ニューロン髄鞘形成のための背根神経節外植片とシュワン細胞の共培養

ポリ-D-リジンでコーティングされたカバーガラスとニューロン増殖培地を含むマルチウェルプレートから始めます。

感覚ニューロンが豊富なマウス胚後根神経節(DRG)をこのウェルに入れ、インキュベートします。

DRG ニューロンは、成長を促進する栄養素と成長因子を利用し、その後ニューロンの突起を拡張して軸索を形成します。

これらの軸索はDRG組織から成長し、DRG外植片培養を確立します。

培地を、特殊なグリア細胞であるシュワン細胞を含むアスコルビン酸を添加した共培養培地と交換します。

時間が経つにつれて、軸索は軸索へのシュワン細胞の移動を引き起こすシグナル伝達分子を分泌します。

一方、アスコルビン酸はシュワン細胞内のさまざまなシグナル伝達経路を刺激します。

これらの活性化された細胞は、脂質が豊富な原形質膜を軸索の周りに伸ばし始め、軸索を複数の層で包み込んでミエリン鞘を形成します。

この髄鞘形成により、軸索の周囲に絶縁覆が形成され、効率的なニューロンのコミュニケーションに不可欠です。

各ウェルに190マイクロリットルのDRG増殖培地を含む4ウェルプレートを取り、細い鉗子とへらを使用して、1つのDRGを各ウェルの中心に慎重に移します。次に、DRG外植片培養物を摂氏37度、二酸化炭素5%のインキュベーターに入れます。翌日、50マイクロリットルのDRG増殖培地を各ウェルに注意深く追加し、顕微鏡を使用してDRG外植片の付着と軸索の成長を毎日観察します。DRG外植片培養の3日目の共培養のために、DRG増殖培地をウェルあたり30,000個のシュワン細胞を含む250マイクロリットルの共培養培地に慎重に交換しました。