생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

인간의 암과 치료에 대한 반응은 정소성 동물 모델에서 더 잘 표현됩니다. 이 비디오에서는 루시페라아제를 발현하는 인간 난소 종양 세포를 각 난소가 둘러싸인 마우스 윤활낭에 직접 주입합니다. 그런 다음 경구 위장으로 약물을 투여하여 약물을 위장으로 직접 전달합니다. 루시퍼.

반딧불이 루시퍼라아제의 기질을 주입하여 루시페라아제 발현 세포가 생물 발광 신호를 생성하도록 합니다. 생물 발광 신호를 통해 개별 동물의 생체 내 이미징을 통해 종양의 성장, 분포 및 퇴행을 추적할 수 있습니다. 이미징 결과는 난소에 주입된 종양 세포가 왼쪽 마우스의 난소에 남아 복막강으로 퍼져 있음을 나타냅니다.

오른쪽 마우스에서 인간 난소암에 대한 전이성 전이의 주요 부위. 종양 세포의 피하 또는 복강 내 주사와 같은 기존 이종 이식 모델에 비해 정소성 동물 모델의 주요 장점은 인간 암에 대해 더 잘 표현되어 치료에 대한 반응으로 인간 암에 대한 더 나은 이해를 제공한다는 것입니다. 이 절차는 다른 사람의 도움이 필요합니다.

모든 수술 절차는 수술복과 멸균 수술 기구를 포함한 무균 상태에서 수행됩니다. 주사기와 주사 바늘은 집게나 손가락으로 동물의 뒷발을 꼬집어 동물이 허용 가능한 마취 상태에 있는지 확인합니다. 페달 반사가 있는 경우, 동물이 이 절차에 반응하지 않을 때까지 더 깊은 마취 평면을 기다립니다.

동물의 머리가 반대를 향하도록 멸균 거즈 패드 위에 동물의 등쪽이 위로 향하게 놓습니다. 절개 지점을 정중선의 왼쪽 또는 오른쪽과 난소 위에 배치합니다. 그런 다음 집게를 사용하여 70% dec 에탄올로 해당 부위를 적십니다.

젖은 피부를 들어 올리고 가위를 사용하여 난소 지방 패드 바로 위의 등쪽 내측 위치를 작게 절개합니다. 난소 지방 패드는 복막벽 표면 아래에서 볼 수 있어야 하며 주변을 둘러싼 짙은 분홍색 조직과 대조적으로 흰색으로 쉽게 알아볼 수 있습니다. 그런 다음 복막 벽 내벽을 부드럽게 들어 올리고 세로로 작게 절개합니다.

이전과 같습니다. 절개 부위에 인접한 정중선에 소독된 식염수 거즈 패드를 놓습니다. 난소 지방 패드를 찾습니다.

부드럽게 당겨서 거즈 위에 올려 놓습니다. 해부 현미경 아래에서 불독 클립으로 지방 패드를 고정하여 난소를 안정화하고 난소를 배치하여 난관을 찾습니다. 그런 다음 5마이크로리터의 오카가 적재된 주사기의 30게이지 바늘을 삽입합니다.

반딧불이 루시퍼라아제를 윤활낭으로 이어지는 난관 굴곡부로 발현하는 5개의 인간 난소암 세포. 바늘이 올바른 위치에 삽입되면 한 사람이 바늘의 위치를 유지하면서 윤활낭 아래에서 볼 수 있어야 합니다. 두 번째 사람은 주사기의 플런저를 부드럽게 밀어 세포 현탁액을 윤활낭과 난소 사이의 공간에 주입해야 합니다.

펑크 부위를 밀봉하기 위해 바늘을 빠르게 제거하십시오. 윤활낭과 세뇨관이 찢어지지 않도록 주의합니다. 윤활낭이 약간 팽창된 것처럼 보여야 합니다.

불독 클립에서 지방 패드를 풀고 생식관과 지방 패드를 복막강으로 부드럽게 교체합니다. 위쪽 복막 내벽을 아래쪽 내막 위로 당겨 체벽을 부드럽게 닫습니다. 수술용 스테이플로 피부를 봉합합니다.

회복 중인 동물을 다시 우리에 넣고 저체온증을 피하고 회복 속도를 높일 수 있도록 안전한 열원을 제공합니다. 호흡 속도를 모니터링하고 근육 긴장도의 회복과 자발적으로 움직일 수 있는 능력을 완화합니다. 구강 개배는 18-20 게이지 개배젼을 사용하여 개배젼은 동물의 머리 꼭대기에서 마지막 갈비뼈까지의 거리보다 길지 않아야 합니다.

엄지와 손가락으로 마우스의 어깨 너머 피부를 부드럽게 잡고 이 절차를 시작합니다. 구속은 앞다리가 방해가 되지 않도록 양쪽으로 뻗을 수 있을 만큼 충분해야 합니다. 동물이 바늘을 잡을 수 없어야 합니다.

그림과 같이 동물의 머리를 부드럽게 뒤로 당겨 목과 식도를 통해 직선을 만듭니다. 엄지 손가락 안쪽으로 동물의 등을 힘없이 부드럽게 지지하십시오. 입 양쪽과 혀 위에 개비지 바늘을 삽입합니다.

한 번의 부드러운 동작으로 바늘은 입천장을 지나 식도를 따라 내려가야 합니다. 중력은 바늘을 아래로 안내해야 하며 저항이 없어야 합니다. 저항이 있으면 바늘을 제거하고 다시 시작하십시오.

동물의 재갈과 삼킴 반사는 삽입 중에 유발될 수 있습니다. 그러나 동물이 헐떡거려서는 안 됩니다. 바늘이 제자리에 있으면 콧구멍과 가슴의 움직임을 확인하여 마우스가 숨을 쉬고 있는지 확인합니다.

그런 다음 주사기의 플런저를 천천히 밀어 투여량을 분배합니다. 삽입 된 것과 동일한 각도와 경로로 gavage 바늘을 부드럽게 제거합니다. 동물을 우리로 되돌려 놓고 5분에서 10분 동안 호흡과 행동을 모니터링합니다.

여기서 IVUS 스펙트럼 이미징 시스템은 윤활낭 내 실험에 주입된 세포의 거동을 모니터링하는 데 사용됩니다. 이 시스템을 사용하면 일반적으로 종양 이식 시점으로부터 4주에서 16주 사이의 기간이 소요됩니다. LUCIFERIAN 용액을 30게이지 바늘이 부착된 주사기에 넣습니다.

발가락 꼬집음으로 불소, 마취 된 마우스의 마취 깊이를 확인하십시오. 그런 다음 IP 주입을 통해 준비된 Luciferian 용액 200마이크로리터를 제공합니다. 그런 다음 루시퍼를 주입한 동물을 유도실에 다시 넣습니다.

루시퍼 주입과 이미징 성능 사이의 시간을 일정하게 유지하기 위해 주입 시간을 기록합니다. 연구 전반에 걸쳐 마취된 동물, 등쪽 또는 복부 쪽을 이미징 스테이지에 놓습니다. 적절한 마취 유도를 유지하기 위해 동물의 코와 콧방울을 배치합니다.

동물이 녹색 조명으로 표시된 관심 지점 그리드 내에 있는지 확인하십시오. 이미징 시스템을 적절한 설정으로 설정합니다. 첫 번째 동물 이미지를 획득하기 전에 시스템을 초기화

적절한 시간에 이미징 챔버의 도어를 닫습니다. 이미지를 획득합니다. 이미징 챔버에서 동물을 꺼내 케이지에 다시 넣습니다.

동물의 회복 상태를 모니터링하십시오. O carv 이전과 같이, 루시퍼라아제를 발현하는 5개의 세포를 Sally 내에서 마우스의 오른쪽 난소에 주입했습니다. 그리고 생체 내 이미징을 수행했습니다.

이미지는 주사 후 13일, 17일, 22일 후에 촬영했습니다. IVUS 스펙트럼 이미징 시스템을 사용하여 등쪽은 위쪽 패널에 표시되고 복부 쪽은 아래쪽 패널에 표시됩니다. 종양 세포의 복막 퍼짐에 주목하십시오.

루시퍼라제 발현 세포의 주사 후 22일. 또한 생체 내 이미징 기술은 개별 동물의 종양 성장 및 분포를 추적하는 비침습적 수단을 가능하게 합니다. 인간의 암과 치료에 대한 반응은 정형소 동물 모델에서 더 잘 표현됩니다.

여기에 제시된 기술은 난소암의 발병과 전이를 이해하고 궁극적으로 이 치명적인 질병을 앓고 있는 환자의 결과를 개선할 수 있는 새로운 치료 요법을 평가하는 데 유용합니다.