マウス モデルにおける膵島の門脈内移植

私はトーマス・リン、ユストゥス・リービッヒ大学(ドイツ、ギーセン)の糖尿病研究グループの主任研究者です。膵島移植は、1型糖尿病の治療薬です。実験的には腎臓嚢への膵島移植が行われますが、臨床プログラムでは門脈内ルートが好まれます。

したがって、前臨床モデルでは、門脈内膵島移植に関するより多くの研究が必要であると考えています。例えば、移植部位が血管内であるため、膵島部位が血液にさらされる。さらに、マイクロサージェリーの技術にはある程度の経験が必要です。

例えば、門脈の注入後、出血が起こることがあり、または麻酔またはレシピエントマウスの体重の維持に問題がある可能性があります。そのため、手順を視覚的に説明することが重要だと考えています。このビデオでは、膵島移植のポータル内ルートに焦点を当てています。

糖尿病マウスで正常な血糖を達成するために、黒色マウスの同系および同種移植だけでなく、ヌードマウスレシピエントの同系モデルにも使用できます。隔離された島をインキュベーターから取り外し、フローベンチの下に置きます。ペトリ皿の円を描くように揺れるように膵島を中央に配置します。

青い針の助けを借りて、1mlの注射器に100マイクロリットルの培地を満たします。次に、300マイクロリットルのハンクの溶液に350の小島を追加します。シリンジを垂直位置に保ち、小島が落ち着くようにします。

容量を50マイクロリットルに減らします。青い針を茶色の針に交換します。同じシリンジに150マイクロリットルの密度勾配媒体を上部に追加し、シリンジ内の最終容量200マイクロリットルに到達します。

気泡を避けてください。シリンジを垂直位置に保ちます。膵島の凝集を避けるために、少し回転させます。

小島は2〜3分以内に注射器の円錐形に落ち着きます。ストレプトゾトシン注射の3日後、ハンドヘルドグルコースメーターの助けを借りて尾静脈を穿刺することにより、血糖値を確認します。腹腔内注射により、マウスにダルジロジンとケタミンを麻酔します。

マウスを温かいサーマルプレートの仰臥位に置きます。つま先をつまんで深さ麻酔を確認します。スキンレス感染剤で肌をきれいにします。

目の乾燥を防ぐために、目の軟膏で目を湿らせてください。鉗子で皮膚を保持し、ハサミで2〜3センチメートルの長さの中央切開を行うことから、エレクトロトミーから始めます。傷口の縁の周りに滅菌済みの濡れたガーゼを敷き、湿らせます。

腸を腹腔の左側と外側に保ちます。十二指腸を動かし、膵臓を見つけます。指と親指を使用して、門脈を露出させます。

200マイクロリットルの膵島をゆっくりと門脈に注入します。人差し指で穿刺部位に6分間圧力をかけ、出血を止めます。腸のその場、腹膜、腹筋の層を慎重に元の位置に戻します。

鉗子を使用して、皮膚を持ち上げ、筋肉の切開部を閉じ、吸収性シルク縫合糸で皮膚の上部層を覆います。創傷治癒剤を塗布します。温かいサーマルプレートで体温を摂氏37度に保ちます。

マウスが十分な意識を取り戻すまで観察してください。痛みを管理するために、トラマドールと液体を提供します。.膵島の移植後、ストレプト誘発性糖尿病マウスでは、血糖値が1リットルあたり23ミリモルから1リットルあたり4.6ミリモルに、初日に突然低下することが観察されました。

正常な血糖は最大121日間維持されました。.体重と血糖値はほぼ同じパターンをたどりました。ストレプトゾトシン注射と手術の後、体重は減少しました。2日目以降は、25.3グラムから29.7グラムに通常に向かって上昇する傾向があります。

膵島移植後のメジャー組織適合性ミスマッチマウスでは、血糖値は1リットルあたり4.4ミリモルに低下し、正常な血糖値は最大10日間観察されました。その後、拒否し始めます。糖尿病マウスの体重も同様のパターンをたどります。

移植された膵島の肝臓への生着の成功。この研究では、膵島移植の門内ルートが調査されます。このプロトコルは、糖尿病のストレスを緩和するのに非常に効率的であり、膵島移植を探求する深い機会を提供します。

このプロトコルは、約350の膵島が高血糖状態を逆転させることができることを確認しています。さらに、処置中に死亡したマウスはなく、血糖コントロールは維持されました。