백혈구 모집에 대한 기질 세포의 효과에 대한 체외 흐름 조사

트랜스웰 필터가 있는 유량 시스템에 연결된 사전 조립된 플로우 챔버를 가져 가십시오: 하나는 상단에 내피 단일 배양이 있고 다른 하나는 상단에 내피 배양이 있고 하단에 간질 세포가 있습니다.

두 챔버 모두 전염증성 사이토카인으로 전처리됩니다.

단일 배양에서 사이토카인은 내피 세포를 활성화하여 접착 분자 발현을 상향 조절합니다.

그러나 공동 배양에서 간질 세포와 내피 세포 사이의 혼선은 간질 세포가 전염증성 사이토카인에 대한 내피 세포의 반응을 하향 조절하는 조절 매개체를 생성하는 간질 세포로 이어집니다.

챔버를 반전 위상 대비 현미경 스테이지에 배치하십시오.

호중구 현탁액을 도입합니다.

호중구는 일시적인 접착 상호 작용을 통해 모집되어 내피 접착 분자에 결합하여 표면 결합 케모카인과의 상호 작용을 촉진하고 내피를 따라 굴러갑니다.

이 상호 작용은 호중구의 인테그린을 활성화하여 접착력을 안정화하고 내피 세포를 가로질러 이동을 초래합니다.

그러나 공동 배양에서 하향 조절된 내피 반응은 호중구 모집을 억제합니다.

흐름에서 호중구 모집을 평가하기 위해 위상차 현미경 하에서 배양을 시각화합니다.

필터 모델의 경우 먼저 금속 템플릿을 사용하여 파라필름 조각을 유리 커버슬립과 동일한 크기로 자릅니다. 그런 다음 금속 템플릿을 사용하여 파라필름에서 20 x 4mm 슬롯을 잘라 흐름 채널을 만듭니다. 파라필름 개스킷을 사용하여 유리 커버 슬립에 흐름 채널을 표시합니다. 유리 커버 슬립에 6웰 필터의 가장자리를 맞춥니다. 필터가 유동 채널 표시를 덮고 있는지 확인하십시오. 유형 10A 메스를 사용하여 필터를 조심스럽게 잘라냅니다.

그런 다음 파라필름 개스킷으로 필터를 조심스럽게 덮고 흐름 채널 슬롯이 필터 중앙에 있는지 확인합니다. 깨끗한 티슈를 사용하여 거품을 밀어냅니다. 이제 Perspex 흐름 챔버의 바닥판 홈에 커버슬립을 놓습니다.

상단 방풍 플레이트를 개스킷 상단 위에 놓고 플레이트를 함께 나사로 조입니다. 3방향 탭을 돌려 PBS-A 세척 완충액이 밸브를 통해 흐르도록 합니다. 그런 다음 압력계 튜브를 상단 방풍 플레이트의 입구 포트에 연결합니다. 기포가 통과할 수 있도록 흐름 채널을 통해 PBS-A를 실행합니다.

그런 다음 주사기 펌프의 압력계 튜브를 Perspex 플레이트의 출구 포트에 연결합니다. 챔버의 상판에 떨어진 PBS-A를 청소하십시오. 마지막으로, 챔버를 거꾸로 된 위상차 현미경의 스테이지에 놓고 초점을