マウス乳腺に局在薬物送達のための管内注入

マウス乳腺水性試薬の非侵襲管内送達のためのプロトコルが記載されている。この方法は、特に乳管を対象とした乳腺の乳首にローカライズ注入を利用しています。この技術は、siRNA、化学療法剤および小分子を含む化合物の様々な適合可能である。

この手順の全体的な目標は、マウスの乳腺に水性試薬を非侵襲的に送達することです。入門。これは、最初にマウスに麻酔をかけ、乳首の周りの毛を取り除くことによって達成されます。2つ目のステップは、マイクロピンセットを使って乳首の先端を覆っている古い角質を取り除く方法です。

次に、33ゲージの針を使用して乳首に水溶液を注入します。最後のステップは、潜在的な腫れのために注射部位を観察することにより、注射が成功したことを確認することです。最終的に、手順の成功は、エバンスブルー注射後の延性ツリーの視覚化によって判断できます。

この方法は、記憶腫瘍形成のさまざまな段階における特定の遺伝子の寄与など、乳がん領域の主要な質問に答えるのに役立ちます。まず、注射前に各マウスに注射する160マイクロリットルの0.2%エバンスブルー色素を滅菌リン酸緩衝生理食塩水で調製します。各マウスの体重を量り、その体重を記録します。

次に、isofフッ素チャンバーを使用してマウスを一度に1つずつ麻酔し、眼の潤滑剤を塗布します。鎮静したら、イソフッ素鼻を置き、処置前にメロキシカムを1キログラムあたり5〜10ミリグラムで注射します 処置中の鎮痛剤として、マウスの呼吸数の変化を継続的に監視し、それに応じてイソフッ素のレベルを調整します、特にマウスの呼吸数が麻酔のレベルを下げる必要があることを示している場合。次に、市販の脱毛クリームを塗って、乳首部分に注射する準備をします。

5分待ってから、コットンチップアプリケーターで抜け毛をそっと取り除きます。円を描くように動かして、湿らせたペーパータオルをぬるま湯で溶かし、残ったクリームを取り除きます。次に、四肢をそっとテープで留めてマウスをステレオスコープの下に固定し、アルコール綿棒で注射部位を清掃します。

まず、ステレオスコープの下に注入する乳首の位置を特定します。次に、細かいマイクロ解剖ピンセットを使用して、乳首の開口部を覆っている古い皮膚を取り除きます。注射のために乳首を切る必要はありません。

次に、11マイクロリットルの注射液を、33ゲージの金属ハブニードルが取り付けられた50マイクロリットルの注射器にロードします。注入後に1マイクロリットルの注入液が漏れることが多く、その結果、10マイクロリットルの溶液が注入されることが最終目標となります。細いピンセットで乳首をやさしく持ち、少し持ち上げて注射用の位置に置きます。

腺の最初と最後のペアの各腺に11マイクロリットルを注入します。これは、腺の延性ツリーを完全に満たすために中央のペアよりも少ない体積を必要とするためです。次に、乳腺の2番目から4番目のペアの各腺に21マイクロリットルを注入します。注入速度は、管内腔内で急速に移動する流体によって引き起こされる潜在的な損傷を最小限に抑えるために、毎分約40マイクロリットルに維持する必要があります。

注射後。注射部位を観察します。乳首の領域や周囲の組織に外傷の兆候があってはなりません。

乳首の周囲の腫れ。おそらく、乳管注射が成功したのではなく、乳腺脂肪パッド注射を示しています。次に、動物をノーズコーンから取り出し、回復のために別のケージに移動します。

ケージをヒートランプの下に置くと、低体温症を防ぎ、回復を助けます。動物を一人で飼育し、意識と可動性を取り戻すまで注意深く監視します。研究が完了したら、隔離されたチャンバー内でCO2圧縮ガスに続いて子宮頸部脱臼によってマウスを安楽死させます。

次に、乳腺を切除し、目的の分析のための適切なサンプルの取り扱いを続けます。ここに示されているのは、エバンのブルーダイを乳首から注入する前と後のマウスの乳腺です。乳首領域には腫れや組織の損傷は見られませんが、これは管を囲む脂肪パッドに染料を注入することによって引き起こされるでしょう。

右の画像に見られる拡散性の青色の染料は、正しい注入の良い指標です。これは、腺全体または腺の切除後の断面を見ることで検証できます。ここに示すマウント全体の解析では、エバンスブルーの注入されたグランドは、ネイティブのアヒルの構造を損傷することなく、染料で満たされたグランド全体を示しています。

これは、延性構造を強調するCarmen Dyeでも確認されています。また、この方法を利用して、irnaなどの治療用分子を乳管細胞に送達することも可能である。ここに示す画像では、鎌状フィリンを標的とする蛍光タグ付きirnaに非必須遺伝子を注入し、48時間後に組織を画像化して分子の局在を示しました。

この手順に従います。SRNAノックダウンのような他の方法は、記憶発達または腫瘍形成における特定の遺伝子の役割に関連する追加の質問に答えるために実行できます。