성체 초파리 파리의 관통 외상성 뇌 손상 유도

새로 등장한 유전자 변형 성체 초파리 파리를 예로 들어 보겠습니다.

파리의 뇌에 있는 버섯체에는 녹색 형광 단백질을 발현하는 뉴런이 포함되어 있습니다.

버섯체는 학습과 기억에 필수적인 복잡한 신경 네트워크를 포함하는 구조입니다.

산화탄소 패드에 파리를 마취시킵니다.

필요한 필터가 장착된 실체 현미경에서 녹색 형광을 발현하는 버섯 몸체를 시각화합니다.

소독된 Minutien 핀을 가져다가 헤드 캡슐을 통해 버섯 몸체로 밀어 넣습니다.

이것은 버섯체 뉴런에 손상을 입히고 신경 네트워크를 방해하여 관통성 외상성 뇌 손상을 일으킵니다.

그런 다음 플라이에서 핀을 부드럽게 제거합니다.

부상당한 파리를 음식과 함께 약병에 넣고 추가 연구를 위해 회복할 수 있도록 하십시오.

산화탄소 패드에 파리를 마취한 후, 새로 폐쇄된 F1 어린 수컷 파리를 황폐 후 6시간 이내에 분류하고 바이알당 40마리 이하의 파리가 들어 있는 음식이 들어 있는 깨끗한 바이알에 넣습니다. 다음으로, 70% 에탄올로 채워진 1.5밀리리터 미세 원심분리기 튜브에 약 100개의 핀을 5분 동안 넣어 미세한 핀을 소독합니다. 그런 다음 70% 에탄올을 뿌리고 깨끗하고 보푸라기가 없는 티슈로 물기를 닦아 붓으로 이산화탄소 패드를 소독합니다.

도구가 깨끗하고 건조되면 40개 이하의 분류된 F1 수컷을 깨끗한 패드에 옮기고 두 그룹으로 나눕니다. 한 그룹은 부상을 입지 않은 대조군 파리 역할을 하고 두 번째 실험 그룹은 관통성 외상성 뇌 손상을 받게 됩니다. 그런 다음 집게를 사용하여 미세 원심분리기 튜브에서 4-5개의 새 미세한 핀을 빼내어 이산화탄소 패드 가장자리 근처에 놓습니다. 그런 다음 해부 범위 아래에서 뾰족한 끝이 있는 직선 미누티엔 핀을 선택합니다. 날카로운 핀을 재사용하고 손상되거나 뭉툭한 핀을 안전한 폐기를 위해 70% 에탄올이 들어 있는 별도의 튜브에 넣으십시오.

다음으로, 표준 교차 유전자형을 가진 파리의 경우 녹색 형광 단백질에 대한 적절한 여기 및 방출 필터가 장착된 입체 현미경 LED 램프를 켜면 440 내지 460 나노미터에서 여기가 가능하고 500 내지 560 나노미터에서 시각화가 가능합니다. 그런 다음 실험군에서 파리를 선택하고 실험자가 파리의 머리가 오른쪽에 있는 머리 캡슐의 등쪽 보기를 볼 수 있도록 파리를 배치합니다. 집게를 사용하여 선택한 미누티엔 핀을 한 손으로, 다른 한 손에는 붓을 잡습니다. 그런 다음 등쪽 흉부 안쪽에 브러시를 놓고 부드럽게 아래로 눌러 플라이를 안정시킵니다.

미누티엔 핀의 끝을 버섯 몸체, 머리 오른쪽의 세포 몸체에 겨냥하고 머리 캡슐을 관통합니다. 랜드마크를 사용하는 경우 ocelli와 눈의 등쪽 가장자리 사이의 등쪽 머리 큐티클을 목표로 합니다. 부상을 마친 후 붓을 사용하여 머리를 미세한 핀에서 부드럽게 밀어냅니다. RNA 시퀀싱 또는 qRT-PCR에 뇌를 사용하는 경우 머리 왼쪽에 두 번째 부상을 입힙니다. 모든 실험 파리가 다치면 대조군과 부상당한 파리를 음식이 들어 있는 별도의 라벨이 붙은 바이알에 넣습니다.