초음파 유도 이식: 췌관 선암 세포를 성인 마우스에 이식하는 기술

- 초음파는 종양세포 주입 시 염증을 최소화하면서 특정 조직 부위에 암세포를 이식하는 데 도움이 되는 고해상도 이미지를 제공합니다. 주로 orthotopic 모델을 사용하여 종양 세포를 종양 기원의 관련 기관에 이식합니다. 이 기관은 원래의 종양 미세환경을 모방하고 전이를 촉진합니다.

pH를 유지하기 위해 차가운 PBS에 종양 세포를 매달아 놓고 튜브를 얼음 위에 놓는 것으로 시작합니다. 다음으로, 마취 마우스를 초음파 스테이지에 놓고 실험실 테이프로 팔다리를 고정합니다. 면도한 복부에 필요한 양의 초음파 젤을 바르고 췌장이 명확하게 보일 때까지 초음파 프로브 위치를 조정합니다. 주사기에 종양 세포 현탁액을 넣고 세포를 췌장에 조심스럽게 주입합니다.

초음파 이미지에 유체 거품이 나타나 성공적인 이식을 확인합니다. 세포의 역류를 방지하기 위해 5초 동안 기다렸다가 바늘을 부드럽게 제거합니다. 동물을 깨끗한 우리로 되돌리고 마취에서 회복될 때까지 모니터링합니다. 주사 후 몇 주 이내에 췌장에 주입된 암세포가 빠르게 분열하여 종양을 형성합니다. 다음 프로토콜에서는 쥐 유래 췌관 선암종 세포를 정소성 모델의 췌장에 초음파 유도 이식을 수행합니다.

- 절차를 시작하기 전에 췌관 선암 세포주를 얼음 위에 적절한 양의 멸균 차가운 PBS에 재현탁합니다. 섭씨 37도의 보온 플레이트에 케이지를 놓고 적절한 살균제로 생물 안전 캐비닛, 유도 챔버 및 초음파 스테이지를 철저히 청소합니다. 초음파 스테이지의 보온 기능을 섭씨 37도로 설정하고 마취 유도 후 첫 번째 동물의 눈에 연고를 바릅니다.

초음파 스테이지에서 마우스를 등쪽 누운 자세로 놓고 상지와 하지를 s에 부드럽게 고정합니다.tage 테이프로. 멸균 면 팁 애플리케이터를 사용하여 비장 부위를 넘어 정중선까지 복부의 왼쪽 상단 사분면에 제모 크림을 넉넉하게 바르십시오. 1분 후 마른 거즈 패드를 사용하여 털을 부드럽게 제거한 후 식염수 젖은 거즈로 여분의 제모 크림을 제거합니다. 그런 다음 워머의 새로운 깨끗한 케이지 중 하나에 마우스를 놓습니다.

초음파 유도 종양 세포 이식의 경우 표면이 바닥과 평행이 되도록 초음파 플랫폼을 조정하고 마우스 머리가 오른쪽을 향하도록 동물의 왼쪽에 서십시오. 횡방향 복부 이미지를 얻을 수 있도록 변환기 위치를 조정하고 테이프로 마우스 팔다리를 플랫폼에 고정합니다. 변환기를 부드럽게 내려 마우스 복부에 접촉하고 췌장이 명확하게 보일 때까지 변환기를 조정합니다. 복강에서 정확한 방향을 제공하기 위해 왼쪽 신장과 비장을 찾습니다.

주사 부위가 확인되면 29게이지, 1/2인치 인슐린 주사기에 25마이크로리터의 종양 세포 현탁액을 넣고 멸균 알코올 준비 패드로 바늘 끝을 닦습니다. 뭉툭한 모서리 집게를 사용하여 마우스 피부와 복막벽을 잡고 주사 부위의 장력을 높입니다. 초음파 플랫폼 표면에 대해 약 25-45도 각도로 주사기를 잡고 피부와 복막벽을 통해 바늘을 천천히 전진시킵니다. 바늘이 복막벽을 뚫었는지 확인한 후 초음파 시각화를 활용하여 바늘을 췌장으로 직접 유도합니다.

바늘이 제자리에 놓이면 종양 세포를 천천히 주입합니다. 췌장 내에 유체 덩어리가 형성되는 것은 초음파에 의해 올바르게 주입된 췌장에서 분명하게 나타납니다. 현탁액의 최대 부피가 주입되고 초음파로 유체 덩어리를 관찰할 수 있게 되면 주입된 세포를 방해하지 않도록 주의하면서 마우스 복부에서 바늘을 천천히 빼기 전에 주사기를 몇 초 동안 매우 가만히 유지합니다. 그런 다음 마우스를 워머의 새 깨끗한 케이지에 넣고 완전히 회복될 때까지 모니터링합니다.

- 바늘 깊이와 각도를 포함하여 췌장에 바늘을 적절하게 배치하는 것은 이 프로토콜에서 중요한 단계입니다. 유체 볼루스의 시각화는 성공적인 종양 주입을 확인하는 데 도움이 됩니다. 주입 깊이를 제어하는 것은 가장 어려운 부분입니다. 제 조언은 트리판-블루 주사로 연습하고 초음파와 부검으로 수액 덩어리를 확인하는 것입니다.