마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

1. 이전 수술 폰 프라이베이스 라인 측정

폰 프라이 테스트 절차, 5 항을 참조하십시오.

2. 마취 / 준비

1. 동물 (케타민을 15 MG / kg Xylazine을 100mg/kg의 혼합물의 intraperitoneal 주사를) 마취.
2. (예 : 종이 타월로 덮여있) 완전히 anesthetized 때까지 조용한 장소에서 동물을 놓으십시오.
3. 핀셋 한 쌍의와 꼬리의 끝에와 발 곤란하여 반사를 확인합니다. 동물이 계속 진행하기 전에 응답하고 있는지 확인한다.
4. Subcutaneously, 항생제와 (과 다시 어깨 지역) 예 : 암피실린를 (이것은 가벼운 수술이지만, 탈수를 방지하고 감염을 방지하기 위해) 0.5ml isotonic 호수 주입.
5. 전기 면도기 사용 (오른손잡이 인 왼쪽 뒷다리가 권장) 약간 허리 영역으로 무릎 영역 아래에서 수술 필드를 면도.
6. 목화 - 울 버드와 눈 안과 연고를 적용합니다.
7. 그 오른쪽에있는 동물을 놓고 그것이 높은 유지하는 작은 플랫폼에서 왼쪽 hindlimb를 놓습니다. 접착제 테이프로 다리를 고정합니다.
8. 외과 사이트 밖에서 에탄올과 betadine의 스크럽을 교대로 수술 분야를 소독.

3. 외과

1. 왼손의 엄지와 무릎을 찾아 응용 프로그램을 만들기 위해 메스를 사용합니다. 무릎에 근위 세로 방향으로 1cm의 절개.
2. 멸균 가위의 팁을 사용 무딘 절개하여 피부를 엽니다.
3. 바로 명확하게 보이는 혈관 옆에 무딘 절개로 근육 레이어를 별도의 넓적다리 뼈 (대퇴골)에 인접해 있습니다. 제대로하면, 근육층은 쉽게 바로 근육 아래 좌골 신경을 드러내는 어떠한 출혈없이 별도의 것입니다.
   출혈이 거의 무릎에 혈관 손상에 의해 발생하는 경우 예를 들면, 혈액을 흡수하기 위해 멸균 솜 울 꽃봉오리이나 시선의 조각을 사용합니다. 출혈이 멈출 때까지 누르십시오.
4. 스테레오 현미경 마우스를 놓고 조심스럽게 좌골 신경을 시각화하기 위해 멸균 핀셋 (nr. 2) 한 쌍의와 근육을 분리. 견인기도 적용될 수 있습니다.
5. 좌골 신경에서 sural 신경 가지 영역을 식별합니다. sural 신경이 왼쪽 다리에서 오른쪽으로 분기, 세 가지의 작은 것입니다.
6. 여전히, (tibial 일반적인 peroneal 신경) 병렬 실행 sural 지점을 만지지 않도록 조심중인 다른 두 가지 주위 봉합을 (6-0 봉합사) 적용합니다. sural 신경이 완전히 그대로 유지되어야한다로 이것은 중요한 단계입니다.
7. 꽉 수술 매듭을 만듭니다. 첫 번째 매듭이 꽉 경우, 사지의 수축이 관찰됩니다.
8. 핀셋 한 쌍의 (nr. 5)와 봉합 아래 절단되도록 신경을 잡고 가위의 작은 한 쌍의와 핀셋 위 아래의 신경을 ​​절단. , 족집게의 쌍을 위에 절단 신경의 첫번째 철수에 의해 피할 수있다.
9. 마이크로 가위로 봉합 종료를 차단하고 부드럽게 근육 레이어를 닫습니다. 수술 옹이와 상처를 봉합하기 위해 lidocaine의 드롭을 추가합니다.

4. 수술 후

1. 눈 연고가 여전히 충분한 있는지 확인하십시오.
2. 편안한 자세에서 종이 타월 아래 깨끗한 새장에 마우스를 놓습니다. 방이 차가운 경우 (단 원하는 경우 추운 지역으로 탈출할 수 있어야 동물 케이지의 일부 이하)은 새장의 한 부분 아래에 열 패드를 놓습니다.
3. 쉽게 접근할 수 물과 식량을 보장합니다.

5. 폰 프라이 테스트 (기준 및 수술 다음날부터)

1. 와이어 메쉬 테이블 이틀 수술 이전에 하루에 배치 붉은 컬러 플라스틱 실린더에서 생쥐를 놓습니다. 테스트하기 전에 실린더에서 15 분 길들. 실린더의 붉은 색깔은 그들이 서로를보고 어두운 지역에있는 수로 쥐가 빨리 휴식을 취할 수 있도록 도와줍니다.
2. 생쥐가 침착되어 있는지 확인하고 손 옆 부분에 폰 프라이 필라멘트를 적용 : 0.02 g 필라멘트와 함께 시작하는 것은, 최초 30 초 (자극 당 약 2 초) 총 기간 동안 왼쪽 앞발 다섯 번 힘을 적용 각 응용 프로그램 후 마우스의 반응을 측정. 같은 필라멘트와 다른 생쥐의 왼쪽 앞발과 반복하고 다음 필라멘트 예로 이동하기 전에 첫 번째 마우스의 오른쪽 앞발로 다시 시작 :
   
   • 마우스 1 : 왼쪽 발 필라멘트 0.02 g 5 회
   • 마우스 2 : 왼쪽 발 필라멘트 0.02 g 등 5 회
   • 마우스 1 : 라이트 필라멘트 0.02 g 5 회
   • 마우스 2 : 라이트 필라멘트 0.02 g 등 5 회
   • 마우스 1 : 왼쪽 발 필라멘트 0.04 g 5 회
   • 마우스 2 : 왼쪽 발 필라멘트 0.04 g 등 5 회
3. 오 자극 중 3에 대한 응답은 긍정적인 반응으로 간주됩니다. threshol 상기 필라멘트D는 임계값 수준을 확인하기 위해 적용할 수 있습니다.
   답변 = 갑자기 발 탈퇴, 리킹 갑자기 아무 문제, 갑자기 앞발.

6. 대표 결과

8~10주 이전 C57BL / 6 마우스의 연령에 그림 1. 본 프라이 테스트 전에 작동 일일 수행과 반복 수술을 따라했다. 4-8 동물은 각 그룹에 포함되었다. 운영 측면에 본 프라이 테스트는 ipsilateral로 표시되며 이외의 운영 제어 측면은 contralateral으로 표시됩니다. 이외의 운영은 약간 가짜 운항 마우스에 상대적으로 영향을하면서 오늘 하루 종일 수술 후 동물 운영 앞발에 상당한 과민성을 개발합니다. (* <0.05, ** <0.01, *** <0.001, contralateral에 ipsilateral 상대적).

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.