성체 신경 줄기 세포의 신경 계통을 모니터링하기 위한 라이브 이미징 및 단일 세포 추적

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세포 생존력과 단일 세포 추적을 보장하기 위해 최적의 밀도로 폴리-D-라이신 코팅 멀티웰 플레이트에 성체 신경 줄기 세포를 시드합니다.

배양하는 동안 세포는 코팅된 표면에 부착되어 이미징 중 정밀한 시각화를 위한 안정적인 플랫폼을 제공합니다.

세포가 없는 우물을 표시하여 현미경 좌표에 대한 기준점을 설정합니다.

최적화된 조건에서 현미경의 배양 챔버 내부에 플레이트를 옮기고 고정하여 세포 생존력을 유지하고 전동식 스테이지 이동 중에 원치 않는 움직임을 방지합니다.

일관된 이미지 초점을 보장하기 위해 셀이 챔버 조건에 평형을 이룰 수 있도록 합니다.

기준점을 기준으로 이미징할 셀이 포함된 영역을 선택합니다. 그런 다음 타임랩스 현미경 매개변수를 구성합니다.

위상차 타임랩스 현미경을 수행하여 일정한 간격으로 살아있는 세포를 이미지화하여 광독성을 최소화합니다.

단일 세포 추적 소프트웨어를 사용하여 캡처된 이미지를 처리하여 세포 증식을 추적하고 계통 진행을 시각화합니다.

살아있는 세포 추적을 통해 세포 분열 및 분화를 연구할 수 있습니다.

이 절차를 시작하려면 웰당 1밀리리터의 배양 배지로 폴리-D-라이신 코팅된 24웰 플레이트에 세포를 직접 시딩합니다. 라이브 이미징 전 2시간 동안 성인 신경 줄기 세포의 경우 섭씨 37도 및 이산화탄소 8%에서 플레이트를 배양합니다. 현미경, 카메라, 하드웨어 및 배양 시스템을 켭니다.

성체 신경줄기세포의 경우 온도와 기압을 섭씨 37도, 이산화탄소 8%로 설정합니다. 온도와 이산화탄소 수치가 1-2시간 동안 안정화되도록 하십시오. 세포가 플레이트에 단단히 부착되면 유성 마커를 사용하여 추적에 사용되지 않는 웰 바닥에 작은 표시를 합니다.

현미경의 배양 챔버 (incubation chamber) 내부에 플레이트를 놓고 플레이트를 스테이지에 단단히 부착하여 현미경의 전동 스테이지가 변위되는 동안 원치 않는 움직임을 피하십시오. 그런 다음 세포 배양 배지의 온도가 약 20분 동안 챔버에서 평형을 이룰 수 있도록 합니다.

라이브 이미징 소프트웨어를 시작하고 타임랩스 모듈을 선택하여 실험을 설정합니다. 실험의 총 기간, 이미지 획득 주기 및 예약된 시간 탭 메뉴를 설정합니다. x-좌표와 y 좌표로 정의된 이미지 위치와 XYZ 포인트 탭 메뉴에서 초점 거리를 선택합니다.

이전에 만든 마크를 XYZ 참조 영점 위치로 사용할 위치 번호 1로 사용합니다. 획득 유형 및 파장 선택 탭 메뉴, 명시야만을 선택하거나 필요한 경우 낙산화형광 여기와 함께 선택합니다. 그런 다음 노출 시간을 선택합니다. 그런 다음 실험의 이름과 이미지가 저장될 폴더를 정의합니다. 위치 목록을 저장하여 언제든지 실험을 다시 로드할 수 있습니다.

모든 조건이 설정되면 지금 실행 단추를 클릭하여 실험을 실행합니다. 실험을 일시 중지하고 포커스 조건을 다시 조정하고 실험이 완료될 때까지 하루에 한 번 Z 덮어쓰기 버튼을 클릭합니다.

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Last updated: 18 July 2026