Otrial Cancer Cell Colonizationのモデリング:Murine Oothitum Explantsにおける蛍光標識卵巣癌細胞の乳白色スポットコロニー形成を確立するためのex vivo法

腹腔内の脂肪が豊富な組織である大網は、転移性がん細胞がコロニーを形成して二次腫瘍を形成するのに適した微小環境を提供する脂肪貯蔵庫で構成されています。このコロニー形成をex vivoで研究するには、まず透過性膜細胞培養インサートを培養プレート内に配置します。

インサートメンブレンの内側領域にティッシュ接着剤を塗布します。マウス大網外植片を接着剤の上に置き、組織を固定します。蛍光標識卵巣がん細胞の懸濁液を大網の上にそっと播種します。

次に、ウェルの側面を適切な培地で満たして細胞増殖を補い、所望の時間インキュベートします。大網組織には、血管網の周りに詰まった免疫細胞のクラスターである乳白色の斑点と呼ばれる特殊な構造が含まれています。これらの免疫細胞は、がん細胞を引き付けて着床を促進する特定の化学的要因を分泌します。コロニー形成されたがん細胞は増殖し、転移状態をシミュレートします。

最後に、使用済みのメディアを廃棄します。蛍光顕微鏡を使用して培養を観察し、大網組織内の蛍光がん細胞コロニーを評価します。

蛍光タグ付き細胞を増殖および調製し、1ミリリットルあたり200万個の細胞の濃度で再懸濁します。約6マイクロリットルの組織接着剤を培養インサートの膜に塗布し、自然乾燥させます。次に、膜を滅菌水で2回洗浄して過剰な接着剤を取り除き、層流フードの下で膜を風乾させます。

大網を慎重に切除し、滅菌鉗子を使用して接着剤でコーティングされた膜に貼り付けます。組織を膜に1分間付着させた後、各培養インサートの各大網の上に500マイクロリットルの細胞懸濁液を加えます。

次に、トランスウェルチャンバーの周囲を2.5ミリリットルのDME / F-12培地で満たします。大網を細胞懸濁液とともに、5%CO2環境で摂氏37度で6時間インキュベートします。大網を慎重に取り除き、約10ミリリットルのPBSで洗浄します。最後に、適切な蛍光イメージングシステムを使用して蛍光がん細胞の病巣を視覚化します。