글리코겐 분지화의 정도를 측정하기 위한 글리코겐 분지화 분석

글리코겐과 같은 분지형 다당류는 알파-1,4-글리코시드 결합을 통해 선형으로 연결된 포도당 잔기와 알파-1,6-글리코시드 결합을 통해 분지로 결합된 포도당 잔기를 포함합니다.

다당류의 분지 정도를 결정하려면 요오드화칼륨, 요오드 및 염화칼슘을 함유한 수성 착색 시약으로 시작하십시오. 수성 조건에서 요오드화칼륨과 요오드는 요오드화 이온을 생성합니다.

별도의 미세 원심분리기 튜브에서 시약을 알려진 분지 구조의 다당류 및 특성화되지 않은 구조의 글리코겐 샘플과 혼합합니다.

다당류는 알파-1,4-글리코시드 결합을 통해 나선형 구조를 채택합니다. 요오드화물 이온은 이 나선형 코어에 결합하여 선형 폴리요오드화물 사슬을 형성합니다. 그 결과 다당류와 폴리요오드화물 사슬 사이에 전하 전달 복합체가 형성되어 유색 다당류-요오드화물 복합체가 생성됩니다.

더 긴 폴리요오드화물 사슬을 가진 분지되지 않은 다당류는 파란색을 띠는 반면, 더 짧은 폴리요오드화물 사슬을 가진 분지형 다당류는 황색에서 주황색-갈색 복합체를 발달시킵니다. 시약의 염화칼슘은 복잡한 색상을 강화합니다.

혼합물을 일회용 큐벳으로 옮깁니다. 분광 광도계를 사용하여 330에서 800 나노미터까지 흡광도 스펙트럼을 측정합니다.

파란색을 띠는 분지되지 않은 복합체는 더 긴 파장의 빛을 흡수하여 흡광도 최대치의 오른쪽으로 이동하는 것을 보여줍니다. 대조적으로, 분지 복합체는 더 짧은 파장의 빛을 흡수하며, 흡광도 최대값이 왼쪽으로 이동하면 구조에서 더 높은 분기가 있음을 나타냅니다.

약 450나노미터에서 특성화되지 않은 글리코겐 샘플의 흡광도 최대값은 분지 구조를 확인합니다.

글리코겐 분지를 결정하려면 650마이크로리터의 요오드/염화칼슘 컬러 시약 스톡과 100마이크로리터의 물을 1.5밀리리터 튜브에 넣고 용액을 완전히 혼합한 후 일회용 메타크릴레이트 큐벳으로 옮깁니다. 큐벳을 분광 광도계에 넣어 330에서 800 나노미터까지의 배경 스펙트럼을 수집하기 위해 파장 스캐닝 모드로 실행을 수행합니다.

별도의 1.5밀리리터 튜브에 650마이크로리터의 작동 요오드/염화칼슘 컬러 시약과 50마이크로그램의 굴 글리코겐을 결합하고 최종 부피를 물과 함께 750마이크로리터로 만듭니다. 혼합물을 완전히 혼합한 후 용액을 일회용 메타크릴레이트 큐벳으로 옮겨 330에서 800나노미터의 흡수 스펙트럼을 수집합니다.

유사하게, 앞서 설명한 바와 같이 50마이크로그램의 아밀로펙틴과 30마이크로그램의 아밀로오스로 흡수 스펙트럼을 얻는다.

특성화되지 않은 글리코겐 샘플의 분지 구조의 표시를 얻으려면 25 내지 50 마이크로그램의 글리코겐을 650 마이크로리터의 작동 요오드/염화칼슘 컬러 시약과 결합하고 앞서 설명한 대로 진행하여 흡수 스펙트럼을 획득합니다.