이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

초파리에서 운동 활동을 분석하는 간단한 기술

5.1K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/65092

⸱

2023년 2월 24일

 ,  ,  , 

이 논문에서

요약

현재 프로토콜은 속도, 거리 등의 매개변수를 계산하기 위해 고화질 비디오 녹화를 기반으로 각 프레임의 픽셀을 분할하는 플러그인과 호환되는 오픈 소스 소프트웨어 피지를 사용하여 손으로 만든 경기장에서 파리의 움직임을 추적 및 분석하여 초파리 의 운동 활동을 평가합니다.

초록

Drosophila melanogaster 는 풍부한 고급 유전자 조작 기술과 다양한 행동 특징으로 인해 다양한 질병을 연구하는 데 이상적인 모델 유기체입니다. 동물 모델에서 행동 결함을 식별하는 것은 예를 들어 환자가 종종 운동 기능 장애를 경험하는 신경퇴행성 질환에서 질병 중증도의 중요한 척도입니다. 그러나 약물 치료 또는 형질전환 개체와 같은 비행 모델의 운동 결함을 추적하고 평가할 수 있는 다양한 시스템을 사용할 수 있기 때문에 여러 각도에서 정확한 평가를 위한 경제적이고 사용자 친화적인 시스템이 여전히 부족합니다. 피지 이미지 처리 프로그램과 호환되는 AnimalTracker 응용 프로그래밍 인터페이스(API)를 기반으로 하는 방법이 여기에서 개발되어 녹화된 비디오에서 성충과 애벌레 개체의 움직임 활동을 체계적으로 평가하여 추적 행동을 분석할 수 있습니다. 이 방법은 행동을 기록하고 분석하기 위해 고화질 카메라와 컴퓨터 주변 장치 하드웨어 통합만 필요하므로 형질전환 또는 환경적 행동 결함이 있는 파리 모델을 선별하는 데 저렴하고 효과적인 접근 방식입니다. 약리학적으로 처리된 파리를 사용한 행동 테스트의 예는 기술이 성충 파리와 유충 모두의 행동 변화를 매우 반복 가능한 방식으로 감지할 수 있는 방법을 보여주기 위해 제공됩니다.

서론

초파리 멜라노가스터(Drosophila melanogaster)는 유전자 변형(gene modification)1, 약물 치료(drug treatment)2, 노화(sagingence)3에 의해 생성된 뉴런 질환 모델에서 세포 및 분자 기능을 조사하기 위한 우수한 모델 유기체를 제공한다. 인간과 초파리 사이의 생물학적 경로, 물리적 특성 및 질병 관련 상동체 유전자의 높은 보존은 초파리를 분자에서 행동 수준까지 이상적인 모방체로 만듭니다4. 많은 질병 모델에서, 행동 결핍은 다양한 인간 신경병증에 대한 유용한 모델을 제공하는 중요한 지표이다 5,6. 초파리는 현재 파킨슨병 및 근위축성 측삭 경화증과 같은 여러 인간 질병, 신경 발달 및 신경퇴행성 질환을 연구하는 데 사용됩니다 7,8. 질병 모델의 운동 능력을 감지하는 것은 병원성 진행을 이해하는 데 중요하며 질병 과정....

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

W1118 성충 파리와 세 번째 instar 유충이 본 연구에 사용되었습니다.

1. 실험 준비

참고: Drosophila 운동 추적을 위한 오픈 필드 경기장은 무색 및 무취 실리카겔로 만들어집니다.

  1. 실리카 키트에 대한 제조업체의 지침에 따라 시약 A와 시약 B를 1:10의 비율로 혼합합니다( 재료 표 참조). 색상이 흰색으로 바뀔 때까지 교반하여 중탄산나트륨이 혼합물에 첨가되었는지 확인합니다. 혼합물을 깨끗한 페트리 접시에 옮기고 40°C의 오븐에 넣어 48시간 동안 건조시킵니다.
  2. HD 카메라( 재료 표 참조)를 삼각대에 놓고 카메라 렌즈가 실리카 경기장 표면에 수직이 되도록 조정합니다. 카메라의 초점 거리와 조리개를 조정하여 카메라가 실리카 표면에 초점을 맞추고 디스플레이의 조명이 적절하게 밝은지 확인하십시오. 실험 설정은 그림 1에 나와 있습니다.
  3. 파리를 오픈 필드 경기장으로 옮겨 최소 61초의 연속 비디오를 녹화합니다.
    참고: 유충의 느....

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

본 연구에서는 로테논으로 처리된 성충 파리와 세 번째 유충의 운동 결손을 조사하고 운동 활동을 약물 용매 디메틸 설폭사이드(DMSO)를 먹인 대조군 파리의 운동 활동과 비교했습니다. 초파리에서 로테논으로 치료하면 뇌에서 도파민성 뉴런 손실이 발생하고22 상당한 운동 장애를 유발하는 것으로 나타났다23. 그림 11 및 그림 12에서 볼 수 있듯이 로테논으로 처리된 성충 파리와 세 번째 instar 유충은 DMSO를 먹인 대조군 파리에 비해 상당한 운동 장애가 있습니다. 그림 11 및 그림 12B-E는 로테논을 사용하거나 사용하지 않고 처리된 파리 사이의 이동 .......

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

우리는 피지 이미지 처리 프로그램과 호환되는 오픈 소스 자료 AnimalTracker API를 기반으로 연구자들이 성충 파리와 개별 유충 파리를 모두 추적하여 운동 활동을 체계적으로 평가할 수 있는 방법을 설계했습니다. AnimalTracke 는 자바로 작성된 도구로, 애플리케이션-설계된 동물 추적 행동의 분석을 용이하게 하기 위해 기존 데이터베이스 또는 다른 툴에 쉽게 통합될 수 있다24. 성충과 유충의 운동 활동을 정량화하는 소프트웨어 계산 공식에 의한 프레임별 분석을 통해 이동 속도, 이동 거리, 부동성 및 방향 변화 각도를 포함한 여러 매개변수를 유연하게 분석할 수 있습니다. 행동 운동의 다양한 측면을 나타내는 이러한 매개변수는 시간 경과에 따른 운동 변화를 설명하기 위해 플롯할 수 있습니다. 또한 그래픽 사용자 인터페이스를 만들고 사용법에 대한 자세한 문서를 제공하며 응용 프로그래밍 인터페이스를 제공하여 프로그래밍 경험이 부족한 연구원과 맞춤형 .......

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자는 경쟁하는 재정적 이익이 없다고 선언합니다.

감사의 글

이 연구는 Soochow University와 중국 국립 과학 재단 (NSFC) (82171414)의 특별 출시 기금으로 지원되었습니다. Chunfeng Liu 교수의 연구실 구성원들의 토론과 의견에 감사드립니다.

....

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
동물 추적기헝가리 뇌 연구 프로그램버전: 1.7pfficial 웹사이트: http://animaltracker.elte.hu/main/downloads
카메라 소프트웨어Microsoft버전: 2021.105.10.0내장 Windows 10 시스템
컴퓨터DELLVostro-14-5480Win 10 시스템을 실행하는 컴퓨터 사용 가능
파리 이산화탄소 마취 워크스테이션Wu han Yihong 기술#YHDFPCO2-018공식 웹 사이트: http://www.yhkjwh.com/
피지 소프트웨어피지 팀버전: 1.53v공식 웹 사이트: https://fiji.sc/
포맷 공장 소프트웨어Pcfreetime버전: X64 5.4.5공식 웹 사이트: http://www.pcfreetime.com/formatfactory/CN/index.html
Graph pad 프리즘GraphPad 소프트웨어버전: 8.0.2공식 웹 사이트: https://www.graphpad-prism.cn
Hight definition cameraTTQJingwang2 (HD1080P F1.6 6-60mm)공식 웹 사이트: http://www.ttq100.com/product_show.php?id=35
Office 소프트웨어Microsoft버전: Office 2019공식 웹 사이트: https://www.microsoftstore.com.cn/software/office
페트리 접시Bkman110301003크기: 60mm
실리카겔DOWSYLGARD 184 실리콘 엘라스토머 키트지침에 따라 잘 섞으십시오
중탄산나트륨Macklin#144-55-8실리카겔과 잘 섞으십시오
초.

참고문헌

  1. Ham, S. J., et al. Loss of UCHL1 rescues the defects related to Parkinson's disease by suppressing glycolysis. Science Advances. 7 (28), (2021).
  2. Algarve, T. D., Assmann, C. E., Aigaki, T., da Cruz, I. B. M.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

더 많은 논문 탐색

초파리 운동 능력행동 분석동물 추적기Fiji 소프트웨어운동 추적오픈 필드 아레나비디오 분석로테논 처리운동 기능 저하정량적 행동 분석