글리코겐 분지화의 정도를 측정하기 위한 글리코겐 분지화 분석

1. 글리코겐 분지화의 정성적 평가

1. ~40mL의 물에 74.5g의 무수 염화칼슘을 넣고 저어주어 포화 염화칼슘 용액을 준비합니다. 물을 조금 더 넣고 계속 저어줍니다. 물로 부피를 최대 100mL까지 만들고 CaCl₂ 가 완전히 용해 될 때까지 계속 저어줍니다.
2. 15mL 튜브에서 50μL의 KI/요오드 원액과 13mL의 포화 CaCl₂ 용액을 혼합하여 요오드/CaCl₂ 색상 시약의 작업 스톡을 준비합니다. 잘 섞어 빛으로부터 보호되는 4 °C에서 보관하십시오. 솔루션은 이러한 조건에서 최소 1주일 동안 안정적입니다.
3. 분기의 결정
   1. 1.5mL 튜브에 650μL의 요오드/CaCl₂ 색상 시약과 100μL의 물을 넣고 완전히 혼합합니다. 용액을 일회용 메타크릴레이트 큐벳으로 옮깁니다.
      메모: 큐벳의 용액은 투명하고 옅은 노란색이어야 합니다.
   2. 분광 광도계에 놓고 파장 스캐닝 모드에서 실행하여 330nm에서 800nm까지의 배경 스펙트럼을 수집합니다.
   3. 1.5mL 튜브에 650μL의 활성 요오드/CaCl₂ 색상 시약과 50μg의 굴 글리코겐을 결합합니다. 최종 부피를 물과 함께 750μL로 가져오고 완전히 혼합합니다. 용액을 일회용 메타크릴레이트 큐벳으로 옮깁니다.
      메모: 큐벳의 용액은 투명하고 짙은 주황색/갈색이어야 합니다.
4. 분광 광도계에 넣고 330nm에서 800nm까지의 흡수 스펙트럼을 수집합니다.
5. 50μg의 아밀로펙틴과 30μg의 아밀로펙틴으로 1.3.3-1.4단계를 반복합니다.
   메모: 아밀로펙틴 샘플은 노란색/녹색이어야 하고 아밀로스 샘플은 녹색/파란색이어야 합니다. 두 샘플 모두 투명해야 합니다. 형성된 착색 착물은 실온에서 최소 1시간 동안 흡수 스펙트럼의 변화 없이 안정적입니다.
6. 특성화되지 않은 글리코겐 샘플의 분지 구조를 확인하려면 25 μg - 50 μg의 글리코겐을 650 μL의 작업 요오드/CaCl₂ 색상 시약과 결합하십시오. 위와 같이 진행하여 물과 함께 부피를 750μL로 가져오고 완전히 혼합한 다음 메타크릴레이트 큐벳으로 옮깁니다.
   메모: 글리코겐 샘플은 존재하는 글리코겐의 분지 정도(외부 사슬의 길이)에 따라 노란색/주황색에서 주황색/갈색을 띠어야 합니다. 다시 말하지만, 샘플은 명확해야 합니다.
7. 흡수 스펙트럼을 수집합니다.