자궁내 암세포 주입: 복강내 난소암 마우스 모델 확립을 위한 암세포 전달 기술

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 흉선 누드 마우스에서 인간 난소암 세포의 자궁 내 주입

참고: 다음 절차를 수행하려면 두 번째 사람의 도움이 필요합니다. 또한 생존 수술이므로 멸균 수술 도구를 사용하십시오. 이 생존 수술 절차는 약 10-15분 정도 소요됩니다.

1. 2% 이소플루란을 사용하여 마우스를 마취합니다.7-8주 된 흉선 누드 마우스가 일반적으로 사용됩니다.
2. 손가락이나 집게를 사용하여 발판을 꼬집어 동물이 완전히 마취되었는지 확인합니다.동물은 수술을 시작하기 전에 통증에 완전히 반응하지 않아야 합니다.
3. 마취된 마우스를 오른쪽 측면이 위로 향하게 하여 머리가 조사자로부터 멀어지도록 멸균 거즈 패드 위에 놓습니다.
4. 마취 상태에서 건조를 방지하기 위해 솜팁 어플리케이터로 눈에 연고를 바르십시오.
5. 즉시 이소플루란 기화기에 연결된 노즈콘 시스템에 헤드를 삽입합니다(그림 1A). 이것은 수술 과정 전반에 걸쳐 마취를 전달합니다.
6. 알코올 패드(그림 1B)와 요오드를 사용하여 복부의 왼쪽(또는 오른쪽)을 소독한 다음 수술 부위에 멸균 수술용 드레이프를 놓습니다.
7. 멸균 수술용 가위와 집게를 사용하여 마우스의 왼쪽 하단 사분면에 1-2cm 피부 절개를 만듭니다(그림 1C).
8. 근육을 들어 올려 복막에 닿도록 절개합니다.
9. 복강을 노출시키기 위해 비스듬한 근육을 절개합니다.
10. 왼쪽 자궁 뿔을 찾아 식별합니다(그림 1D).
11. 멸균 지혈기를 사용하여 뿔의 앞쪽과 뒤쪽을 모두 고정합니다(그림 1E). 전방 클램프를 나팔관 바로 아래에 놓고 후방 클램프를 자궁 경부 바로 위에 놓습니다.
12. 두 번째 사람에게 세포 현탁액을 주입하도록 합니다. 세포가 들어 있는 바늘을 뿔에 수직인 45° 각도로 놓습니다(그림 1F). 50μl의 세포 현탁액을 자궁 뿔의 내강에 매우 천천히 주입합니다.
13. 바늘을 제거하고 전방 클램프를 해제합니다.
14. 후방 클램프를 풀고 복강에 있는 자궁 뿔을 교체합니다.
15. 합성 흡수성 봉합사를 사용하여 복막을 닫고 조직 접착제를 사용하여 피부를 닫습니다.
16. 노즈콘에서 마우스를 제거하고 케이지에 다시 넣습니다. 필요한 경우 수술 후 깨끗한 케이지를 만들기 위해 침구를 교체하십시오.방치하기 전에 모든 동물이 깨어 있고 활동적인지 확인하십시오.
17. 수술 후 첫 48시간 동안 음용수 0.11mg/ml의 이부프로펜을 공급합니다.그 후에는 일반 식수로 교체하십시오.
    참고: 흉선이 없는 누드 마우스를 사용하고 봉합사 대신 조직 접착제를 사용하여 피부를 봉합하는 경우 수술 후 마우스를 분리할 필요가 없습니다. SCID 마우스는 더 공격적이며 분리해야 할 수도 있습니다.
18. 열린 상처로 인한 감염 가능성에 대해 절개 부위를 면밀히 모니터링하십시오.

그림 1: 난소암 세포의 자궁 내 주사. (A) 마취가 콧방울을 통해 지속적으로 투여됩니다. (B-E) 피부는 자궁 뿔을 찾아 고정하기 위해 절개됩니다. (F) 암세포는 자궁 내강으로 천천히 주입됩니다.