と心臓を取り除きます。繰り返しになりますが、解剖針を使用して、解剖針の先端を脂肪体と細胞の間に置き、キューティクルの外側の端から正中線までドラッグし、心臓の下を移動して反対側に進み、後部から前部に進行します。脂肪体組織と心臓を各連続するセグメントのキューティクルから取り除きます。

丁寧に行えば、キューティクルに細胞が付着したままになり、脂肪体や心臓を落とすことができます。全身壁の筋肉が細胞をキューティクルの内面にストラップで固定します。解剖針を使用して、各セグメントの縦方向の体壁の筋肉を切断します。

これを行うには、解剖針をエンドサイト鎖の後側に沿って引きずり、キューティクルの表面から鎖をゆっくりと持ち上げます。細胞ストランドのようなリボンはキューティクルから離れているはずで、残りの細胞が取り除かれている間、横に置くことができます。細胞の琥珀色の色素沈着が、これらの細胞を周囲の組織と明確に区別することに注意することが重要です。

この色素沈着の強度は、ハエの年齢とともに増加します。また、基底板と鞘細胞であるこの細胞外材料が細胞クラスターをサポートし、解剖中に細胞が解離するのを防ぐことも注目に値します。基底椎弓板は、これらの接着が容易に破壊される可能性のある弱点を作成することにより、無関係に付着した組織の除去にも役立ちます。

キューティクルから取り出して解剖プレートに横たわると、細胞から脂肪体組織に付着したものをすべて取り除く必要がある場合があります。これは、脂肪体組織と細胞の間に解剖針を配置し、針を解剖プレートに押し下げて接続を切断するだけで行われます。細胞の鎖は、解剖針の先で突くだけで集めます。

解剖針の端にくっついたら、細胞を培養液の表面に引っ張ることができます。解剖した細胞は、RNAまたはタンパク質抽出に適した細胞溶解バッファーに直接配置できます。これで細胞解剖は完了です。

この動画記事をご覧いただき、誠にありがとうございます。ここで紹介した解剖技術が、あなたの研究に役立つことを願っています。あなたの実験で頑張ってください。