Essential Components of Borreliella (Borrelia) burgdorferi In Vitro Transcription Assays

William K. Boyle; Hannah N. Sorensen; Travis J. Bourret

doi:10.3791/64134

JoVE Journal
Immunology and Infection

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Essential Components of Borreliella (Borrelia) burgdorferi In Vitro Transcription Assays

ボレリエラ(ボレリア)ブルグドルフェリの必須成分 in vitro転写アッセイ

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07:15 min

July 22, 2022

DOI: 10.3791/64134-v

William K. Boyle¹, Hannah N. Sorensen¹, Travis J. Bourret¹

¹School of Medicine,Creighton University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

インビトロ 転写アッセイは、 ボレリエラ・ブルグドルフェリにおける転写調節のメカニズムを解読することができる。このプロトコルでは、 B. burgdorferi RNAポリメラーゼを精製し、 in vitro 転写反応を実行する手順について説明します。 in vitro 転写アッセイを用いた実験的アプローチでは、活性RNAポリメラーゼの信頼性の高い精製と保存が必要です。

Borreliella burgdorferiのin vitro転写アッセイシステムは、研究者がRNAポリメラーゼの酵素活性を支配する遺伝子調節メカニズムと因子を研究するための生化学的ツールを提供します。このシステムにより、転写因子、補因子、塩濃度、pHがボレリエラ・ブルグドルフェリRNAポリメラーゼの機能にどのように影響するかをテストでき、遺伝子制御メカニズムの全体的な理解に貢献します。この強力な技術により、RNAポリメラーゼを選択的に阻害する薬物をスクリーニングすることもでき、ライムボレリア症を治療するための新薬の開発への扉が開かれます。

はじめに、2〜4リットルのボレリエラ・ブルグドルフェリRpoC-His10Xを微好気性環境でBSKII培地で培養し、1ミリリットルあたり10定数の2〜4倍の密度で細胞ペレットを収集します。細胞を10, 000倍Gで500ミリリットルの遠心ボトル中で摂氏4度で30分間ペレット化し、上清を捨てる。次いで、細胞を30ミリリットルの氷冷HN緩衝液に再懸濁し、遠心分離工程を繰り返し、上清をデカントした。

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