Intracecal Tumor Cell Injection: A technique to deliver cancer cancer mouse model(내측성 종양 세포 주입: 정소성 대장암 마우스 모델 확립을 위한 암세포 전달 기술)

- Intracecal orthotopic tumor injection은 cecal tissue histotype과 일치하는 종양 세포를 수용 동물의 맹장으로 직접 전달합니다. 먼저 마취된 마우스를 수술할 준비를 합니다. 맹장을 외부화하기 위해 복벽을 절개합니다. 장내 연동 운동을 줄이기 위해 두칼 벽을 긁어냅니다. 결장직장암 세포 또는 CRC 현탁액이 들어 있는 주사기를 맹장 위에 평행하게 정렬합니다.

다음으로, 맹장을 늘려 주름을 제거합니다. 끝이 얇고 반투명한 바깥쪽 장 막 또는 혈청막만 뚫리도록 캐뉼라 위로 맹장을 부드럽게 당깁니다. 다음으로, 장막과 내부 근육층 사이의 공간에 암세포 현탁액을 주입합니다. 세포 현탁액의 완전한 전달을 보장하고 캐뉼라를 후퇴시킵니다. 맹장을 복강으로 되돌려 놓고 수술 절개 부위를 봉합합니다. 마우스가 복구되도록 합니다.

주사 후 며칠 이내에 정소성 종양이 주사 부위에서 발생하거나 멀리 떨어진 조직이나 장기로 전이됩니다. 다음 프로토콜에서는 정소성 CRC 마우스 모델을 개발하기 위한 intracecal colorectal cancer cell injection 기술을 시연할 것입니다.

- 먼저 무외상성 겸자를 사용하여 6주에서 8주 된 면역력이 저하된 쥐의 맹장을 조심스럽게 외부화하고 맹장의 막힌 끝을 복부에 올려 주머니가 두개골을 가리키도록 합니다. intracecal 주사의 경우, 30 게이지 캐뉼라가 장착되고 종양 세포가 적재된 표준 1ml 주사기를 미세 조작기에 장착된 미세 주입 펌프에 장착합니다. 다음으로, 외상성 겸자를 사용하여 맹장 끝을 조심스럽게 잡고 따뜻한 식염수를 적신 두 번째 집게를 사용하여 맹장을 아래쪽으로 부드럽게 펴줍니다.

이제 양안 수술 현미경으로 동물을 옮기고 캐뉼라가 맹장과 바로 평행하고 위에 있는 상태에서 두 개의 외상성 집게를 사용하여 맹장의 바깥쪽 끝 양쪽 끝에 있는 조직을 조심스럽게 늘립니다. 초기 침투 지점을 넘어 전체 장 벽이나 장막에 구멍이 뚫리지 않도록 주의하면서 캐뉼라 위로 맹장을 천천히 당기고 캐뉼라를 혈관 위와 장 벽 내부의 얇은 반투명 막 아래에 놓습니다. 캐뉼라가 제자리에 있으면 풋스위치를 사용하여 벽내 혈관 위의 얇은 반투명 혈청 내막과 근육 사이에 20초 동안 20마이크로리터의 세포를 주입합니다.

모든 세포가 주입되면 캐뉼라를 조심스럽게 제거하고 맹장 아래에 마른 면봉을 놓습니다. 인공 복막 전파를 방지하기 위해 누출된 세포를 철저한 증류수 헹굼으로 용해하고 맹장을 복강으로 부드럽게 되돌려 놓습니다. 6-0 빠르게 흡수되는 러닝 러닝 봉합사로 복벽을 닫고 수술 상처 클립으로 피부를 닫습니다. 그런 다음 섭씨 38도로 설정된 가열 매트에 마우스를 놓고 완전히 누울 때까지 모니터링합니다.