成体マウスにおけるジカウイルス誘発性神経変性のモデル確立

定位固定フレームに固定された麻酔をかけたマウスを取ります。加熱パッドは体温を維持します。

頭皮を剃って滅菌し、正中線を切開して頭蓋骨の目印であるブレグマを露出させ、注射位置を特定し、小さな穴を開けます。

ジカウイルス懸濁液を脳組織に注入します。逆流を防ぐために、針をゆっくりと引き抜きます。

頭皮を縫合し、マウスをケージに移して回復します。

ウイルスは、神経前駆細胞(NPC)とグリア細胞が豊富な領域である脳室下ゾーンに到達します。

ウイルスはNPC受容体に結合し、エンドサイトーシスされます。ウイルスの複製は細胞ストレス応答を引き起こし、アポトーシスを誘導します。

常在免疫細胞であるミクログリアはウイルスを飲み込み、周囲の組織に損傷を与える酸化バーストを引き起こします。また、サイトカインや神経毒性因子を放出し、細胞傷害性T細胞を動員してウイルスに感染した細胞を殺します。

結果として生じるNPCとグリア細胞の枯渇は、ウイルス誘発性の神経変性を反映しています。

麻酔をかけた成体マウスの頭を定位固定装置に固定し、マウスの下に加熱パッドを置きます。

ま先または尻尾をつまんで麻酔の外科的平面を確保した後、目の後ろから耳の始まりまで頭皮を剃ります。露出した皮膚をヨウ素と70%エタノールで滅菌しました。滅菌部位の頭部内側矢状線に沿って0.5センチの切開を行い、ブレグマを露出させた後、頭蓋骨の表面から髄膜組織を取り除き、同時に皮膚を注射部位から遠ざけます。

外科用ドリルビットをブレグマに合わせ、定位座標によって注射部位を特定します。コントロールフットペダルを使用して、針の穴が空くまで頭蓋骨にゆっくりと穴を開けます。ドリルビットをマイクロインジェクターポンプと気密性のある10マイクロリットルシリンジに交換します。

生理食塩水とウイルスの間に小さな気泡を残し、4〜5マイクロリットルのウイルスを引き上げます。針を脳表面から脳表面から1.5ミリメートル下まで下げ、1マイクロリットルのウイルスを毎秒10ナノメートルの速度で注入し、1マイクロリットルを1.5分かけて注入します。先ほどのように脳から針を少しずつ抜いた後、鉗子を使って皮膚をほぐし、露出した頭蓋骨を回復させる。頭皮を4-O縫合糸で縫合したら、マウスをステレオタックスから取り外し、回復するまで加熱パッドで監視します。