소설 허벌 요법을 평가하는 패혈증의 동물 모델의 사용

패혈증은 미생물 감염으로 인한 전신 염증 반응 증후군을 참조하고, cecal 내고 주사 (CLP)을 되나 수술 기법에 의한 시뮬레이션이 될 수 있습니다. 여기 치료 대리인을위한 약초를 구분할 CLP 유발 동물 모델을 사용하는 방법을 설명합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 SQL Ligation and Puncture(CLP)라는 수술 절차를 통해 패혈증의 마우스 모델을 생성하는 것입니다. 이것은 먼저 마우스의 복부에 1.5-2cm의 정중선 절개를 통해 수행됩니다. 다음으로, 세쿰을 노출시키고 결찰한 다음 세움에 구멍을 뚫어 세균 전좌를 유도합니다.

마지막으로 절개 부위가 봉합됩니다. 궁극적으로, 전신 및 복막 사이토카인 수치의 증가뿐만 아니라 무기력 및 치사율과 같은 증상을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다. 제가 보여드릴 것은 Sation and Functure라고 하는 마우스 패혈증 모델을 만드는 것인데, 이는 Dr.Chandry와 그의 동료들이 개발한 원래 모델에서 수정된 것입니다.

이 모델의 평균 주요 장점은 패혈증의 가장 관련성이 높은 모델이라는 것입니다. 또한 간단하고 특성이 뛰어나며 경제적으로 실현 가능하므로 패혈증 및 염증 연구 분야에서 널리 사용되었습니다. 예를 들어, 패혈증에서 허브 추출물의 치료 가능성을 평가하기 위해 이 모델을 활용하는 방법을 시연할 것입니다.

초본 추출물을 준비하기 위하여는, 불용해성 입자를 제거하기 위하여 1개에서 4 시간 동안 85 섭씨 온도에 물 200 밀리리터에 있는 나물의 10 그램을 적시고, 3, 4 섭씨 온도에 20 분 동안 300 G에 물 조각을 원심 분리하십시오. 다음으로, 0.2 미크론 필터를 통해 상층액을 여과합니다. 다음 10의, 000 kilodalton 분자량 커트오프를 가진 원심 여과기를 사용하여 여과액을 더 집중시키고 5, 4 섭씨 온도에 60 분 동안 000 G에 회전시키십시오.

대식세포 배양을 사용하여 고분자량 및 고분자량 분획을 스크리닝하여 고이동성 그룹 박스 1 또는 HGB 1과 같은 후기 전염증 매개체의 활성을 억제했습니다. 먼저 대식세포 분리를 시작하기 위해, 복강간 1차 복막 대식세포 배양을 3일 동안 수확한 후 일반 마우스에 4%TH 글리콜 육수 2밀리리터를 투여했으며, DMEM의 대식세포에는 10% FBS, 2밀리몰 글루타민 및 1% 페니실린이 보충되었습니다. 스트렙토마이신(Streptomycin)은 옵티멈(Optimal)으로 부착 대식세포를 부드럽게 세척하고 동일한 배지에서 2시간 동안 배양합니다.

그런 다음 자극 후 16시간 후에 박테리아 내독소 지질다당류 또는 LPS로 자극합니다. 세포 컨디셔닝 배지를 수집하여 웨스턴 블로팅(western blotting)을 수행하는 데 사용합니다. HM GB one의 수준을 측정하기 위해.

정제된 H mgb one으로 생성된 표준 곡선을 사용하여 밴드 강도를 정량화하여 케타민 1kg당 75mg과 자일라진 1kg당 20mg의 근육 주사로 마우스를 마취한 후 패혈증을 확립합니다. 그리고 발가락 꼬집음을 사용하여 진정 수준을 확인합니다. 마우스를 누운 자세로 놓고 복부를 청소한 다음 15mm 정중선을 절개하여 4개의 실크 봉합사로 속편 팁에서 약 5mm 떨어진 맹장을 노출시킵니다.

맹장을 결찰한 다음 22게이지 바늘을 사용하여 결찰된 속편 그루터기를 한 번 뚫어 대변이 돌출될 수 있도록 한 다음 즉시 맹장을 정상적인 복강 내 위치로 되돌리고 복부를 닫습니다. 동물이 의식과 이동성을 회복한 후. 24시간 후에 케이지를 동물실로 되돌려

CLP 복강내 후 200마이크로리터의 허브 추출물을 투여하거나 3일 동안 매일 대조군을 투여합니다. 서열연변 결찰 및 천자 또는 CLP 수술 후 몇 시간 이내에 필요한 기간 동안 동물의 생존을 모니터링합니다. 동물은 필로렉션, 혼수, 허들링, 음식 및 물 섭취 감소를 포함하는 패혈증의 임상 징후를 보입니다.

연속적인 전신 감염으로 심각한 복막염이 발병하는 동물은 일반적으로 48시간에서 96시간 이내에 죽습니다. 그러나 연령, 성별 및 유전적 배경이 일치하는 동물조차도 실험적 패혈증 과정에서(예: CLP 후 48시간) 구별되는 방식으로 수술에 반응할 수 있습니다. 일부 동물은 여기에 정의된 마운드 상태에 접근했을 수 있지만 다른 동물은 비파괴 상태에 남아 있을 수 있습니다.

순환하는 사이토카인에 대한 포괄적인 조사는 IL 6, kc, MIP 2 및 ST nfr을 포함한 여러 사이토카인의 수치에서 극적인 차이를 보여주었습니다. 특히, 이러한 염증 매개체는 순환 수치가 실험적 또는 임상적 패혈증에서 치명적인 결과의 신뢰할 수 있는 예측 변수이기 때문에 패혈증의 대리 마커로 분류되었습니다. 또한, CLP는 다양한 전염증성 및 항염증성 사이토카인 및 케모카인의 국소 방출을 유도했는데, 예를 들어, CLP 후 48시간 동안 상당한 양의 사이토카인 IL 6 및 케모카인 KC 및 MI P 2는 여전히 혈액 내에서 전신적으로 측정될 뿐만 아니라 복막 세척액에서 국소적으로 측정될 수 있습니다.

여기서, 다양한 허브 추출물 또는 대조 화합물의 능력은 내독소 유도 HGB 1회 방출을 억제하는 능력에 대해 평가되었습니다. HGB 1회 방출을 억제할 수 있는 능력을 가진 사람들은 패혈증의 마우스 모델을 사용하여 생체 내에서 추가 테스트를 진행했습니다. 실험적 패혈증에서 HGB one 축적의 늦고 장기간의 동역학으로 인해, HGB one 억제제의 첫 번째 투여는 패혈증 발병 후 24시간 후에 투여되었으며, 이 시점은 마우스가 무기력, 설사 및 필로렉션을 포함한 패혈증의 명확한 징후를 보인 시점이며, 여기에서 볼 수 있듯이 주요 녹색 T 성분인 epi Gallo의 지연 및 반복 투여, 패혈증 발병 후 24 시간부터 카테킨 3 GALLATE 또는 EGCG는 경구 투여 후에도 치명적인 패혈증에서 마우스를 크게 구출하여 치명적인 패혈증에서 마우스를 구출하여 동물 생존율을 16 %에서 44 %로 크게 증가시킴이 결찰을 마스터하고 펑크 모델이 제대로 수행되면 5 분 이내에 완료 할 수 있습니다.