細菌バイオマスからの脂肪酸メチルエステル(FAME)の調製

細菌は、脂肪酸などの膜脂質を使用して膜の流動性を調節します。

脂肪酸組成を分析するには、細菌接種物を栄養豊富な寒天プレートに広げ、芝生が形成されるまでインキュベートします。

芝生をこすり落とし、バイオマスをチューブに移し、密封します。

次に、アルカリ性メタノール溶液を加え、ボルテックスして細胞を分散させ、インキュベートします。

アルカリ溶液は膜脂質を分解し、脂肪酸を放出し、非極性脂肪酸メチルエステル(FAME)に変換します。

酢酸を加えてpHを中和し、FAMEを安定させます。

非極性有機溶媒とボルテックスを導入します。

溶媒はFAMEを溶解し、FAMEは上相に集まり、水層や細胞破片から分離します。

上相をきれいなチューブに移します。

窒素流を適用して溶媒を蒸発させます。これにより、酸化を防ぎながらFAMEが濃縮されます。

FAME は分析の準備ができています。

この手順を開始するには、LB寒天培地のプレートの表面に摂氏30度でインキュベートした菌株の一晩培養物を100マイクロリットル広げて、細菌の芝生を準備します。プレートを摂氏30度で一晩インキュベートします。

脂質脂肪酸を得るために、寒天プレートからコロニーをこすり落とし、スクリューキャップとPTFEシールを備えた10ミリリットルのガラス管に約40ミリグラムを移すことによって細菌細胞を収穫します。エステル交換を行うには、メタノール中の0.2モル水酸化カリウム5ミリリットルを新鮮な細菌細胞に加えます。渦を巻き起こし、摂氏37度で1時間インキュベートします。

これに続いて、1ミリリットルの1モル酢酸を加えてpHを7に下げます。次に、3ミリリットルのヘキサンを加え、1分間ボルテックスして脂肪酸メチルエステルまたはFAMEを抽出します。上相をクリーンなチューブに移し、窒素の連続的な流れ下で室温で蒸発させて濃縮し、約200マイクロリットルのFAME抽出物を得る。