5.10: 혈액 채취 I

1. 복고풍 궤도 출혈

1. 설비
   1. 벨 항아리 또는 마취 유도 챔버를 준비하여 이소플루란과 같은 마취 가스를 투여하십시오. 종항아리를 사용하는 경우, 액체 마취제가 동물과 접촉하지 않고 피부를 통한 흡수를 피하는 것이 필수적입니다. 구멍이 작은 플랫폼을 사용할 수 있습니다.
   2. 50-75 마이크로리터를 보유하는 미세 한 종크라이트 튜브가 바람직하다. 마일라 포장 튜브는 운전자의 손가락 사이에 파손 될 가능성이 적고 안전 조치로 간주되어야한다.
   3. 여러 종이 타월 두께, 또는 기타 절연 재료는 절차 중에 동물의 체온을 유지하기 위해 작업 표면에 배치됩니다.
2. 동물의 준비 및 위치
   1. 동물은 벨 항아리 또는 가스 마취 유도 챔버에서 이소플루란과 같은 흡입 마취로 마취되어 효과가 있습니다.
   2. 동물이 완전히 마취되면 제거되어 측면 의실에 놓입니다.
   3. 눈은 머리 의 상단과 턱선을 따라 손가락을 배치하고 피부를 앞뒤로 당겨 튀어 나오게됩니다.
   4. 질식에 의한 죽음을 일으키는 기도가 붕괴되거나 폐색될 수 있기 때문에 기관에 압력을 가하지 마십시오.
3. 혈액 철수
   1. 미세 한 종동은 눈의 내측 캔투스에 배치 하 고 코의 평면에서 30-45° 각도에서 caudally 지시.
   2. 헤마토크튜브를 부드럽게 회전시키면서 압력을 가합니다. 이것은 결막막을 통해 절단하고 안구 신경병이 파열합니다.
   3. 혈액은 모세관 작용에 의해 혈전관으로 흐를 것입니다.
   4. 안구 구멍 의 뒷면에 뼈를 명중 너무 깊은 밀어 하지 마십시오.
   5. 혈액이 흐르기 시작하면 눈을 돌출하기 위해 압력을 유지하십시오.
   6. 혈액의 여러 튜브를 수집하기 위해, 혈액이 계속 흐르고 내측 캔투스에서 오는 대로 수집 될 수 있기 때문에, 안구 신경통에 다음 튜브를 배치 할 필요가 없습니다.
   7. 출혈을 멈추려면 피부를 풀어 놓고 눈이 정상 위치로 돌아갈 수 있도록 하십시오. 배후를 보장하기 위해 궤도에 압력을 가하십시오.

그림 1. 마우스에서 복고풍 궤도 혈액 철수.

2. 꼬리 출혈 절차 : 꼬리 스니핑과 꼬리 닉

1. 설비
   1. 멸균 메스 블레이드는 바람직하게는 숫자 11 블레이드 또는 단면 면도날, 꼬리 스니핑 방법에 대한 초기 절단을 하는 데 사용된다. 가위가 분쇄되어 응고를 촉진하고 혈류를 감소시키기 때문에 가위를 사용해서는 안됩니다. 꼬리 닉 절차의 경우, 숫자 11 또는 15 메스 블레이드가 절단을 하는 데 사용됩니다.
   2. 마우스의 꼬리에 접근할 수 있는 구속 튜브가 준비되어 있습니다.
   3. 흡수성 종이 타월 이나 거즈는 꼬리 스니핑을 수행 하기 위한 기판으로 사용 됩니다.
   4. 수집 튜브 또는 헤마토크릿 튜브도 필요합니다.
   5. 스티피틱 파우더는 혈청을 돕기 위해 사용할 수 있어야합니다.
2. 구속
   1. 동물은 꼬리에 접근 할 수 있도록 튜브에 배치됩니다. 브룸 형 제지제의 경우, 동물은 먼저 튜브에 엉덩이를 당긴다. 다른 튜브의 경우, 동물은 먼저 머리를 배치합니다.
   2. 동물은 꼬리를 돌리거나 철회할 수 없도록 튜브에 고정됩니다.
   3. 일부 마우스는 거친 표면을 잡을 수 있다면 최소한의 수동 구속으로 꼬리 스니핑과 혈액 수집을 허용합니다.
   4. 몇몇 쥐는 혈액 수집의 이 방법에 대한 흡입 마취를 요구할 것입니다.
3. 혈액 철수
   1. 꼬리는 이물질을 제거하고 약간의 혈관 확장을 일으키는 따뜻한 물로 닦아냅니다. 뜨거운 물을 사용하지 마십시오.
   2. 꼬리 스니핑의 경우 꼬리가 확장되고 꼬리의 맨 끝 (쥐의 경우 0.5-1 mm 및 쥐의 경우 최대 2mm)이 메스 블레이드로 절단됩니다.
   3. 꼬리 닉의 경우 꼬리가 확장되고, 컷은 말살 꼬리 정맥 바로 위에, 엉덩이에서 약 2/3 거리 메스 블레이드로 만들어집니다.
   4. 꼬리는 혈류를 장려하기 위해 엉덩이에서 팁으로 쓰다듬을 수 있습니다. 그러나, 이것은 견본의 질을 감소시다.
   5. 혈액은 혈중 경구를 사용하여 팁이나 닉에서 수집하거나 수집 유리병에 물방울을 허용합니다.

3. 심장 혈액 수집

1. 설비
   1. 마우스의 경우 22-25 게이지 x 1"바늘이 있는 3cc 주사기가 바람직하다. 더 작은 주사기는 동일한 배압을 가지고 있지 않으며 혈액 철수를 더 어렵게 만들 수 있습니다. 25 게이지보다 작은 바늘은 혈액의 흐름을 제한하여 혈액 세포에 응고 및 손상을 증가시합니다. 1 이하의 바늘은 다이어프램에서 접근할 때 심장의 수준에 도달하지 못할 수 있습니다.
   2. 쥐의 경우, 18 게이지 x 1.5"바늘을 가진 10-12 cc 주사기를 선호합니다. 쥐의 크기에 따라, 더 작은 주사기는 수집될 전체 혈액 양을 보유하지 않을 수 있습니다, 따라서 주사기는 절차 도중 변경되어야 할 것이다. 20 게이지보다 작은 바늘은 혈액의 흐름을 제한하여 응고가 증가합니다. 1.5"보다 짧은 바늘은 다이어프램에서 접근할 때 심장의 수준에 도달하지 않을 수 있습니다.
   3. 충분한 크기의 혈액 수집 튜브는 수집 된 혈액을 보유하는 데 사용됩니다.
2. 구속
   1. 적절한 구속은이 방법의 성공에 필수적이다. 동물은 몸이 수직으로 매달려 있는 스크러프에 의해 유지됩니다. 몸이 심장의 편향이나 가슴의 비틀림을 방지하기 위해 똑바로하는 것이 중요합니다.
   2. 대체 위치는 동물의 왼쪽에 갈비뼈 사이에 바늘을 배치 할 때 등쪽 침전이다. 이것은 매우 큰 쥐 또는 여러 동물이 피를 흘릴 때 특히 유용합니다.

그림 2. 마우스가 수직으로 유지와 심장 혈액 철수.

3. 혈액 철수
   1. 마우스 또는 쥐가 스크러프에 의해 수직으로 유지될 때 후방 양상에서, 다이어프램을 뚫는 접근은 더 쉽게 달성된다.
      1. 바늘은 동물의 xiphoid의 왼쪽에 있는 노치에서 진행됩니다.
      2. 바늘은 척추와 평행해야하며 갈비뼈 바로 아래에 놓아야합니다.
      3. 심장은 팔꿈치 의 수준에 대략 위치합니다.
      4. 바늘을 놓고, 구부리고, 가슴에 넣고, 심장에 구멍을 뚫습니다.
      5. 주사기로 약간의 허리 압력을 가하십시오. 바늘이 심장에 있으면 혈액이 주사기로 흘러 들어갑니다.
      6. 주사기에 추가 적인 허리 압력을 추가 하기 전에 혈액 주사기를 가득 때까지 기다립니다.
   2. 동물의 왼쪽에서 측면 접근은 등쪽 의 재시간에 동물을 배치해야합니다.
      1. 진입점은 가슴 벽에 있는 팔꿈치의 지점에 대해 측정됩니다. 심장은 팔꿈치 의 수준에 대략 위치합니다.
      2. 바늘은 흉벽의 중간 지점에서 테이블의 평면에 수직으로 삽입됩니다.
      3. 바늘을 놓고, 구부리고, 가슴에 넣고, 심장에 구멍을 뚫습니다.
      4. 주사기로 약간의 허리 압력을 가하십시오. 바늘이 심장에 있으면 혈액이 주사기로 흘러 들어갑니다.
      5. 주사기에 추가 배압을 추가하기 전에 혈액이 주사기를 채울 때까지 기다립니다.

그림 3. 등대 반수 위치에 마우스와 심장 혈액 철수.

4. 기술 팁
   1. 정상적인 심장은 왼쪽을 가리키는 정점과 함께 위치하고 있습니다. 드문 경우에, 심장은 심장을 천공에 있는 어려움귀착되었던 반전될 수 있습니다.
   2. 주사기에 과도한 역압은 심장을 붕괴시킬 수 있으며, 바늘 벨을 가리고 주사기로의 혈류를 막을 수 있습니다.
   3. 백 압력을 적용하고 반복적으로 방출하면 주사기에 응고가 시작됩니다.
   4. 간경에 부드럽게 압력을 가하면 순환 계통에 추가 혈액량을 강제할 수 있으므로 철수할 수 있습니다.

4. 후방 베나 카바 혈액 철수

4. 설비
   1. 25-29 게이지 바늘을 가진 결핵 주사기는 마우스에 있는 혈액 수집에 이용됩니다. 쥐의 경우 22-25 게이지 x 1"바늘이있는 10-12 cc 주사기가 필요합니다.
   2. 동물을 보호하기 위해 외과 플랫폼, 해부 트레이 또는 기타 표면이 필요하며, 사지를 제자리에 부착하기 위해 넥타이, 테이프 또는 핀이 필요합니다.
   3. 주사용 마취 또는 흡입 마취가 필요합니다. 흡입 마취를 사용하는 경우, 마취가 코 콘을 가진 정밀 기화기를 통해 전달되는 것이 바람직하다. 절차 길이는 추가 마취 가스 전달없이 유도 챔버를 사용하면 동물이 부활하기 전에 혈액 배출을 완료하기에 충분한 시간을 제공하지 않습니다.
   4. 쥐용 아이리스 가위 또는 쥐용 날카로운 무딘 가위 수술실이 필요하며, 작은 외상성 엄지 집게와 2"x 2" 거즈 스폰지가 필요합니다.
5. 구속
   1. 동물이 발가락 꼬집거나 꼬리 꼬집어 결정된 대로 완전히 마취되면 동물은 등갈에 배치됩니다.
   2. 팔다리는 테이프 나 핀으로 플랫폼에 고정됩니다. 사지는 몸에서 멀리 확장되어야한다.
6. 출금
   1. 피부가 들어 올려지고 작은 횡방향 컷은 여성의 골반 바로 위 또는 남성의 프레덕트 바로 위에 있는 피부를 통해 만들어집니다.
   2. 가위의 점은 컷에 배치되고, 중간 선절절은 골반 / 프레추에서 xiphoid에 피부를 통해 이루어집니다.
   3. 피부는 양쪽에 측면으로 반사됩니다. 무딘 해부는 기본 근육에서 그것을 느슨하게 할 필요가 있을 수 있습니다.
   4. 근육이 들어 올려지고, 작은 횡방향 절단은 피부 절단 바로 위의 근육을 통해 만들어집니다.
   5. 가위의 포인트는 복부에 배치되고 중간 선 절개는 xiphoid에 근육을 통해 이루어집니다. 장기를 자르지 않도록 가위 의 점을 위쪽으로 각도로 조정하십시오.
   6. 양쪽의 갈비뼈 곡선을 따라 횡적으로 자른다. 간을 뚫지 않도록 주의하십시오.
   7. 창자를 동물의 왼쪽으로 부드럽게 움직이면 후방 베나 카바를 노출시니다.
   8. 간장에 거즈 패드를 놓고, 간위에 검지와 가운데 손가락을 놓습니다.
   9. 다른 한편으로, 바늘을 삽입, 위쪽으로 bevel, 신장 혈관의 접합과 장골 분열 사이의 중간 베나 카바에.
   10. 간에서 압력을 가하면서 혈액을 천천히 철회하십시오.

그림 4. 후방 베나 카바에서 혈액 철수.

혈액 채취는 생쥐와 쥐를 대상으로 하는 여러 연구 조사에서 흔히 볼 수 있는 요건입니다. 이러한 동물의 혈액 채취 방법 선택은 필요한 혈액의 양, 샘플링 빈도, 출혈할 동물의 건강 상태 및 기술자의 기술 수준과 같은 많은 요인에 따라 달라집니다.

여기에서는 이러한 고려 사항을 검토하고 후안와 출혈, 꼬리 절단 및 흠집, 심장 내 혈액 채취를 포함한 혈액 채취 절차를 간략하게 설명합니다. 다른 방법은 이 시리즈의 두 번째 비디오를 참조하세요.

혈액 채취 프로토콜에 대해 자세히 알아보기 전에 먼저 샘플 유형, 바늘 선택 및 수집할 수 있는 최대 혈액량을 포함한 몇 가지 일반적인 고려 사항을 검토해 보겠습니다. 생쥐 또는 쥐에서 혈액을 채취하기 전에 필요한 혈액 샘플의 유형을 결정해야 합니다. 실험 절차에는 전혈, 혈장 또는 혈청이 필요할 수 있습니다.

전혈을 채취하는 경우 응고를 방지하기 위해 샘플에 항응고제를 추가해야 합니다. 일반적으로 사용되는 항응고제에는 헤파린, 구연산나트륨 및 EDTA로 약칭되는 에틸렌디아민 테트라아세트산이 포함됩니다. 항응고제는 주사기에 직접 주입하여 표면을 코팅할 수 있습니다. 이를 통해 혈액을 채취할 때 항응고제를 직접 접촉할 수 있어 응고 방지에 도움이 됩니다. 설치류의 혈액은 빠르게 응고되기 때문에 항응고제와 혈액의 정확한 비율을 사용하는 것이 필수적입니다. 혈장 채취는 항응고제로 전혈을 원심 분리해야 합니다. 스핀 후 WBC와 혈소판층 위의 반투명 액체는 혈장입니다. 그것은 피브리노겐 및 기타 응고 인자를 포함합니다. 반면에, 혈청은 항응고제 없이 전혈 샘플에서 채취합니다. 그리고 샘플이 응고되었기 때문에 최고의 플레이어인 혈청에는 피브리노겐 또는 기타 응고 인자를 포함하지 않습니다.

바늘 선택은 동물의 크기와 정맥 천자 부위를 기준으로 합니다. 일반적으로 큰 구멍의 바늘은 혈액 세포에 손상을 덜 일으키고 더 빠른 혈액 채취를 가능하게 합니다. 그러나 선박 손상을 일으킬 가능성이 더 큽니다. 바늘 길이도 고려해야 합니다. 바늘이 너무 길면 사용하기가 불편하거나 바늘 안에 있는 동안 혈액이 응고되기 시작할 수 있습니다. 크기 선택은 18에서 29 게이지와 0.5에서 1.5 인치 길이입니다. 각 방법에 적합한 바늘 크기는 절차 섹션에서 설명합니다.

마지막으로, 설치류의 크기가 작기 때문에 한 번의 채혈로 수집할 수 있는 혈액의 최대량이 있어 유기체에 심각한 해를 끼치지 않습니다. 채혈은 수액 보충 없이 또는 수액 보충과 함께 이루어질 수 있으며, 일반적으로 0.9%의 생리적 식염수를 사용하여 수행됩니다. 각 경우의 상한은 아래 텍스트 프로토콜에 나열되어 있습니다. 더욱이, 일부 실험은 여러 번의 샘플 수집을 필요로 하며, 이러한 경우 수액 대체 동물과 함께 혈액 세포를 보충하기 위해 그 사이에 시간이 필요합니다. 다시 말하지만, 연속 수집 중에 수집할 수 있는 최대 금액이 있으며 상한은 아래 프로토콜에 나열되어 있습니다.

몇 가지 일반적인 고려 사항을 검토한 후, 과학자들이 눈 근처의 혈관에서 소량을 채취하기 위해 사용하는 기술인 후안와 출혈(retro-orbital bleeding)부터 시작하여 구체적인 혈액 채취 기술에 대해 알아보겠습니다. 안와 영역의 해부학적 구조는 마우스와 쥐 사이에서 다릅니다. 쥐는 눈 뒤로 흐르는 혈관의 신경총을 가지고 있는 반면, 쥐는 후방안와동을 만드는 혈관을 가지고 있어 생쥐에서 이 절차를 더 쉽게 수행할 수 있습니다.

혈액 채취를 위해 튜브를 잡는 것으로 시작하십시오. 50-75 마이크로 리터를 담을 수있는 마이크로 적혈구 용적률 튜브가 선호됩니다. 작업 표면에 여러 개의 종이 타월 또는 기타 절연 재료를 놓으십시오. 이것은 시술 중 동물의 체온을 유지하기 위한 것입니다. 이제 이소플루란과 같은 흡입 마취제를 사용하여 동물을 마취합니다. 동물이 완전히 마취되면 챔버에서 동물을 제거하고 측면 누운 자세에 있는 옆으로 눕힙니다. 다음으로 정수리와 턱선을 따라 손가락을 놓고 피부를 앞뒤로 당겨 눈이 튀어나오도록 합니다. 질식으로 사망할 수 있으므로 기관에 압력을 가하지 마십시오. 그런 다음 미세적혈구용적관을 눈의 내측각에 삽입하고 코면에서 30-45도 각도로 꼬리 방향으로 향하게 합니다. 튜브를 부드럽게 회전시키면서 압력을 가합니다. 이것은 결막을 절단하고 안구신경총 또는 부비동을 파열시킵니다. 혈액은 모세관 작용에 의해 헤마토크릿 튜브로 흐를 것입니다. 안구 뒤쪽의 뼈에 부딪힐 정도로 튜브를 너무 깊게 밀어 넣지 마십시오. 혈액이 흐르기 시작하면 눈을 돌출하지 않도록 압력을 유지하십시오. 출혈을 멈추려면 피부를 풀어주고 눈이 정상 위치로 돌아갈 수 있도록 합니다. 지혈을 촉진하기 위해 압력을 가하십시오. 반복적인 검체 채취의 경우, 출혈 사이에 최소 10일을 허용하십시오. 이것은 조직이 치유될 시간을 제공합니다.

후방안와출혈이 흔한 시술이지만, 그 인간성에 대한 우려가 많다. 여기에는 헤마토크릿관의 과도한 움직임으로 인한 부종이 포함됩니다. 이로 인해 안구가 돌출되고 눈꺼풀이 닫히는 것을 방해하여 각막이 건조해지고 손상되고 통증이 발생하여 긁힘과 자해를 유발할 수 있습니다. 헤마토크릿관을 부적절하게 배치하면 시신경이 절단되어 실명을 초래할 수 있습니다. 또 다른 가능한 합병증은 눈이 안와에서 밀려나 눈꺼풀이 안구 뒤로 떨어질 수 있다는 것입니다. 또한 연약한 안와 뼈의 골절, 안구의 침투로 인해 유리체액이 손실되거나 눈 뒤에 혈종이 형성되어 극심한 통증을 유발할 수 있는 문제가 발생할 수 있습니다. 이러한 모든 우려에도 불구하고 숙련된 기술자가 시술을 수행하고 동물이 완전히 마취된 경우 역안와 출혈은 설치류에서 혈액을 채취하는 효과적인 방법입니다.

이제 소량의 연속 샘플을 수집할 수 있는 꼬리 출혈에 대한 고려 사항과 절차를 검토해 보겠습니다. 이 절차에 필요한 장비에는 멸균 번호 11 메스가 포함됩니다. 가위로 자른 부위가 으스러져 응고를 촉진하고 혈류를 감소시킬 수 있으므로 가위를 사용해서는 안 됩니다. 다른 도구로는 동물의 꼬리에 접근할 수 있는 구속 튜브가 있습니다. 흡수성 종이 타월; 수집 또는 헤마토크릿 튜브 및 지혈 분말 - 지혈을 돕기 위해.

동물을 구속 튜브에 고정하는 것으로 시작하십시오. 그런 다음 따뜻한 물로 꼬리를 닦아 이물질을 제거하고 약간의 혈관 확장을 유발합니다. 뜨거운 물을 사용하지 마십시오. 꼬리를 펴고 메스 날로 꼬리 끝을 잘라 헤마토크릿이나 수집 튜브를 사용하여 혈액을 수집합니다. 꼬리는 혈류를 촉진하기 위해 엉덩이에서 끝까지 쓰다듬거나 "젖을 짜"낼 수 있습니다. 그러나 이렇게 하면 샘플의 품질이 저하됩니다.

출혈을 멈추려면 거즈 패드로 꼬리 끝에 압력을 가하십시오. 지혈 분말은 지혈을 달성하는 데 사용할 수 있습니다. 5-10분마다 동물을 검사하여 지혈이 이루어졌는지 확인하며, 이는 반복적인 샘플링 후에 지연될 수 있습니다. 꼬리 싹둑에서 채취한 샘플에는 동맥혈과 정맥혈이 모두 포함되어 있을 수 있으며, 조직 생성물 오염도 함께 함유되어 있습니다. 그러나 이 채혈 절차는 꼬리 끝에 있는 원래 절단된 부위의 딱지나 응고를 방해하여 연속 채혈을 가능하게 합니다.

꼬리 싹둑싹둑 싹둑싹둑 잘라내기에 대한 대체 혈액 채취 방법은 상대적으로 덜 침습적인 꼬리 혈관 흠집입니다. 이를 위해 동일한 메스 날을 사용하여 엉덩이에서 약 2/3 거리의 측면 꼬리 정맥 바로 위에 작게 자릅니다. 꼬리 가위와 마찬가지로 혈액은 채취 튜브나 헤마토크릿 튜브에 모일 수 있습니다. 그리고 부위에 압력을 가하고 5-10분마다 동물을 다시 검사하여 지혈을 보장하는 것이 필수적입니다. 그러나 꼬리 싹둑과 마찬가지로 샘플은 조직 제품으로 오염되었을 수 있습니다.

종종 비생존 다량의 혈액 샘플이 필요한 연구는 심장 내 출혈 또는 꼬리 대정맥을 통한 출혈을 통해 수행됩니다.

마우스의 심장 내 방법의 경우 22-25 게이지 1 인치 바늘이있는 3cc 주사기가 필요합니다. 그리고 쥐의 경우 18 게이지 1.5 인치 바늘이있는 10-12cc 주사기가 선호됩니다. 아래 프로토콜을 참조하여 이러한 요구 사항과 주사기가 이상적인 이유를 이해하십시오.

이산화탄소를 사용하여 동물을 안락사시키는 것부터 시작하십시오. 안락사 후에는 시체를 수직으로 매달아 설치류의 목덜미를 잡습니다. 심장이 편향되거나 가슴이 뒤틀리는 것을 방지하기 위해 몸이 곧게 펴져야 하기 때문에 이러한 억제가 중요합니다. 심장은 대략 팔꿈치 높이에 위치합니다. 삽입면은 xiphoid의 바로 왼쪽에 있는 노치에 있으며 척추와 평행하고 갈비뼈 아래에 있습니다.

바늘을 삽입하고 비스듬하게 가슴에 넣고 심장에 구멍을 뚫습니다. 주사기로 약간의 배압을 가합니다. 바늘이 심장에 있으면 주사기로 혈액이 흘러 들어갑니다. 배압을 추가하기 전에 혈액이 배럴을 채울 때까지 기다리십시오. 총 혈액량의 약 절반은 심장 천자를 통해 쥐 또는 쥐에서 채취할 수 있습니다. 이것은 평균적인 쥐의 혈액 약 1mL와 평균적인 쥐의 혈액 약 10mL에 해당합니다.

측면 접근법을 사용할 때 대안적인 자세는 등쪽 누운다. 이 경우 동물의 왼쪽 갈비뼈 사이에 바늘을 놓으십시오. 진입 지점은 흉벽의 팔꿈치 지점에 대해 측정됩니다. 바늘을 삽입하고 가슴 벽의 중간 지점에 테이블 평면에 수직으로 비스듬하게 삽입합니다. 주사기로 약간의 배압을 가합니다. 바늘이 심장에 꽂혀 있으면 주사기로 혈액이 흘러 들어갑니다. 다시 말하지만, 배압을 추가하기 전에 혈액이 배럴을 채울 때까지 기다리십시오. 어느 자세에서든 과도한 배압은 심장을 무너뜨리고 바늘 경사를 막고 주사기로 들어가는 혈류를 막을 수 있습니다.

심장 혈액을 채취하는 또 다른 방법은 꼬리 대정맥을 이용하는 것입니다. 이 절차에 필요한 장비는 올바른 크기의 바늘이 부착된 적절한 주사기입니다. 복강, 작은 외상성 엄지 집게 및 거즈 스폰지를 열기위한 가위. 이 기술은 동물을 깊이 마취시키고 절차 전반에 걸쳐 마취 상태를 유지해야 합니다. CO2 마취는 이 절차를 위해 동물의 심장이 박동해야 하므로 선택 사항이 아닙니다. 동물을 등쪽 누운 자세로 놓고 팔다리를 플랫폼에 고정합니다. 팔다리는 몸에서 멀리 뻗어야 합니다.

이제 집게로 피부를 들어 올리고 가위를 사용하여 암컷의 골반 바로 위 또는 수컷의 포피 바로 위의 피부를 가로 가로 작은 절단합니다. 다음으로, 가위의 끝을 절단 부위에 놓고 골반 또는 포포에서 xiphoid까지 피부를 통해 정중선을 절개합니다. 피부가 측면으로 반사된 상태에서 근육을 들어 올리고 피부 절단 바로 위에 근육을 가로로 작게 자릅니다.

가위의 끝을 복부에 놓고 근육을 통해 xiphoid까지 정중선을 절개합니다. 장기가 절단되지 않도록 가위 끝을 위쪽으로 기울였습니다. 양쪽의 갈비뼈 곡선을 따라 가로로 자릅니다. 간에 구멍을 뚫지 않도록 주의하세요. 장을 동물의 왼쪽으로 부드럽게 움직여 후대정맥을 노출시킵니다. 간에 거즈 패드를 대고 검지와 중지를 그 위에 올려 놓습니다. 다른 손으로 바늘을 삽입하고 신장 혈관의 접합부와 장골 분기점 사이의 중간에 있는 대정맥으로 비스듬히 비스듬히 만듭니다. 간에 압력을 가하면서 천천히 혈액을 빼냅니다.

혈관이 파열될 수 있으므로 손의 움직임을 피하십시오. 또한 너무 빠른 혈액 배출은 혈관이 베벨 위로 무너져 입구를 막고 혈액 채취를 방해할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 바늘이 피부를 통과하지 않기 때문에 멸균 샘플을 수집 할 수 있다는 것입니다.

마지막으로, 이러한 혈액 회수 기술의 몇 가지 응용 분야를 살펴보자. 면역 종양학은 새롭게 떠오르는 분야이며, 이 분야의 연구자들은 암 발병의 여러 단계에서 면역 세포를 연구하기 위해 종종 혈액 채취를 수행합니다. 예를 들어, 연구진은 암을 앓고 있는 쥐로부터 심장 혈액을 채취하여 종양 생착 후 10일, 20일, 30일에 호중구를 분리하고 정량화했다.

한편, 생리학자들은 혈액 성분을 자주 연구한다. 이 연구에서와 마찬가지로 연구자들은 당뇨병이 있는 동물의 신장 기능을 평가하는 데 관심이 있었습니다. 이를 위해 이 과학자들은 먼저 당뇨병 동물 모델에 염료를 주입했습니다. 다음으로, 그들은 꼬리 싹둑 방법을 사용하여 여러 시점에서 혈액을 채취하여 혈액 내 염료 농도를 평가했으며, 이는 궁극적으로 당뇨병 유도 후 신장 기능의 차이를 강조하는 사구체 여과율을 계산하는 데 사용되었습니다.

마지막으로, 줄기세포 연구자들은 혈액 샘플을 사용하여 기증자 세포가 수혜자의 시스템에 통합되는 성공 여부를 평가합니다. 여기에서 연구자들은 먼저 꼬리 정맥 주사를 통해 수컷 쥐의 골수 세포를 야생형 및 유전자 변형 암컷 동물에 이식했습니다. 다음으로, 그들은 중합효소 연쇄 반응을 사용하여 혈액 세포의 게놈 DNA를 연구하기 위해 수용 마우스의 후방안와동에서 혈액을 수집했습니다. 이것은 두 가지 유형의 동물에서 기증자 세포의 생착 비율을 제공했습니다.

여러분은 방금 혈액 회수 기술에 대한 JoVE의 첫 번째 기사를 시청했습니다. 실험실 동물에서 일반적으로 사용되는 다른 혈액 채취 기술을 수행하는 방법을 검토하려면 시리즈의 다음 비디오를 참조하십시오. 언제나 그렇듯이 시청해 주셔서 감사합니다!