卵巣がん再発を検出し、モニターするための非侵襲的イメージングのためのマウスモデル

卵巣癌の成長と再発の検出、定量化、モニタリングを可能にする非侵襲的な動物イメージングプラットフォームについて説明します。この腹腔内異種移植モデルは、卵巣がん患者の臨床プロファイルを模倣しています。

この手順の全体的な目標は、卵巣がん患者で観察される臨床プロファイルを模倣する腹腔内卵巣がん異種移植モデルを確立することです。これは、ヌードマウスにmCherry蛍光標識卵巣がん幹細胞を子宮内注射することで達成されます。次に、腫瘍の進行の確立と治療に対する反応を、腫瘍負荷の代用として蛍光を測定することによって決定します。

これにより、マウスを犠牲にすることなく、腫瘍の進行や治療への反応をリアルタイムでモニタリングできます。ここに示すモデル。Bは卵巣がん患者で観察された臨床プロファイルを再現しているため、疾患の生物学を研究するだけでなく、特に再発性卵巣がんに対する新しい治療法を特定することもできます。

このモデルにより、腫瘍の進行をモニタリングして、腫瘍が化学療法に反応するかどうかをリアルタイムで判断し、化学療法を中止した場合に病気が再発するかどうかを判断できます。この手順を開始するには、生後7〜8週齢の胸腺ヌードマウスに2%isofフッ素を麻酔します。次に、フットパッドをつまんで完全に麻酔されていることを確認します。

次に、動物をその右側に置き、頭を実験者から離して滅菌ガーゼパッドを置きます。その後の麻酔下での乾燥を防ぐために、両目に軟膏を塗ります。イソフルラン気化器に接続されたノーズコーンシステムに動物の頭をすばやく挿入します。

アルコールパッドを使用して腹部の右側を消毒し、続いてヨウ素を消毒します。次に、滅菌された外科用ハサミと鉗子を使用して、滅菌外科用ドレープをその上に置きます。マウスの左下象限に1〜2センチメートルの皮膚切開を行います。

その後、筋肉を持ち上げて切開し、腹膜に到達します。その後、斜筋を解剖して腹腔を露出させます。次に、滅菌止血クランプを使用して、ホーンの前面と後部の両方で左子宮ホーンを見つけます。

前部クランプを卵管の真下に配置し、後部クランプを子宮頸部の真上に配置します。この時点で、2 番目の実験者を用意します。針を含む細胞をホーンに対して垂直な45度の角度で配置することにより、細胞懸濁液を注入します。

次に、50マイクロリットルの細胞懸濁液を子宮角の内腔にゆっくりと注入します。次に、前方クランプを放し、続いて後方クランプを放します。その後、子宮角を腹腔に戻します。

合成吸収性縫合糸を使用して腹膜を閉じます。次に、ティッシュ接着剤を使用して皮膚を閉じます。終了したら、マウスをノーズコーンから取り外し、ケージに戻します。

動物を放置する前に、動物が目を覚まし、活動していることを確認してください。手術後最初の48時間は飲料水にイブプロフェンを供給します。.次に、分子イメージングソフトウェアを開き、次にMarsCaptureソフトウェアを開きます。

このモジュールは、イメージングシステムのキャプチャおよび分析機能を活用しながら、火星のキャプチャ設定の調整制御を提供します。次に、所定のキャプチャ値を入力します。その後、パラメータを個別のセッション・ファイルとして保存します。

次に、create edit protocolsボタンを選択して回転シーケンスプロトコルを作成します システムインターフェースの取得ウィンドウから、以前に保存した蛍光セッションファイルを選択し、ステップ1として保存します。次に、対応するX線セッションファイルを選択し、ステップ2として保存します。ステップ 1 が選択されている状態。

「画像キャプチャ前」ポップアップメニューの「回転シリーズを設定」を使用して、目的の開始角度の範囲と増分を設定します。フィーチャをシームレスに視覚化するために、特定の値には、開始角度 (マイナス 180 度)、範囲 375 度、増分 15 度が含まれます。プロトコルを保存し、「完了」ボタンをクリックして火星を初期化します。

次に、取得メニューのプレビューボタンを選択してローテータータブを表示し、Mチェリーイメージングで指定されている蛍光キャプチャ設定を使用してアライメントを開始します。プレビュー中はドアを開けたままにしておくと、位置決めが速くなり、位置合わせ手順中にマウスの位置を目視で確認することもできます。次に、マウスのロードオプションを選択し、一連のポジショニングメニューに進みます。

折りたたみ式ノーズコーンのチューブ付き端がノーズコーンのくぼみにあることを確認します。次に、麻酔をかけたマウスを腹臥位にして、頭を鼻円錐に置きます。動物の腹側を下に向けて、0度の位置でキャリブレーションを開始します。

回転システムの 2 つのノブを使用して、動物がプレビュー ウィンドウの中央に表示されるように配置します。マイナス 180 度、マイナス 90 プラス 90 度、プラス 180 度の位置を求められたとおりにプロセスを繰り返し、[完了] をクリックします。以下は、取得した画像から生成された動画の例です。

この図は、腹腔内腫瘍負荷と蛍光X線重ね合わせ画像との相関を示しています。F two Mチェリー卵巣癌細胞の注射後約32日後に2Dイメージングを行い、マウスを犠牲にして取得した画像を実際の腫瘍量と相関させました。そして、ここに示されているのは、マルチアングルイメージングと、制御中の腫瘍、治療されたパクリタキセル、および再発マウスの検出を可能にする回転データセットです。

パネルごとに 1 つのマウスの画像が表示され、Mars システムを使用して回転します。腫瘍量が大きい対照マウスであっても、画像を撮影した角度によっては腫瘍のサイズが過小評価される可能性があることに注意してください。このビデオを見れば、子宮内経路を用いた腹腔内卵巣がん異種移植モデルを確立するとともに、マルチモーダル回転システムを用いた生きた動物イメージングができるようになるはずです。