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신경과학
0 조회수 • 5:13 분 • July 8th, 2025
뇌의 하부 영역 내의 영역인 복부 해마 영역을 포함하는 출생 후 마우스 뇌 관상 섹션으로 시작합니다.
복부 해마 조직을 절단하여 적절한 배지로 옮깁니다.
조직을 더 작은 조각으로 자르고 멀티웰 플레이트의 매트릭스 코팅 커버슬립에 부착합니다.
조직의 뉴런이 돌출을 확장하기 시작합니다.
다음으로, 전뇌 깊숙한 곳에 있는 작은 조직인 쥐 배아 유래 측좌핵을 취합니다.
측좌핵 조직을 작은 조각으로 자릅니다. 튜브로 옮깁니다.
소화 효소를 첨가하여 세포외 기질 단백질을 해리시킵니다. 효소 수치를 낮추기 위해 씻으십시오.
조직 조각을 위아래로 피펫팅하여 단일 세포를 생성합니다.
세포를 원심분리합니다. 상청액을 제거하고 세포를 재현탁합니다.
이 현탁액을 복부 해마 조직과 함께 커버슬립에 추가하고 배양합니다.
복부 해마 조직 조각의 신경 말단은 측좌핵의 신경 세포와 연결되어 시냅스라고 하는 통신 접합부를 형성합니다.
조직 수집 전에 12mm 폴리-D-라이신 적층 코팅 유리 커버슬립을 섭씨 37도에서 500마이크로리터의 배양 배지와 함께 24웰 조직 배양 플레이트에 사전 배양합니다. 그런 다음 마이크로 슬라이스를 도금하기 전에 미디어를 제거합니다. 배양을 위해 조직을 수집하려면 두개골 꼭대기를 제거하여 희생된 각 강아지의 전체 뇌를 노출시킵니다.
해부 현미경으로 대뇌 피질이 꼬리쪽으로 서로 분리되는 접합부에서 시작하여 복부 해마를 포함한 후방 피질을 포함하는 관상 단면을 얻습니다. 다음으로, CA1-subiculum 영역을 포함하는 복부 해마 조직을 해부합니다. 그런 다음 조직을 차가운 배양 배지가 들어 있는 35mm 배양 접시로 옮깁니다.
그런 다음 조직을 작고 얇은 조각으로 더 자릅니다. 외식편을 쉽게 부착할 수 있도록 커버슬립 중앙에 50마이크로리터의 배지로 불로 연마된 파스퇴르 피펫으로 슬라이스를 도금합니다. 그런 다음 복부 해마 마이크로 슬라이스를 커버슬립에 도금합니다.
외식편이 커버슬립에 안착된 후 매체의 높이가 커버슬립 중앙에 있는 외식편을 완전히 덮을 수 있을 만큼 충분히 높아지도록 벽 옆에 100마이크로리터의 추가 매체를 부드럽게 추가합니다. 그런 다음 측좌핵 뉴런이 분산되기 전에 섭씨 37도에서 5% CO2에서 외식편을 밤새 배양합니다. 이제, 배아 18일부터 출생 후 1일까지의 측좌핵 조직을 야생형 마우스로 얻습니다.
작은 조각으로 자릅니다. 그런 다음 15밀리리터 튜브에 옮깁니다. 섭씨 37도에서 15분
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