마우스 유선 화 된 약물 전달을위한 췌관 주입

마우스 유방 동맥에 수성 시약의 비 침습성 췌관 전달을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 방법은 특히 유방 덕트를 대상으로 유 방 땀 샘의 젖꼭지로 지역화 주입을 활용합니다. 이 기술은 siRNA를, 화학 요법 제와 작은 분자를 포함한 화합물의 다양한 적응할 수있다.

이 절차의 전반적인 목표는 수성 시약을 마우스 유선에 비침습적으로 전달하는 것입니다. 예비의. 이것은 먼저 마우스를 마취하고 젖꼭지를 둘러싼 털을 제거함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 마이크로 핀셋을 사용하여 젖꼭지 끝을 덮고 있는 각질을 제거하는 것입니다.

다음으로, 33 게이지 바늘을 사용하여 수용액을 젖꼭지에 주입합니다. 마지막 단계는 주사 부위의 부기 가능성을 관찰하여 주사가 성공적이었는지 확인하는 것인데, 이는 유선에 주사하는 대신 유방 지방 패드 주사를 제안하는 것입니다. 궁극적으로 절차의 성공 여부는 Evans 청색 주입 후 연성 트리의 시각화에 의해 결정될 수 있습니다.

이 방법은 기억 종양 발생의 다양한 단계에서 특정 유전자의 기여와 같은 유방암 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 시작하려면 주입 전에 각 마우스에 대해 멸균 인산염 완충 식염수에 0.2%Evans blue dye 160마이크로리터를 준비합니다. 각 마우스의 무게를 측정하고 체중을 기록합니다.

그런 다음 불소 챔버를 사용하여 마우스를 한 번에 하나씩 마취하고 눈 윤활제를 바릅니다. 진정제가 투여되면 불소 코를 놓고 시술 전에 킬로그램당 5-10밀리그램의 멜록시캄을 피하주사합니다.시술 중 진통제로서 마우스의 호흡수 변화를 지속적으로 모니터링하고 그에 따라 불소 이소의 수치를 조정하며, 특히 마우스의 호흡수가 마취 수준을 낮출 필요가 있음을 나타내는 경우 그렇습니다. 다음으로, 처방전 없이 구입할 수 있는 제모 크림을 바르고 젖꼭지 부위를 주입할 준비를 합니다.

5분 정도 기다렸다가 화장솜 어플리케이터로 느슨한 모발을 부드럽게 제거합니다. 원을 그리며 젖은 종이 타월에 따뜻한 물을 묻혀 잔여 크림을 제거합니다. 그런 다음 사지를 부드럽게 테이프로 감아 스테레오스코프 아래에 마우스를 고정하고 알코올 면봉으로 주사 부위를 청소합니다.

시작하려면 입체경 아래에서 주입할 젖꼭지를 찾으십시오. 그런 다음 미세 미세 절개 핀셋을 사용하여 젖꼭지 입구를 덮고 있는 각질을 제거합니다. 주사를 위해 젖꼭지를 자를 필요는 없습니다.

그런 다음 11 게이지 금속 허브 바늘이 부착 된 50 마이크로 리터 주사기에 33 마이크로 리터의 주입 용액을 로드합니다. 주입 후 1마이크로리터의 주입 유체가 누출되는 경우가 많아 10마이크로리터의 용액을 성공적으로 주입하는 것이 최종 목표입니다. 가는 핀셋으로 젖꼭지를 부드럽게 잡고 약간 들어 올려 주입 위치를 잡습니다.

그런 다음 유선의 첫 번째 쌍과 마지막 쌍의 유선에 있는 각 분비선에 11마이크로리터를 주입하는데, 이는 분비선의 연성 나무를 완전히 채우기 위해 중간 쌍보다 낮은 부피를 필요로 하기 때문입니다. 다음으로, 두 번째에서 네 번째 쌍의 유선에 있는 각 샘에 21마이크로리터를 주입합니다. 주입 속도는 덕트 루멘 내에서 빠르게 움직이는 유체로 인한 잠재적 손상을 최소화하기 위해 분당 약 40마이크로리터로 유지되어야 합니다.

주사 후. 주입 부위를 관찰하십시오. 유두 부위나 주변 조직에 외상의 징후가 없어야 합니다.

젖꼭지 주변 부위가 붓습니다. 유관 주사가 성공적이라기보다는 유방 지방 패드 주사를 나타낼 가능성이 높습니다. 그런 다음 콧방울에서 동물을 제거하고 회복을 위해 별도의 우리로 옮깁니다.

케이지를 열 램프 아래에 놓아 저체온증을 예방하고 회복을 돕습니다. 동물을 단독으로 수용하고 의식과 이동성을 회복할 때까지 면밀히 관찰합니다. 연구가 완료되면 격리된 챔버에서 CO2 압축 가스에 따른 경추 탈구로 마우스를 안락사시킵니다.

그런 다음 유선을 절제하고 관심 분석을 위해 적절한 샘플 처리를 계속합니다. 여기에 표시된 것은 Evan's Blue Dye를 젖꼭지를 통해 주입하기 전과 후의 쥐의 유선입니다. 유두 부위는 부종이나 조직 손상을 보이지 않는데, 이는 유관을 둘러싼 지방 패드에 염료를 주입하여 발생할 수 있습니다.

오른쪽 이미지에서 볼 수 있는 확산 청색 염료는 올바른 주입을 나타내는 좋은 지표입니다. 이것은 분비샘 전체를 보거나 분비샘을 절제한 후 단면을 살펴봄으로써 확인할 수 있습니다. 여기에 표시된 전체 마운트 분석에서 Evans blue 주입 분비선은 토착 오리 구조를 손상시키지 않고 염료로 채워진 전체 분비선을 보여줍니다.

이것은 또한 연성 구조를 강조하는 Carmen Dye에서 확인됩니다. irna와 같은 치료 분자를 관 세포에 전달하기 위해 이 방법을 활용하는 것도 가능합니다. 여기에 표시된 이미지에서는 비필수 유전자인 겸상 필린(sickle fillin)을 표적으로 하는 형광 태그가 지정된 irna를 주입한 다음 48시간 후에 조직을 이미지화하여 분자의 국소화를 보여주었습니다.

이 절차를 따릅니다. 기억 발달 또는 종양 발생에서 특정 유전자의 역할과 관련된 추가 질문에 답하기 위해 SRNA 녹다운과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다.