유방 뚱뚱한 패드에 orthotopic 주입: 생쥐에 있는 유방암 확립

먼저 배양에서 원하는 유방암 세포주를 확립합니다. 수술 전날, 쥐의 복부를 면도하고 제모 크림을 사용하여 털을 제거하고 서혜부 유두를 노출시킵니다. 수술 당일, 세포를 채취하고 마우스를 마취하고 발가락 꼬집음에 대한 반응 부족을 확인합니다. 핀셋을 사용하여 유두 주위의 피부를 꼬집어 융기된 터널을 만듭니다.

그런 다음 수집 된 세포의 주사기로 피부를 뚫습니다. 바늘 끝이 젖꼭지에 가까워질 때까지 바늘은 터널을 따라가야 합니다. 바늘 끝을 젖꼭지 바로 아래에 있는 유방 지방 패드로 부드럽게 움직입니다. 핀셋을 제거하여 바늘로 피부 텐트를 만든 다음 세포를 천천히 주입합니다.

마지막으로, 젖꼭지를 둘러싼 둥근 돌기를 방해하지 않도록 주의하면서 주사기를 집어넣습니다. 주입된 세포와 후속 종양은 루시퍼라아제를 발현하며 생물 발광 이미징을 사용하여 추적할 수 있습니다. 예시 프로토콜에서는 쥐 정소성 유방암의 확립을 보여줄 것입니다. 수술 전날, 수혜 마우스를 수동으로 제지하고 동물의 배 쪽을 털까지 위로 돌려 네 번째 젖꼭지 주위를 면도합니다.

제모 크림을 얇게 바르고 털을 닦습니다. 증류수를 사용하여 30-60초 후에 크림을 제거합니다. 그리고 부드러운 종이 타월로 마우스를 말리십시오. 수술 당일, 얼음 위의 멸균 마이크로 원심분리기 튜브에서 쥐 유방암 세포 현탁액을 PBS 농도 밀리리터당 5분의 2 x 10으로 희석합니다.

각 주사 전에 마우스당 50마이크로리터의 세포가 있는 .45 x 16 바늘이 장착된 1밀리리터 주사기를 로드합니다. 그리고 진정제를 투여한 각 동물에서 발가락 꼬집음에 대한 반응이 없는지 확인합니다. 동물의 눈에 연고를 바르고 핀셋을 사용하여 첫 번째 쥐의 네 번째 젖꼭지 주위 피부를 막아 주사기가 따라갈 수 있는 터널을 만듭니다.

베벨이 위를 향하도록 주사기를 잡고 바늘 끝이 젖꼭지에 거의 닿을 때까지 터널을 따라 유두에서 5-10ml 떨어진 곳에서 피부로 피하로 들어갑니다.- 핀셋을 사용하여 첫 번째 젖꼭지 주위의 피부를 텐트로 막으면 주사기가 따라갈 수 있는 터널이 만들어집니다. 바늘은 핀셋 끝 사이에 들어가야 하며 조직 속으로 들어가는 대신 위로 올라가야 합니다. 경사가 젖꼭지 아래에 올 때까지 바늘 끝을 유방 지방 패드로 조심스럽게 움직입니다.

그리고 암 세포가 천천히 주입될 수 있도록 피부 텐트를 풀어줍니다.- 삽입 시 경사가 젖꼭지 아래에 올 때까지 바늘 끝을 유방 지방 패드로 조심스럽게 움직여 세포가 올바른 위치로 전달될 수 있도록 저항을 느끼도록 합니다. 모든 세포가 주입되면 바늘을 약간 옆으로 돌리고 주사기를 천천히 집어넣습니다. 면봉을 사용하여 10-20초 동안 바늘에 상처를 가하여 액체가 스며나오지 않는지 확인합니다.

주입된 젖꼭지는 젖꼭지가 중앙에 있는 투명한 흰색 평평한 구체로 나타나야 합니다