液相等電点電気泳動:粗Gymnema sylvestre抽出物から生理活性分子を分離する電気泳動技術

組み立て

済みの等電体集束、IEFセル(液相電気泳動ユニット)から始めます。このカラムは、端に明確なプラス端子とマイナス端子を備えた区画化された水平多孔質チャンバーです。

ここで、さまざまな等電点、pI、分子の正味電荷がゼロのpHを持つ異なる帯電成分の複雑な混合物を含む植物抽出物を取ります。

抽出物には、後でサンプル成分の分別を容易にする可変電荷の両性電解質が補充されています。

カラムのローディングポートにサンプルをロードします。現在、IEF カラムの pH は一定です。次に、高電圧を印加して電気泳動を開始します。

電場の下で、可溶性両性電解質は反対に帯電した電極に向かって移動し、カラム全体に線形のpH勾配を確立します。サンプル成分は液相pH勾配を通って移動し始め、pIより低いpHに位置する成分は正味の正電荷を帯びます。

これらは、成分がpIに到達するまで負極に向かって移動し、そこで電荷が中和され、移動が停止します。同様に、pIを超えるpHの成分は正極に向かって移動し、pIに達すると停止します。これにより、pIに基づいてサンプル成分が焦点を絞ったコンパートメントに分離されます。精製した画分を収穫して、さらに分析します。

0.6ミリリットルの蒸留水にギムネマシルベスタ植物抽出物60グラムを加えます。植物抽出物をローラーチューブで5分間混合して

溶解します。

不溶性粒子を除去するには、溶液を10,000 x g で5分間遠心分離します。上清を150ミリリットルのガラスビーカーに移し、両性溶液を加えて体積比1%、約0.6ミリリットルの溶液を作成します。

50 ミリリットルのシリンジと 1.5 インチ、19 ゲージの鈍い端の針を使用して、サンプル収集ポートから溶液を IEF セルにロードします。次に、セルをスタンドから取り外し、電極チャンバーを軽くたたいて気泡を取り除きます。

ユニットを冷却水に接続します。一定の15ワットで電力が供給された状態で、分別を開始します。電圧が一定値に達するまで、IEFユニットを約3時間実行します。

Harvest ONボタンを押した後、フラクションコレクターピンを回収ポートに合わせます。ピンをシーリングテープに通して、ギムネマシルベスタ画分の収集を開始します。