成体のショウジョウバエにおける貫通性外傷性脳損傷の誘発

新たに出現した遺伝子組み換え成体のショウジョウバエのハエを考えてみましょう。

ハエの脳内のキノコ体には、緑色の蛍光タンパク質を発現するニューロンが含まれています。

キノコ体は、学習と記憶に不可欠な複雑なニューロンネットワークを含む構造です。

酸化炭素パッドの上でハエを麻酔します。

必要なフィルターを備えた実体顕微鏡下で、緑色の蛍光を発現するキノコの体を視覚化します。

消毒したミニュティエンピンを取り、ヘッドカプセルを通してキノコの本体に押し込みます。

これはキノコ体のニューロンに損傷を与え、ニューロンネットワークを破壊し、貫通性外傷性脳損傷を引き起こします。

次に、フライからピンをそっと取り外します。

負傷したハエを餌の入った小瓶に入れ、さらなる研究のために回復させます。

酸化炭素パッドでハエを麻酔した後、羽化後6時間以内に新しく閉鎖されたF1の若いオスのハエを選別し、バイアルあたり40匹以下のハエの餌を入れた清潔なバイアルに入れます。次に、70%エタノールで満たされた1.5ミリリットルの微量遠心チューブに約100本のピンを5分間入れて、ミニチュンピンを消毒します。次に、絵筆で二酸化炭素パッドを消毒し、70%エタノールをスプレーし、糸くずの出ない清潔なティッシュで拭いて乾かします。

ツールがきれいで乾いたら、40個以下の選別されたF1オスをクリーンパッドに移し、2つのグループに分けます。1 つのグループは無傷のハエを対照し、2 番目の実験グループは貫通性外傷性脳損傷を受けます。次に、鉗子を使用して、微量遠心チューブから4〜5本の新しいミニチュンピンを引き出し、二酸化炭素パッドの端近くに置きます。次に、解剖範囲の下で、鋭い先端を持つまっすぐなミニチュンピンを選択します。鋭利なピンを再利用し、損傷したピンや鈍いピンを70%エタノールを含む別のチューブに入れて、安全に廃棄してください。

次に、標準的なクロス遺伝子型のハエの場合、440〜460ナノメートルでの励起を可能にし、500〜560ナノメートルでの可視化を可能にする緑色蛍光タンパク質用の適切な励起および発光フィルターを備えた実体顕微鏡LEDランプをオンにします。次に、実験グループからハエを選択し、実験者がハエの頭を右に向けたヘッドカプセルの背側を望むようにハエを配置します。鉗子を使用して、選択したミニチュンピンを片手に持ち、もう一方の手で絵筆を持ち上げます。次に、背側胸部の内側にブラシを置き、軽く押し下げてフライを安定させます。

ミヌティエンピンの先端をキノコの体、頭の右側の細胞体に向け、頭嚢を貫通します。ランドマークを使用する場合は、オセリと目の背縁の間の背側頭キューティクルをターゲットにします。怪我を終えたら、絵筆を使って頭をミニチュンピンからそっと押し出します。RNAシーケンシングまたはqRT-PCRに脳を使用する場合は、頭の左側に2回目の損傷を負います。すべての実験ハエが負傷したら、対照ハエと負傷したハエを、食物の入った別々のラベル付きバイアルに入れます。