박테리오파지를 열거하기 위한 정량적 중합효소 연쇄 반응(Quantitative Polymerase Chain Reaction to Enumerate Bacteriophage)

농도를 알 수 없는 10개의 바이오패닝 파지 샘플과 표준 농도의 7개 샘플에 대한 qPCR 프리믹스를 3중으로 준비하여 255마이크로리터의 qPCR 마스터 믹스, 51마이크로리터의 프라이머 및 102마이크로리터의 물을 포함하는 51개의 샘플에 대한 프리믹스를 만듭니다.

준비된 PCR 혼합물 8마이크로리터를 96웰 qPCR 플레이트의 51웰에 분취합니다. 다음으로, 2마이크로리터의 열처리된 T7 파지 샘플을 각 웰에 추가하여 qPCR 프리믹스의 표면 아래에 분주합니다. 접착 필름을 사용하여 플레이트를 밀봉합니다.

형광 광표백을 최소화하기 위해 플레이트를 알루미늄 호일로 감싼 다음 qPCR 장비에서 플레이트를 실행합니다. 사이클링 조건과 용융 곡선 설정을 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 설정합니다.