神経幹細胞の活性化と移動を研究するための最小限の脊髄損傷モデル

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胸椎をサポートするように丸められたガーゼで定位固定装置に固定します。

皮膚を消毒し、垂直方向の正中線を切開し、皮膚を引っ込めます。

胸椎から筋腱を外して引っ込めます。

対象の椎骨を特定し、椎間関節を切断して取り除きます。

脊髄を露出させ、正中線の両側に曲がった針を挿入します。

針の挿入は、中心管を無傷のままにしながら、軸索束を含む外側の脊髄層である白質に表在性損傷を引き起こします。

針を抜いてから、筋肉と皮膚を縫合します。

損傷した細胞は、組織に常在する免疫細胞を活性化するシグナルを放出し、それが中心管を取り巻く神経幹細胞(NSC)を活性化します。

活性化されたNSCは損傷部位に移動し、組織の修復を助けます。

手順を開始する前に、バリカンを使用して、麻酔をかけたマウスの背から背中の中央から首と耳までの毛皮を取り除きます。マウスを定位固定装置に固定した後、腹の下に丸めたガーゼを4〜5枚置き、尾の付け根を軽く引っ張って体と背骨をまっすぐにします。

胸部ガーゼロールをマウスの腹部から胸部上部に向かって吻側に押し、胸椎を支えます。そして、実験用テープを使用して、尾と手足を星のような向きに固定します。露出した皮膚を連続した70%エタノールとポビドンヨウ素綿棒で消毒した後、10番のメスの刃を使用して、両肩甲骨の中点から胸椎の湾曲まで、動物の縦軸に平行に垂直に切開します。

皮膚を引っ込めて軟部組織と脊柱の輪郭を露出させ、肩甲上脂肪パッドの下縁を特定します。次に、メスを使用して、椎骨のT5からT8および9の骨の両側に沿って慎重に、しかし力強く切断し、脊柱から背筋腱を切り離します。リトラクターの歯が脊椎の両側の切開部位に挿入されるようにリトラクターを再配置し、各リトラクターを拡張して、収縮した筋肉層に過度の負担をかけずに、脊椎が十分に持ち上がるまで露出を調整します。

手術用顕微鏡下で、脊椎を覆う残存筋やその他の軟部組織を注意深く洗浄して椎骨を露出させ、歯付き鉗子で椎骨の棘突起を握り、鉗子をわずかに上下に動かして、除去する椎骨を特定します。次に、湾曲した鈍いハサミの先端を、切除する椎弓板の尾側の露出した椎間孔の両側に挿入し、接続する椎間関節を両側に切断します。次に、椎弓板を上に持ち上げ、椎弓板の上部付着部を切り取り、骨を分離して除去します。

椎板を切り取って取り除くときは、下にある脊髄を損傷しないように、常にはさみを上向きに傾けるように注意してください。

側正中静脈を目印として、30ゲージの針先の斜角側を上にして、脊髄の背外側表面に1ミリメートルの深さ、正中線の両側に約0.5ミリメートルの深さに挿入します。針を尾側から吻側方向に約2ミリ動かして、ベベルの全長がコードに挿入されるようにします。次に、入り口のパスをたどって針を取り外します。

傷を閉じるには、レトラクターを取り外し、6-0吸収性縫合糸を使用して正中線に沿って損傷の両側の背中の筋肉を結合し、4-0シルク縫合糸を使用して上にある皮膚を閉じます。