トランスジェニックマウスモデルにおける熱誘発性発作の誘発とモニタリング

抑制性介在ニューロンの機能不全に至るナトリウムチャネルの機能不全につながる遺伝子変異を持つ麻酔をかけたトランスジェニック成体マウスを取り上げます。

潤滑された直腸プローブを固定して体温を監視します。

体温が安定するまでマウスを回復ケージに入れます。

次に、動物を予熱した加熱室に移し、ビデオ録画を開始します。

マウスの体温が徐々に上昇する様子を監視しながら、定期的にチャンバーの温度を上げます。

体温が上昇すると、ナトリウムチャネルの機能不全が悪化し、抑制性神経伝達物質の放出が減少します。

この放出の減少により、ニューロンの興奮と抑制のバランスが崩れ、ニューロンの過興奮と発作が引き起

発作中の体温を記録し、その行動特性に注意してください。

次に、体温が正常になるまでマウスを冷却パッドの上に置きます。

最後に、直腸プローブを取り外し、マウスを回復させます。

電源オンボタンでマウスのヒートチャンバーのスイッチを入れ、次にヒートオンボタンを押します。デジタル温度コントローラーのキーパッドを使用して、ヒートチャンバーの温度を摂氏50度に設定します。ヒートチャンバーの床に穂軸寝具を敷きます。

ヒートチャンバーの前にビデオ録画カメラを取り付けます。直径140mmのペトリ皿にティッシュペーパーを厚く敷き、氷の上に置いて冷却パッドとして使用します。スクリーニングアッセイでは、マウスの体重が15グラム以上であることを確認します。手順を開始する前に、マウスがつま先をつまんで完全に麻酔されていることを確認してください。

直腸温度プローブの金属先端に潤滑剤を塗り、マウスにそっと挿入します。直腸プローブをマウスの尾にテープで固定します。穂軸の寝具で裏打ちされた新しい回復ケージにマウスを置きます。タイマーを起動し、マウスが麻酔から完全に回復し、温度が摂氏35〜36度に安定するまで、深部体温を監視しながらマウスを5分間観察します。

5分が終わったら、マウスの体温を0分の初期体温として記録します。マウスを予熱したマウス加熱チャンバーの床にすばやく移して、実験の試験を開始します。マウスを予熱したマウスチャンバーに入れたら、カメラとストップウォッチを起動します。

マウスの体温が毎分摂氏0.25〜0.5度の速度で上昇するように、定期的にヒートチャンバーの温度を上げます。実験中、マウスの体温を1分間隔で記録し始めます。9.5分でヒートチャンバーの温度を55°Cに設定し、10分目までにヒートチャンバーの温度を55°Cに安定させます。

同様に、20分までにヒートチャンバーの温度を摂氏60度まで安定させます。各発作スクリーニング試験は 30 分間続きます。マウスが発作を起こした場合は、発作中のマウスの体温を発作閾値温度として記録します。マウスによって表示される発作行動の特徴に注意してください。

次に、チャンバーからマウスをすばやく取り出し、冷却パッドの上に置きます。マウスの体温が摂氏36度から37度まで下がったら、マウスを回復ケージに移します。マウスから直腸プローブを取り外すには、マウスの尾と直腸プローブワイヤーの間のテープを慎重にカットします。