Name: 期産期新生児ラットにおける幹細胞の気管内植在 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 27 s
Description: 学ぶ新生児ラットの気管内幹細胞移植法。間葉系幹細胞を肺に直接投与し、新生児肺疾患治療の有効性を評価する実験手法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

この研究の一部は、メリディゲンバイオテック株式会社台湾台北(A-109-008)からの助成金によって支えられた。

この手順は、台北医科大学動物のケアと使用委員会によって承認されました.
注:ヒトMSCは、緑色蛍光タンパク質(GFP)およびホタルルシメラーゼ遺伝子(Fluc)を安定的にトランスフェクトし、商業会社(材料表)から入手した。
1. ホタルルシファーゼと緑色蛍光タンパク質を用いたヒトMSCの特性評価
<ol><li>GFPおよびFlucにトランスフェクトされたヒトMSCを完全な培地(最小必須培地-α修飾[αMEM]、10-15%ウシ血清[FBS]、2 mM L-グルタミン、1 ng/mL塩基性FGF、およびPSFを補う)を37°Cで飽和湿度および5%CO2で維持する。合流度70-90%の通路細胞。</li>
	<li>蛍光位相コントラスト顕微鏡(図1A)でMSCを観察し、FlucとGFP14の発現レベルを解析する。</li>
	<li>フローサイトメトリーを用いてCD44、CD73、CD90、CD105を含むCDマーカーの発現を解析して、MSCを特徴付ける(図1B)。葉細胞、軟骨細胞、および骨細胞に対する幹細胞の三分化を誘導し、かつ、フォン・コッサによる三分分化(図1C)、オイルレッドO、およびアルシアンブルー染色を確認し、市販プロトコル15,16,16に従う。</li>
</ol>2. ラットの子犬の麻酔
<ol><li>期間内に膣を出産する日付の妊娠スプレイグ -ドーリーラットを許可します。.</li>
	<li>出生後5日目にケージからラットの子犬を取り除きます。</li>
	<li>麻酔室でガス麻酔(すなわち、2%イソフルラン)を使用してラットの子犬を麻酔します。</li>
	<li>呼吸と反射を確認して、適切な麻酔を確認します。 注:呼吸は浅くなり、反射神経は減少するはずです。ラットの子犬は、このイオブルラン濃度で少なくとも〜10分間無意識のままです。</li>
</ol>3. 気管内の内清
<ol><li>麻酔が行われたら、ラットの子犬を約60°の角度で挿管スタンドで拘束し、4本の手足すべてに実験室のラベリングテープで子犬を所定の位置に保持します。</li>
	<li>鼻の下にテープを貼って頭を固定し、頸部を穿刺気管切開術のピンポイントで突き止めます。</li>
	<li>75%アルコール準備パッドで切開部(すなわち首)を消毒する。</li>
	<li>頸動脈を損傷しないように、マイクロシザーで気管の上に0.3cm垂直中線頸部を切開します。</li>
	<li>脂肪と筋肉の層を解剖して、フックなしで湾曲した先端テーパーピンセットで気管を見つけます。</li>
	<li>湾曲した先端の先細りのピンセットで気管を持ちます。</li>
	<li>100 μL のシリンジを直立に保持し、刺激段階で 30 G 針注射器を通して、正常な生理食音 (制御) または Fluc-GFP ラベル付き MSFC (1 x 105 細胞) の 30 μL を気管にゆっくりと注入します。</li>
	<li>1つの6-0シルクステッチで切開を閉じ、結び目をできるだけ小さく結び、できるだけ短く端を切ります。</li>
	<li>ラットを赤外線の下または加熱パッドの上に置いて暖かく保ち、麻酔から回復できるようにします。</li>
	<li>ラットが暖かく、ピンク色で、ラットをケージに戻す前に自発的な動きができることを確認してください。</li>
</ol>4. MSCの肺分布のモニタリング
<ol><li>移植したヒトMSCを追跡するために、腹腔内にリン酸緩衝生理食塩(PBS)に、MSC注射後15分の体重125mg/kgの用量でルシフェリンカリウム塩をラットに注入する。</li>
	<li>鼻コーンを通して2%イオブルランを使用してラットを麻酔する。</li>
	<li>ミディアムビニング、1 f/ストップ、小動物イメージングシステムを使用した視野26cm(材料表)を用いてルシフェリン投与後10分で5~15の間隔で順次画像を取得する(</li>
	<li>イメージングソフトウェア(材料表)17を用いて、対象となる自動領域に基づいて肺からの発光活性を定量化する。</li>
</ol>

<ol><li>Ramanathan, R., Bhatia, J. J., Sekar, K., Ernst, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+in+preterm+infants+with+respiratory+distress+syndrome+treated+with+poractant+alfa%2C+calfactant+or+beractant%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Mortality in preterm infants with respiratory distress syndrome treated with poractant alfa, calfactant or beractant: a retrospective study.</a> Journal of Perinatology. 33, 119-125 (2013).</li>
<li>Gien, J., Kinsella, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of bronchopulmonary dysplasia.</a> Current Opinion in Pediatrics. 23, 305-313 (2011).</li>
<li>Pasha, A. B., Chen, X. Q., Zhou, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchopulmonary+dysplasia%3A+Pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">Bronchopulmonary dysplasia: Pathogenesis and treatment.</a> Experimental and Therapeutic. 16, 4315-4321 (2018).</li>
<li>Committee on Fetus and Newborn. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+corticosteroids+to+treat+or+prevent+chronic+lung+disease+in+preterm+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Postnatal corticosteroids to treat or prevent chronic lung disease in preterm infants.</a> Pediatrics. 109, 330-338 (2002).</li>
<li>Watterberg, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Academy+of+Pediatrics%3B+Committee+on+Fetus+and+Newborn.+Policy+statement-postnatal+corticosteroids+to+prevent+or+treat+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">American Academy of Pediatrics; Committee on Fetus and Newborn. Policy statement-postnatal corticosteroids to prevent or treat bronchopulmonary dysplasia.</a> Pediatrics. 126, 800-808 (2010).</li>
<li>Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+stromal+cells+as+stem+cells+for+nonhematopoietic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Marrow stromal cells as stem cells for nonhematopoietic tissues.</a> Science. 276, 71-74 (1997).</li>
<li>Nemeth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+stromal+cells+attenuate+sepsis+via+prostaglandin+E%282%29-+dependent+reprogramming+of+host+macrophages+to+increase+their+interleukin-10+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bone marrow stromal cells attenuate sepsis via prostaglandin E(2)- dependent reprogramming of host macrophages to increase their interleukin-10 production.</a> Nature Medicine. 15 (2), 42-49 (2009).</li>
<li>Chou, H. C., Li, Y. T., Chen, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+attenuate+experimental+bronchopulmonary+dysplasia+induced+by+perinatal+inflammation+and+hyperoxia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells attenuate experimental bronchopulmonary dysplasia induced by perinatal inflammation and hyperoxia.</a> American Journal of Translational Research. 8, 342-353 (2016).</li>
<li>Chen, C. M., Chou, H. C., Lin, W., Tseng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+effects+on+the+viability+and+function+of+human+mesenchymal+stem+cells%3A+in+vitro+and+in+vivo+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Surfactant effects on the viability and function of human mesenchymal stem cells: in vitro and in vivo assessment.</a> Stem Cell Research & Therapy. 8, 180(2017).</li>
<li>Kim, Y. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+simultaneously+attenuates+both+lung+and+brain+injuries+in+hyperoxic+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Intratracheal transplantation of mesenchymal stem cells simultaneously attenuates both lung and brain injuries in hyperoxic newborn rats.</a> Pediatric Research. 80, 415-424 (2016).</li>
<li>Fleurence, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficacy+of+intratracheal+adeno-associated+virus+administration+to+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Comparative efficacy of intratracheal adeno-associated virus administration to newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 16, 1298-1306 (2005).</li>
<li>Waszak, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+intratracheal+adenoviral+vector+administration+on+lung+development+in+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effect of intratracheal adenoviral vector administration on lung development in newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 13, 1873-1885 (2002).</li>
<li>O'Reilly, M., Thébaud, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bronchopulmonary+dysplasia.+The+term+rat+models%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of bronchopulmonary dysplasia. The term rat models.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307, 948(2014).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+labeling+and+hepatic+differentiation+potential+of+human+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">GFP labeling and hepatic differentiation potential of human placenta-derived mesenchymal stem cells.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 35, 2299-2308 (2015).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).</li>
<li>Zhang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+osteogenic+capacity+for+bone+tissue+engineering+of+fetal+compared+with+perinatal+and+adult+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Superior osteogenic capacity for bone tissue engineering of fetal compared with perinatal and adult mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 27, 126-137 (2009).</li>
<li>Huang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+surfactant+and+budesonide+on+pulmonary+distribution+of+fluorescent+dye+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+and+Neonatology%22%5BJournal%5D)">Effect of surfactant and budesonide on pulmonary distribution of fluorescent dye in mice.</a> Pediatric and Neonatology. 56, 19-24 (2015).</li>
<li>Keyaerts, M., Caveliers, V., Lahoutte, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging%3A+looking+beyond+the+light%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging: looking beyond the light.</a> Trends in Molecular Medicine. 18, 164-172 (2012).</li>
<li>Yeh, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tracheal+administration+of+budesonide%2Fsurfactant+to+prevent+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intra-tracheal administration of budesonide/surfactant to prevent bronchopulmonary dysplasia.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193, 86-95 (2016).</li>
<li>Nguyen, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+inoculation+of+Fischer+344+rats+with+Francisella+tularensis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intratracheal inoculation of Fischer 344 rats with Francisella tularensis.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56123(2017).</li>
<li>de Almeida, P. E., van Rappard, J. R., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+for+tracking+cell+fate+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence for tracking cell fate and function.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301, 663-671 (2011).</li>
<li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49, 3-10 (2011).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

呼吸困難を有する新生児は、一般的に気管内界面活性剤および/またはコルチコステロイド治療19を必要とする。ヒト第I相臨床試験は、早産児における気管内MSPの安全性を実証した8.これらの研究は、薬物の気管内投与が呼吸困難を持つ新生児にとって重要な選択肢であることを示唆している。動物モデルの研究は、モデルの特徴が人間に直接関係する場合に最も役立ちます。用語新生児ラットは、早産の肺損傷および発達研究に有用なモデルである。しかし、新生児ラットの上気道は、成体ラット20で行われるように直接気管挿管を可能にするには小さすぎる。気管切開術による気管内内植え出しは、新生児ラット肺に幹細胞または薬物を気管内投与するための実行可能な代替技術である。
生体発光イメージングは、移植した幹細胞の運命をインビトロおよびインビボモニタリングするための貴重なツールであり、ルシファーゼレポータータンパク質<sup class="...

補助酸素は、多くの場合、呼吸窮迫を有する新生児を治療するために必要とされる1.しかし、乳児の高酸素療法は長期的に悪影響を及ぼす。高濃度の酸素への長期暴露は、炎症および急性肺損傷を引き起こし、これはヒト気管支肺異形成(BPD)22に似ている。BPDは、早期の界面活性剤療法、最適な換気手順、および未熟児における非侵襲的陽圧換気の使用の増加にもかかわらず起こり得る高酸素治療の主要な合併症である。BPD3に対する多くの治療戦略が報告されているが、既知の治療法は、この合併症を軽減できない。
コルチコステロイドの使用は、肺の炎症がその病因において重要な役割を果たすため、BPDを予防するための1つの潜在的な治療法である。しかし、全身性コルチコステロイド療法は、通常、長期の悪影響44,55のために早産児に推奨されない。
間葉間質細胞(MFc)は多能性を有し、骨、軟骨、脂肪組織、筋肉、腱6を含む様々な細胞タイプに分化することができる。MSCは、免疫調節作用、抗炎症作用、および再生効果7を有し、動物学的研究は、げっ歯類における高oxia誘発性肺損傷におけるMSCおよびその分泌成分の治療上の利点を示す。気管内および静脈内MSC移植は、新生児高酸素性肺損傷から保護することが示されている。したがって、幹細胞の気管内投与と界面活性剤とコルチコステロイド療法を組み合わせることは、新生児を呼吸器疾患で治療するための潜在的な治療戦略である可能性がある。前臨床試験は、新生児ラット10、11、12,11における幹細胞およびアデノ関連ウイルスの気管内投与を用いた。しかし、移植した幹細胞の技術とインビボ追跡の段階的な提示は利用できない。新生児ラットは、出生時のラット肺の嚢胞期が妊娠13週の26-28週のヒト肺のそれと同等であるため、呼吸困難児を有する早産児に対する気管内投与の影響を研究するのに適している。ラット気管への投与のための効果的な方法は、肺の分布を成功させるために重要です.ここで提示される技術は、ヒトのモデルとしてラットを使用して新生児肺疾患の治療のための細胞および/または薬物の気管内投与の研究を可能にする。

<table><tbody><tr><td>6-0 silk</td><td>Ethicon</td><td>1916G</td><td></td></tr><tr><td>アルコール準備パッド</td><td>CSD</td><td>3032</td><td></td></tr><tr><td>BD Stemflow hMSC 分析キット</td><td>BD Biosciences</td><td>562245</td><td>CD マーカー</td></tr><tr><td>CMV-Luciferase-EF1&alpha;-copGFP BLIV 2.0 Lentivector in Vivo イメージング用</td><td>SBI</td><td>BLIV511PA-1</td><td></td></tr><tr><td>CryoStor10</td><td>BioLife Solutions</td><td>640222</td><td></td></tr><tr><td>ヒトMSCs</td><td>Meridigen Biotech Co., Ltd. 台北、台湾</td><td></td><td></td></tr><tr><td>赤外線</td><td>JING SHANG</td><td>JS300T</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>ハロカーボン</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>IVIS-200 小動物イメージングシステム</td><td>キャリパーライフサイエンス、マサチューセッツ</td><td></td><td></td>州ホプキントン</tr><tr><td>ルシフェリンカリウム塩</td><td>プロメガ、ウィスコンシン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>州マディソンマイクロハサミ、ストレート</td><td>Vannas</td><td>H4240</td><td></td></tr><tr><td>生理食塩水</td><td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td><td>113531</td><td>等張性塩化ナトリウム溶液</td></tr><tr><td>スモールハブ RN ニードル、30 ゲージ</td><td>ハミルトン カンパニー、リノ、ネバダ州</td><td>7799-06</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ (100 & マイクロ;l)</td><td>ハミルトンカンパニー、リノ、ネバダ州</td><td>81065</td><td></td></tr><tr><td>Xenogen Living Image 2.5ソフトウェア</td><td>キャリパーライフサイエンス、ホプキントン、マサチューセッツ</td><td>州N / A</td><td></td></tr></tbody></table>

期産期新生児ラットにおける幹細胞の気管内植在

Intratracheal Instillation of Stem Cells in Term Neonatal Rats

高濃度の酸素への長期暴露は、炎症および急性肺損傷を引き起こし、これはヒト気管支肺異形成(BPD)に似ています。未熟児では、界面活性剤療法、最適な換気戦略、および非侵襲的な陽圧換気の早期使用にもかかわらず、BPDは主要な合併症である。肺の炎症はBPDの病因において重要な役割を果たすため、コルチコステロイドの使用はそれを防ぐための1つの潜在的な治療法である。それにもかかわらず、全身性コルチコステロイド治療は、長期的な悪影響のために早産児に通常推奨されません。前臨床試験およびヒト第1相臨床試験は、高酸素誘発性肺傷害および早産児における間葉間質間質細胞(MSC)の使用が安全で実現可能であることを実証した。気管内および静脈内MSC移植は、新生児高酸素性肺損傷から保護することが示されている。そこで、幹細胞の気管内投与と複合界面活性剤とグルココルチコイド治療が、新生児を呼吸器疾患で治療する新しい戦略として登場した。出生時のラット肺の発達段階は、妊娠26-28週のヒト肺のそれと同等である。したがって、新生児ラットは、その有効性を評価するために呼吸困難を有する早産児に対する気管内投与を研究するのに適している。この気管内植え付け技術は、幹細胞および薬物を肺に送達するための臨床的に実行可能な選択肢である。

新生児ラットという用語における幹細胞の気管内点眼の肺分布は、ホタルルシファーゼ(Fluc)標識幹細胞によって決定された。MCCはFlucで標識され、レンチウイルス伝達を通じて緑色蛍光タンパク質でタグ付けされた。図1AはヒトMSCにおける高レベルのGFP発現を示し、集団の93.7%がフローサイトメトリーによって検出されたGFP陽性発現を示した。MSCは、CDマーカー(すなわち、CD44、CD73、CD90、およびCD105)の発現および骨細胞、軟骨細胞およびジポサイトへの三分化の能力を分析することによって特徴づけられた(図1B,C)。インビボで移植されたヒトMSCを追跡するために、ラットの発光イメージングを小動物イメージングシステムを用いて行った。測定は腹孔に測定された。ラットを粘着テープで固定し、その後、体重125mg/kgの用量でPBS中のルシフェリンカリウム塩30mg/mLの腹腔内注射を投与した。ルシメラーゼはルシフェリン、酸素、およびATPと結合し、化学反応を通して光を発生させ、...

記載は、期末新生児ラットにおける気管内注射を介した間葉間質間質細胞(MSC)の気管内移植を行うためのプロトコルである。この技術は、幹細胞および薬物を新生児ラット肺に送達し、その有効性を評価するための臨床的に実行可能な選択肢である。

Prolonged exposure to high concentrations of oxygen leads to inflammation and acute lung injury, which is similar to human bronchopulmonary dysplasia ...

気管内点眼は、チルマンの有効性を評価するために、幹細胞や薬剤を新生児肺に送達するための臨床バイオ技術です。この技術は、新生児ラットにおける様々な一次適用で使用するためのボナフィデスであり、肺疾患治療のための相対的に容易かつ費用対効果の高い尺度である。出生後5日目に、麻酔付きスプレイグ・ドーリーラットの子犬を60度斜めの挿管スタンドで拘束する。そして、各子犬の4つの手足すべてに実験室のラベリングテープを貼り付けて、それらを所定の位置に固定します。各鼻の下にテープを貼って頭を固定します。そして、穿刺気管切開のための最初の首を特定します。75%アルコール準備パッドを使用して、切開部を消毒してください。そして、頸動脈を損傷しないように、気管の上に垂直3センチメートルの正中線切開を行います。フックなしで湾曲したテーパードピンセットを使用して、脂肪と筋肉の層を解離して気管を見つけます。気管が観察されるとき、ピンセットを使用して気管をつかみ、30ゲージ針を備えた100マイクロリットルの注射器を使用して、5番目のホタルルシメラーゼGFP標識した食塩水の30マイクロリットルの間葉間質細胞の10倍を気管に注入する。すべての細胞が注入されたら、160シルクステッチで切開を閉じて、結び目をできるだけしっかりと結びます。そして、縫合糸の端をできるだけ短く切断する。その後、子犬が麻酔から回復することを可能にし、暖かく、ピンク色で、動物をケージに戻す前に自発的な動きが可能になるまで、監視と暖かい場所で。ラットが手術から回復した15分後に移植されたヒト間葉間質細胞を追跡するために、腹腔内に再麻酔下の子犬をPBSで1キログラム当たり125ミリグラムで注入する。注射の10分後、小さな動物イメージングシステムを使用して、ミディアムビニング、1 Fストップ、および26センチメートルの視野を有する5〜15秒間隔でシーケンシャル画像を取得する。次に、画像化ソフトウェアを使用して、対象の自動領域に基づいて肺からの発光活性を定量化します。ヒト間葉系幹細胞に標識されたルシファーゼホタルには高レベルのGFP発現が認められる。間葉系幹細胞は、細胞表面マーカー発現と、骨細胞、軟骨細胞、および葉細胞に分化する能力によってさらに特徴づけることができる。VIVOで移植されたヒト間葉細胞の発光画像は、正常な生理学的生理学的に処理されたラットの肺領域における発光シグナル伝達の欠如を明らかにする。間葉系幹細胞で処理されたラットでは、それらの動物の気管および中央肺領域内で発光が観察される。実際、この代表的な分析では、間葉系幹細胞で処理されたラットが、正常生理食症で処理されたラットと比較して約13倍の発光活性の増加を示すことが明らかになった。この手順を試みる場合、周囲の動脈を制限することなく、気管を解剖し、隔離することが重要です

intratracheal-instillation-of-stem-cells-in-term-neonatal-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

幹細胞の同定に重要なブレークスルーを継続的に行われている。これらの発見を翻訳するには、しかし、携帯電話配信のための新しい方法が考案されている必要があります。ここでは、気道が幹細胞移植のための肺への安全なルートを提供することを報告する。...

気管切開：肺へ幹細胞の移植方法

気管内点滴は直接肺に溶質を提供します。この手順では、肺の遠位領域にinstillateの配信をターゲットとし、従って多くの場合、肺胞の勉強を目的とした研究に組み込まれています。我々は、マウスで気管内点滴を行うための詳細な生存のプロトコルを提供しています。...

マウス肺への溶質の直接気管点眼

我々は、マウスの胎児への生物活性剤の気管内投与のための新規な外科的アプローチを開発しました。配達ルートは、一般的に使用される羊膜内の注射よりも胎児のマウス肺を標的にするより効率的です。この手順では、マウスモデルで説明されていない最新情報を持っています。...

胎児のマウスモデルにおける生物活性剤の気管内投与のための新しい手術アプローチ

このビデオは、免疫適格なげっ歯類モデルで、挿管と肺葉への細菌懸濁液の設置による肺感染の確立を示しています。このモデルにより、免疫適格動物での抗菌効果試験が可能になります。...

免疫適格げっ歯類モデルにおける肺炎連鎖球菌の気管支内点滴

神経幹細胞を送達する方法は、注射液または懸濁液に適応可能で、虚血性脳卒中後に一般的な頸動脈(マウス)または外頸動脈(ラット)を介して報告される。注入された細胞は脳のパレンチマ全体に広く分布し、送達後30dまで検出することができる。...

ラットおよびマウス脳への神経幹細胞の動脈内デリバリー:脳虚血への応用

新生児げっ歯類の気管に直接薬物を点滴するこの技術は、局所投与された薬物または生物学的製剤が新生児肺疾患に及ぼす影響を研究する上で重要である。さらに、この方法は、動物モデルにおける肺損傷を誘発するためにも使用され得る。...

肺疾患を治療するための新生児げっ歯類における薬物の気管内点滴のための低侵襲方法

この方法により、細胞懸濁液によって引き起こされる細胞注入中の大きな浸潤が排除されます。...

浸潤の少ない新規細胞注入法

ここでは、生きたラットの脳から神経幹細胞およびオリゴデンドロサイト前駆細胞を単離する方法について、実験的に詳細に紹介します。これにより、健康を損なうことなく、同じ動物からこれらの細胞を複数回収集できます。...

生きたラットからの神経幹細胞およびオリゴデンドロサイト前駆細胞の単離のための「脳搾乳」法

この研究は、重症大動脈弁狭窄症や左心低形成症候群などの先天性心疾患に見られる内皮から間葉への移行誘発性線維症の動物モデルを提示し、詳細な組織学的組織評価、調節シグナル伝達経路の同定、および治療オプションのテストを可能にします。...

内皮から間葉への移行研究のための新生児異所性ラット心臓移植モデル

細胞療法は、前駆細胞を使用して損傷した組織を修復し、肺機能を改善することにより、肺線維症に対する有望な介入を提供します。イメージングは細胞統合の追跡において極めて重要な役割を果たすため、ここでは、マウスモデルにおける肺線維症の細胞療法の磁性粒子イメージングガイド下 in vivo...

磁性粒子イメージングを用いた肺線維症のための移植された遠位肺上皮前駆細胞の画像誘導 In vivo 追跡

学ぶ新生児ラットの気管内幹細胞移植法。間葉系幹細胞を肺に直接投与し、新生児肺疾患治療の有効性を評価する実験手法です。

期産期新生児ラットにおける幹細胞の気管内植在

さらに動画を探す