内分泌と外分泌リプログラミングおよび増殖のためのモデルとしての膵管の連結を介して、マウスの膵臓への外科的損傷

この手順の全体的な目標は、げっ歯類の成体膵臓に重篤な損傷を誘発して、ベータ細胞の新生と増殖を可能にする環境を確立することです。これは、最初に正中線開腹術を実施して膵臓の露出を可能にすることによって達成されます。次に、膵臓の頸部領域にある主要な膵管を、2つの外科的結び目を使用して結紮します。

最終ステップでは、部分的な管結紮または PDL 膵臓が採取されます。最終的には、免疫組織化学分析とQ-R-T-P-C-Rを使用して、部分的な管結紮によって誘発される組織リモデリング、内分泌増殖、および新生に関与する因子を研究します。この技術が、膵臓切除術や化学的ベータ細胞アブレーションなどの他の膵臓損傷モデルと比較した場合の主な利点は、部分管結紮術が膵臓組織の除去やベータ細胞の破壊を伴わない簡単な手順であることです。

ラットの膵臓による部分管結紮術は、20年以上前に当研究所に導入されています。私たちは、この技術をマウスに応用して、遺伝的細胞系譜の追跡、および機能喪失と獲得実験を容易にしました。これらの実験条件下でベータ細胞の生成の背後にあるメカニズムを評価するには、手順を開始する前に、8週齢の麻酔をかけたマウスの腹部である胸部を消毒します 消毒剤クロルヘキシジン溶液。

次に、腹部の2.5 x 1.5センチメートルの部分を剃り、消毒剤とエタノールを交互にスクラブして手術部位を消毒します。最後のスクラブの後、つま先で麻酔の適切な深さを確認します。動物をつまんでからドレープします。

次に、滅菌ブレードを使用して、滅菌ハサミを使用して剣状突起から臍まで伸びる、皮膚の上部正中線切開を行います。下にある線形肘と腹膜を分離して、上腹部の象限を露出させます。次に、胃を上に移動して脾臓を露出させます。

次に、膵臓の脾葉または尾部を露出させます。次に、十二指腸と上部空腸の一部を右上腹部の象限にそっと引っ込めて、膵臓の頭、首、体を露出させます。膵臓の頸部に膵管の主管を配置します。

膵臓の体と尾の領域が露出して、膵管が結紮します。6.0縫合針を首の領域の下に慎重に配置し、門脈の左側に結紮して、胃十二指腸葉と脾葉を分離します。2 番目のライゲーションを 1 番目のライゲーションに近接して配置し、ローブが適切に分離

次に、臓器を腹腔に戻し、4本のゼロポリグリコール糸状糸を使用して、連続縫合パターンで筋肉層を閉じます。最後に、不連続な縫合糸で皮膚を閉じ、動物が完全に回復するまで動物を監視します。PDL膵臓はサイズが縮小され、ほぼ半透明に見えます。

アイレットが小さな白い点として表示されると、膵臓の頭部は不透明なピンク色で表示され、滅菌ハサミを使用して明確な外分泌LOIを識別できます。脾臓に沿って切断し、膵臓の結紮尾部を脾臓および膵臓の尾部を内臓に接続する結合組織から分離します。次に、イオンのすぐ前でPDLテールをカットします。

同様に、偽の尾組織を分離します。ただし、偽の膵臓の尾部と頭部の領域はどちらも不透明なピンク色であることに注意してください。両方の部分を別々に分離するには、首の領域で偽結紮した膵臓を切断します。

PDLが正しく実行されると、マウスは健康に見え、体重や血糖に大きな差は見られません。偽手術動物と比較して、PD L手術後、外分泌アサール組織は徐々に失われ、その結果、PDLの3日後にライゲーションされたPD Lテールのサイズと重量が減少します。その結果、テインR組織の形態は明らかなアサール細胞のアポトーシスで破壊されます。1週間後、膵臓組織は浸潤したCD45陽性免疫細胞に飲み込まれます。

2週間後、多くのASIN r小葉が線維性組織と脂肪組織に置き換わり、PD L尾膵臓が半透明に見え、アイレットが肉眼で見えるようになります。アサールアポトーシスの開始と同時に、延性上皮の細胞活性の増加も観察されます。さらに、PDLの2週間後、PDL尾部の総ベータ細胞量は、非ライゲーション偽尾部で観察されたものと比較して2倍になり、ベータ細胞の増殖の増加、胚性内分泌前駆細胞マーカーニューロゲンの活性化が3つに伴います。

この手順を試行する際は、手術のすべてのステップで適切な無菌技術を使用し、下にある動脈と周囲の組織への損傷をできるだけ最小限に抑えて膵管の結紮を行うことが重要です。この手順に続いて、細胞の運命および起源に関する追加の疑問に答えるために、部分管ライゲーショントランスジェニックマウスにおける系統追跡などの他の方法を実施することができる。PD Lの後。