유방 뚱뚱한 패드에 orthotopic 주입: 생쥐에 있는 유방암 확립

동물 실험은 중국 실험 동물 관리 법률의 조항 및 일반 권고에 따라 수행되었으며 Capital Medical University의 동물 관리 및 사용 기관 위원회의 승인을 받았습니다(참조 번호. AEEI-2014-052). 6주에서 8주 사이의 암컷 Balb/c 마우스를 사용했습니다.

1. 세포와 동물의 준비

1. 수술 하루 전, 네 번째 젖꼭지 주위의 털을 깎아 수술 부위가 드러나도록 합니다.
   1. 한 손으로 마우스 뒤쪽을 단단히 잡고 마우스가 자유롭게 움직이지 않도록 하고, 마우스를 들어 올려 작업자에게 배를 노출시킨 다음 다른 손을 사용하여 전자 면도기로 네 번째 젖꼭지 주변의 털을 면도합니다.
   2. 젖꼭지 주위에 제모 크림을 얇게 펴 바르고 30-60 초 동안 증류수로 크림을 닦아 낸 다음 부드러운 종이로 마우스를 말리십시오.
2. 수술 당일, 쥐 유방암 세포(4T1-luc2)를 채취하여 세포 수를 세고, 멸균 마이크로 원심분리기 튜브에서 인산염 완충 식염수(PBS)의 세포 밀도를 2 x 10⁵ cells/mL로 조정하고 얼음 위에 보관합니다. 각 마우스에 대해 1mL 주사기에 1 x 10⁴ cells/50 μL가 준비됩니다.

2. 정소성 주사

1. 생쥐의 마취
   1. 마취를 유도합니다. 쥐를 밀폐된 투명 용기에 넣고 2% 이소플루란 가스를 켜서 쥐가 모두 누워 잠들 때까지 약 5분 동안 마취합니다.
   2. 마취를 유지하십시오. 용기에서 생쥐를 개별 마취 마스크로 옮기고, 건조함을 피하기 위해 눈에 수의사 연고를 바르고, 젖꼭지가 작업자에게 노출된 상태로 마우스를 누워 두고, 주사가 수행될 때까지 몇 분 동안 이소플루란 가스를 계속 흡입하도록 합니다.
   3. 발가락 꼬집음 금단 반사의 부족으로 마취의 성공을 확인하십시오.
   4. 안구 건조를 예방하기 위해 쥐의 눈에 안과 연고를 바르십시오.
      노트 용기 크기와 사용 가능한 개별 마취 마스크의 수에 따라 마우스 그룹을 함께 마취하고 개별 마취 하에 하나씩 주입할 수 있습니다.
2. 주입의 성과
   1. 한 손으로 핀셋으로 네 번째 젖꼭지 주위의 피부를 막고 주사기가 따라갈 수 있도록 들어 올려진 "터널"을 설정합니다. 다른 손을 사용하여 바늘을 위쪽으로 향하게 하여 주사기를 잡고 유두에서 5 - 10mm 떨어진 곳에 피하로 들어갑니다. 그런 다음 바늘 끝이 젖꼭지에 가까워질 때까지 "터널"을 따라가고, 바늘 끝이 젖꼭지 끝 아래로 올 때까지 바늘 끝을 유방 지방 패드로 조심스럽게 위로 옮기고, 핀셋을 버리고 세포를 천천히 주입합니다.
   2. 바늘을 약간 돌려 주사기를 천천히 집어넣으십시오. 면봉을 사용하여 바늘 상처를 10-20초 동안 눌러 액체가 누출되지 않도록 합니다.
   3. 성공적인 주입을 확인하기 위해 네 번째 젖꼭지를 관찰하십시오: 젖꼭지를 중심으로 한 하나의 흰색의 투명한 평평한 구체를 관찰할 수 있습니다(그림 1).
3. 생쥐가 너무 빨리 회복하고 움직이지 않도록 생쥐를 1분 더 마취 상태로 유지하여 주사 상처가 열리고 종양 세포가 누출되는 것을 방지합니다.

그림 1: 암컷 Balb/c 마우스의 유방 지방 패드에서 정형소 주사 전후 사진. 수술이 진행되었고, 생쥐가 이소플루란 마취를 하는 동안 사진을 촬영했습니다. A, 주입 전, B, 주입 후.