설치류의 어쿠스틱 놀라게의 요법 이니 및 Prepulse 억제

이 절차의 전반적인 목표는 습관화 및 사전 펄스의 형태로 설치류의 감각 게이팅을 평가하는 것입니다. 음향 놀람 반응의 억제는 동물들이 놀람 상자에 적응하도록 하는 것으로 실험을 시작합니다. 동물이 적응하면 테스트 프로토콜이 실행되고 데이터가 수집됩니다.

궁극적으로, 결과는 거주의 양과 과정, 그리고 음향 놀람 반응의 진폭 변화를 통한 사전 펄스 억제의 양을 보여줍니다. 이 방법은 감각 필터링과 설치류를 평가하지만 인간과 다른 많은 척추 동물 및 무척추 동물에도 적용 할 수 있습니다. 일련의 실험을 하기 전에 사운드 미터를 사용하여 ampliifier 입력은 라우드스피커가 제어 기기에서 설정한 것과 동일한 볼륨을 변환합니다.

그런 다음 놀람 상자의 변환기 플랫폼 감도를 보정합니다. 공급업체의 설명서에 따르면 시스템을 보정할 때 진행 중인 실험이 없고 모든 상자가 동일한 방식으로 보정되었는지 확인하십시오. 생쥐를 실험자, 절차 및 65-68 데시벨의 배경 소음으로 2-5 분 동안 비 구속 마우스 홀더의 놀람 상자에 적응시킵니다.

이 절차를 3-5회 반복하고, 하루에 한두 번 배변과 배뇨가 중단되거나 현저히 감소할 때까지 항상 피험자 사이에 동물 홀더를 교체하고 청소하십시오. 동물을 한두 번 다루어야 비구속 동물 홀더에 넣고 배경 소음에 노출시킬 수 있습니다. 홀더에서 동물을 제거한 후 전체 프로토콜이 실행되기 전에 해바라기씨로 보상합니다.

이 절차를 두 번 더 반복합니다. 새로운 랫드 또는 마우스 균주가 측정될 때 적응 시간을 10분으로 점진적으로 확장합니다. 먼저 입력 출력 함수를 설정합니다.

동물들에게 5분에서 10분의 적응 기간을 주고 65에서 68데시벨의 일정한 배경 백색 소음을 냅니다. 순응 후 동물들은 20초마다 깜짝 놀람을 유발한다. 놀람 자극은 약 70-75 데시벨에서 시작하여 노출 사이에 2-5 데시벨씩 부피가 증가합니다.

궁극적으로 120-130 데시벨에 도달합니다. 그 결과 자극 강도가 증가하는 20-30회의 시행이 이루어졌습니다.놀람, 맥박 및 사전 펄스, 강도, 자극 간 간격 및 시험 간 간격과 같은 테스트 매개변수는 사용된 동물 모델의 청력 및 운동 능력에 따라 신중하게 선택해야 합니다. 여기에서 우리는 이전의 많은 연구와 비교할 수 있는 일반적인 프로토콜을 제안합니다.

이 프로토콜은 다음 블록으로 나뉩니다. 첫째, 적응 기간입니다. 둘째, 블록 1이라고 하는 놀람 습관화를 허용하는 블록과 세 번째 블록은 사전 펄스 억제를 위한 블록입니다.

블록 2라고 하는 측정. 블록 1은 거주로 인한 놀람 감쇠가 PPI를 방해하지 않도록 실행됩니다. 측정은 4개의 실험실 각각에 동물을 한 마리씩 넣는 것으로 시작됩니다.

예를 들어, 실험 내에서 다른 유전자형 또는 주사와 같은 다른 그룹의 동물이 테스트되는 경우 챔버 수와 테스트 순서 측면에서 의사 무작위 추출합니다. 동물을 반복적으로 테스트하면 개별 쥐에서 반복되는 PPI 테스트를 위해 동일한 깜짝 놀람 상자에서 다시 테스트해야 하지만 마우스가 데이터를 수집하기 전에 이 전체 테스트 프로토콜을 한 번 실행해서는 안 됩니다. 순진한 동물은 데이터 수집 전에 한 번 테스트를 경험할 수 있습니다.

PPI 데이터 변동성은 첫 번째 테스트 세션과 두 번째 테스트 세션 사이에 감소하는 경우가 많기 때문입니다. 또한, PPI를 측정할 때 장기간의 습관화는 혼란스러운 변수가 될 수 있으며, 이러한 장기적 습관화의 대부분은 동물이 놀람 프로그램에 처음 노출되는 시점과 두 번째 노출 시점 사이에 감소합니다. 동물을 5-10분 동안 65-68데시벨의 백색 소음에 적응시키는 것으로 테스트를 시작합니다.

다음으로, 단기 습관화 블록을 실행합니다. 이것은 설치류에게 22번째 간격으로 20밀리초의 백색 소음 폭발을 가하는 것을 포함합니다. 10초에서 30초 사이의 임의 간격 시간도 사용할 수 있습니다.

놀람 자극의 강도는 이상적으로는 입력 출력 함수가 안정되는 곳이며, 이는 일반적으로 105에서 115 데시벨 사이입니다. 다음으로 PPI를 측정합니다. 이 블록 동안에는 깜짝 펄스만 있는 유사 무작위 시험과 사전 펄스만 사용한 시험이 제시되며, 배경 및 놀람 자극, 볼륨 및 시험 간 간격은 습관화 단계와 동일하게 유지됩니다.

프리 펄스 자극은 습관화 단계 펄스와 동일한 가파른 상승으로 백색 잡음에서 생성되지만 지속 시간은 4밀리초로 줄어듭니다. PPI 측정 중에는 두 가지 매개 변수가 있습니다. Interra 자극 간격은 프리 펄스와 놀람 펄스 자극의 표시 사이의 시간이며, 이 예에서는 30 및 100 밀리 초가 선택되었습니다.

둘째, 다양한 프리 펄스 강도(예: 75 및 85 데시벨)를 선택합니다. 다음으로, 4가지 다른 PrepU 펄스 시험 유형과 놀람 펄스 단독 시험 및 각 시험 유형을 총 50번의 시도에 대해 10회 의사 무작위 배정합니다. 때로는 동물이 PrepU에 놀라지 않는다는 것을 보여주기 위해 pre pulses로만 구성된 6가지 시험 유형을 추가하는 것이 좋습니다.

MET 연관 장비를 사용하면 이러한 유형의 오류를 감지할 수 있는 이 시험 유형의 프레젠테이션을 수행할 수 있습니다. 깜짝 놀람 상자에서 동물을 꺼내 집 우리로 되돌려 놓습니다. 장기 습관화 또는 LTH를 측정하려면 이후 최소 5일 동안 전체 프로토콜을 실행합니다.

블록 2는 블록 1이 매일 최소 100개의 놀람 자극을 포함하는 경우 생략할 수 있습니다. 놀람 반응 진폭은 일주일 주기가 진행되는 동안 변동하기 때문에 실행을 동시에 수행해야 합니다. 평가판을 완료하면 데이터를 적절하게 저장, 분석 및 제시하도록 주의하십시오.

설치류는 일반적으로 85-90 데시벨 이상의 부피에서 놀라기 시작합니다. 놀람 반응은 볼륨이 증가함에 따라 증가하며 일반적으로 100에서 110 데시벨에서 최대에 이릅니다. 동물이 이러한 값에서 현저히 벗어나면 동물은 청각 또는 운동 장애를 가질 수 있으며, 가장 강력한 습관화 효과는 처음 몇 가지 자극을 잘 다루었을 때 일반적으로 발생합니다.

쥐는 일반적으로 초기 놀람 반응의 약 60%에 익숙해지는 반면, 쥐는 일반적으로 두 종 모두에서 기준선의 약 80%에 익숙해집니다. 개인차와 변형률의 차이는 매우 클 수 있습니다. 대부분의 쥐는 최적의 사전 펄스를 받았을 때 기준선의 약 10%에서 PPI를 보여줍니다.

PPI는 매우 견고하고 이러한 실험 환경에서 개인차가 상대적으로 작고, 부피가 작고, 사전 펄스는 동물 내에서도 PPI가 적고 변동성이 더 높을 뿐만 아니라 약리학적 또는 유전자 조작에 더 취약한 것으로 보입니다. 장기간의 습관화는 여러 테스트 세션을 통해 관찰할 수 있습니다. LTH는 쥐에서 LTH를 관찰하는 데 매우 강력합니다.

그러나 각 세션에서 많은 수의 놀람 자극을 제시하는 것은 일반적으로 이 표준 절차에 따라 필요합니다. 특정 질문에 답하기 위해 일부 매개 변수가 변경될 수 있습니다. 이 방법은 감각 필터링에서 특정 신호 분자와 뇌 구조의 역할을 연구하기 위해 전신 주사 및 입위 주사와 결합할 수 있습니다.