生きたマウス海馬における蛍光標識ニューロンの縦断的2光子イメージング

ま

ばらな錐体ニューロンに蛍光タンパク質を発現する麻酔トランスジェニックマウスを取ります。

マウスは、背側海馬にイメージングカニューレを埋め込まれます。

マウスを二光子顕微鏡の下の加熱パッドの上に置き、カニューレのヘッドプレートをホルダーに固定してヘッドを固定します。

角膜の乾燥を防ぐために軟膏を塗ります。

カニューレを脱イオン水で洗浄し、低倍率の対物レンズで検査して、破片、損傷、蛍光の問題がないか確認します。

正確なイメージングのために、イメージングカニューレを顕微鏡の光軸に合わせます。

次に、水浸高解像度対物レンズに切り替えます。

カニューレに脱イオン水を入れ、画像の歪みを避けるために気泡がないようにします。

赤外光を使用して 2 光子縦方向イメージングを実行し、焦点面の蛍光色素を選択的に励起し、深部組織イメージングを可能にします。

埋め込まれたカニューレは、背側海馬への繰り返しアクセスを容易にし、時間の経過に伴う樹状突起の変化を追跡します。

マウスを顕微鏡下で加熱カーペットの上に置き、ヘッドプレートをホルダーに固定します。動物の目に眼軟膏を塗ります。次に、注射器と細い針を使用して脱イオン水をカニューレに滴下し、真空ポンプで取り外してイメージングカニューレを洗浄します。

低倍率、長距離の対物レンズを使用して、カニューレに残留水、汚れ、完全性、蛍光の存在を目視でチェックします。次に、ヘッドホルダーアームの角度を調整して、カニューレを視軸に合わせます。

開

口数1.0、作動距離4mmの25倍対物レンズに切り替えます。次に、カニューレを満たすために十分な脱イオン水を追加し、カニューレの上に余分な水を維持します。最後に、2つの光子励起を使用して、蛍光シグナルを画像化します。