腎同種移植片拒絶反応のためのラット同所性腎移植モデル

ラット同所性腎移植は、前臨床試験における腎同種移植片拒絶反応のメカニズムを調査するための重要なモデルであり、腎同種移植片の長期生存を改善するための新規アプローチの開発に役立つ可能性がある。この手術における腎血管のエンドツーエンドの吻合は、下半身の虚血および下大静脈の血栓症を回避し、エンドツーサイドトンネル法における尿管の吻合は術後の尿漏れおよび尿管のねじれを減少させる。この方法は、腎臓移植後の腎同種移植片の免疫拒絶および傷害のメカニズムを調査するための洞察を提供する。

交感神経恥骨からサブキシフォイドまでの正中線に沿って外科用はさみを使用して腹部を切開することから始めます。その後、リトラクターを使用して切開部を引っ張って開きます。切開部の右側から腸を取り出し、湿らせたガーゼで包み、乾燥を防ぎます。

その後、左腎臓を露出させます。マイクロ鉗子と綿棒を用いて左腎動脈と静脈を20倍の倍率で解離させる。必要に応じて副腎静脈と生殖器静脈をリゲートしてトランセクトします。

マイクロ鉗子の助けを借りて尿管を解離させ、末梢結合組織を保存して尿管への血液供給を確保する。血管クランプまたは4-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸で左腎動脈の約5ミリメートル上の大動脈を解離させ、クリップまたは結紮する。次に、左腎静脈遠位を左生殖静脈と副腎静脈の結合に移管する。

24ゲージのメス針を用いて、血液の色が消えるまでヘパリン1ミリリットルあたり100単位を添加した氷冷UW溶液で左腎動脈の下の大動脈から腎臓を洗い流す。大動脈の隣にある左腎動脈をトランセクトし、次に膀胱の隣にある尿管をトランセクトし、マイクロ鉗子とハサミの助けを借りて腎臓を解離させる。ドナー左腎臓を氷冷UW溶液中に保存する。

倍率20倍以下で、綿棒及び微小鉗子を用いてレシピエントラットの左腎動脈及び腎静脈を解離させる。必要に応じて副腎静脈と生殖器静脈をリピートします。微小血管クランプを使用して左腎動脈と腎静脈を根元にクリップし、微小血管クランプから3ミリメートル離れたところに腎動脈と腎静脈をトランスクトします。

左尿管を8-0で腎臓の約2〜3センチメートル下に解離して結紮するポリアミドモノフィラメント縫合糸およびライゲーションでそれをトランセクトする。マイクロ鉗子とハサミの助けを借りて腎臓を解離することによって、レシピエントネイティブ左腎臓を切除します。レシピエントラットの左腎窩にドナー腎臓を移植し、移植したドナー腎臓の周りに氷を入れる。

倍率45倍に切り替え、次いで、10-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸を用いてドナー腎動脈および腎静脈をエンドツーエンドパターンでレシピエント腎動脈および腎静脈に吻合する。中断された縫合糸で腎動脈を吻合するには、吻合の12時と6時の位置にステイ縫合糸を置きます。2つのステイ縫合糸の間に吻合の片側を2〜3本のステッチで等距離に縫合する。

ステイ縫合糸を裏返し、同様に2つのステイ縫合糸の間の吻合の反対側を2〜3本のステッチで縫合する。連続縫合糸で腎静脈を吻合するには、吻合の6時と12時の位置にステイ縫合糸を置きます。吻合部の片側を12時位置からランニング縫合糸を用いて4~5本の縫合糸で縫合する。

ステイ縫合糸を裏返し、同様に、6時の位置から吻合の反対側を縫合する。腎静脈の非侵襲的な微小血管クランプを解除してドナー腎臓を再灌流し、出血部位を特定し、必要に応じて追加の縫合を行う。次に、腎動脈の非侵襲的な微小血管クランプを解除し、出血部位を特定し、必要に応じて追加のステッチを作成する。

20倍の倍率の下で、ドナー尿管の端部をトウとして4-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸で結紮または縫合し、レシピエント膀胱のトンネルを通って端部をドラッグする。ドナー尿管の外側をレシピエント膀胱の外側の筋肉層で8-0を用いて4つの等距離位置で縫い合わせることによって、ドナー尿管をレシピエント膀胱で固定するポリアミドモノフィラメント縫合糸。その後、ドナー尿管の端部をレシピエント膀胱の外側の縫合糸で通過させ、ドナー尿管がレシピエント膀胱に収縮して戻ってくるようにする。

腸を腹腔に戻し、筋肉層に連続縫合糸で腹部切開部を閉じ、次に4-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸で皮膚層を閉じる。移植後10週間で、ヘマトキシリンおよびエオジン染色および過ヨウ素酸シフト染色は、等移植腎臓とは対照的に腎同種移植片における糸球体硬化症、間質性線維症、尿細管萎縮および間質性動脈硬化症を明らかにした。銀染色は、同種移植片腎臓と比較した場合に同種移植腎臓における糸球体基底膜の肥厚を示し、ラット同所性腎移植モデルの成功を示す。

腎臓の血管孔は非常に薄いので、間違った縫合を避けるために、高倍率の視野で吻合を行うことを忘れないでください。