December 18th, 2013
우리는 (1) 가정 환경에서 가족 간병인이 인지 장애가 있는 노인의 타액 샘플을 수집하는 절차, (2) 타액 코르티솔 및 알파 아밀라아제를 통해 스트레스 활동을 측정하는 절차, (3) 대표 프로필을 보여줍니다. 연구자들이 스트레스와 관련된 과정을 연구할 수 있도록 하는 프로토콜은 생물학적 민감성과 감수성에 대한 이해를 증진시킵니다.
이 절차의 전반적인 목표는 의학적으로 허약한 지역 사회에 거주하는 인구에서 타액 생물학적 측정의 수집 및 분석을 입증하는 것입니다. 이것은 먼저 필요한 타액 수집 용품을 조립하여 수행됩니다. 두 번째 단계는 가정 방문을 주선하고, 물품을 제공하고, 간병인에게 타액 채취 절차를 시연
하는 것입니다.그런 다음 서면 지침을 제공하고 질문에 답합니다. 마지막 단계는 타액 샘플을 실험실로 반환하고 분석 절차를 수행하는 것입니다. 궁극적으로, 이 프로토콜은 지역사회에 거주하는 의학적으로 허약한 환자에서 타액 알파 아밀라아제 및 타액 코르티솔 농도의 주간 프로파일을 측정하도록 설계되었습니다.
이 방법은 스트레스 관련 과정에 대한 생물학적 민감성과 감수성에 대한 이해를 향상시키기 위해 생물 행동 연구 분야의 주요 질문에 답할 것입니다. 동의한 가정을 방문하기 전에 참가자들은 4개의 심리측정학 아동용 면봉, 4개의 면봉 보관 튜브, 4개의 색상으로 구분된 튜브 캡, 5개의 흰색 라벨, 1개의 플라스틱 지퍼락 백, 타액 채취 지침서, 5개의 니트로 장갑 및 보관 상자를 포함하여 필요한 물품을 모으고 조립합니다. 니트로 장갑을 낀 손을 사용하여 4개의 Salome 어린이용 면봉을 4개의 면봉 보관 튜브에 넣고 각각 노란색, 주황색, 파란색 및 보라색 캡으로 덮습니다.
그런 다음 각 보관 튜브에 라벨을 부착하여 수집 시간을 표시합니다. 뚜껑이 있는 보관 튜브 4개, 타액 채취 지침 시트 및 니트로 장갑 4개를 지퍼락 백에 넣고 피험자 ID와 채취 날짜를 라벨로 붙입니다. 이 일정에 따라 이전에 동의한 피험자에 대한 짧은 가정 방문과 타액 샘플링 전날.
피험자의 집에 도착한 후, 물품이 든 비닐봉지와 지침서를 타액 채취자에게 제공한다. 지침 시트를 검토하고 서면 지침을 강조 표시하여 타액 채취의 시작 및 중지 시간을 기록해야 할 필요성을 강조합니다. 모든 처방전의 이름, 복용량 및 일정을 기록하고 지난 48시간 이내에 참가자가 복용한 처방전 없이 구입할 수 있는 약물을 기록합니다.
타액 수집기 또는 SC에게 주로 사용하는 손에 니트로 장갑을 끼도록 지시합니다. 참가자에게 침이 입 바닥에 고일 수 있도록 머리를 앞으로 기울이라고 말합니다. 그런 다음 SC에게 면봉 보관 튜브의 뚜껑을 풀고 구강 면봉을 회수하도록 지시합니다.
SC에게 구강 면봉을 노인의 혀 앞쪽 아래에 놓아 고인 타액을 약 3방울 흡수하고 구강 면봉이 포화 상태인지 확인하기 위해 2분 동안 제자리에 유지하도록 지시하고, SC가 포화된 구강 면봉을 면봉 보관 튜브의 바구니에 다시 넣도록 합니다. 그리고 캡을 교체하십시오. 다음으로, SC가 즉시 튜브를 보관 상자에 넣고 냉동고에 넣도록 합니다. 장갑을 쓰레기통에 버린 후 SC에 타액 지침서에 시작 및 중지 시간을 기록하도록 조언합니다.
다음으로, SC에게 다음 날 4회, 특히 아침과 저녁 중반에 깨어난 후 30분 후에 타액 샘플을 채취할 것임을 알리고, SC가 환자에게 타액 채취 10분 전에 물로 입을 헹구라고 말하도록 합니다. 타액 채취 후 혈액으로 눈에 띄게 오염된 샘플을 폐기하십시오. SC에게 타액 샘플은 연구팀이 회수할 때까지 냉동고에 보관해야 한다고 지시합니다.
연구 팀에 전화하여 냉동 샘플을 회수할 시간과 요일을 예약하고 향후 수집 날짜에 대비하여 새로운 타액 수집 용품을 가져올 것인지 확인합니다. 표본이 피험자의 냉동고에서 꺼낸 후, 실험실로 이송하는 동안 단열 냉동 백에 넣어 냉동 상태로 보관한다. 실험실에 도착하면 각 튜브의 흰색 라벨을 순차적인 바코드로 교체합니다.
순차 바코드가 주체 ID, 수집 날짜 및 수집 시간과 일치하는지 확인합니다. 그런 다음 타액 샘플을 섭씨 영하 20도의 냉동고에 다시 넣어 점액을 침전시킵니다. 타액 샘플을 해동한 후 1500배 중력에서 15분 동안 샘플을 원심분리합니다.
타액 분석 키트 시약이 약 90분 동안 실온에 있으면 키트 지침에 따라 25마이크로리터의 표준물질 대조군 및 샘플을 96웰 플레이트의 적절한 웰에 피펫으로 세척 버퍼를 준비합니다. 이 피펫에 이어 200 마이크로 리터의 이전에 준비된 효소 접합 용액을 웰로 넣습니다. 플레이트를 500RPM으로 5분 동안 로테이터에 올려 샘플을 혼합합니다.
샘플을 실온에서 55분 동안 배양한 후 세척 버퍼로 플레이트를 4회 세척하고 닦아냅니다. 그런 다음 200 마이크로 리터의 테트라 에틸 벤진 또는 TMB 용액을 첨가하십시오. 일단 샘플을 5분 동안 혼합합니다.
500RPM에서 알루미늄 호일로 플레이트를 덮고 추가로 25분 동안 어둠 속에서 배양합니다. 완료되면 50마이크로리터의 정지 용액을 추가하고 500RPM에서 3분 동안 샘플을 혼합합니다. 정지 용액을 추가한 후 10분 이내에 플레이트 바닥을 닦아내고 450나노미터의 플레이트 리더기로 플레이트를 읽습니다.
다음으로, 평균 광학 밀도를 사용하여 코르티솔 농도를 계산합니다. 비특이적 결합 웰의 평균 광학 밀도를 0 표준 대조군 및 샘플 웰의 평균 광학 밀도에서 뺍니다. 마지막으로, 물류 능력이 있는 소프트웨어를 사용하여 제어 및 미지 물질의 농도를 추정합니다.
설명된 절차는 타액, 알파 아밀라아제 및 타액 코르티솔 농도의 주간 프로파일을 측정하도록 설계되었습니다. 코르티솔 결과가 양의 편향으로 나타났기 때문에 정규 분포를 산출하기 위해 데이터에 대한 로그 변환을 사용하는 것이 좋습니다. 코르티솔과 알파 아밀라아제의 주간 리듬의 차이를 모델링하기 위해 몇 가지 전략을 사용할 수 있습니다.
첫 번째 전략은 깨어 있는 시점과 깨어 난 후 30분 사이의 알파 아밀라아제 또는 코르티솔의 일주일 변화를 그래프로 표시하는 것입니다. 두 번째 전략은 하루 동안의 총 코르티솔 또는 알파 아밀라아제 농도를 그래프로 표시하는 것입니다. 결과 요약 매개변수는 두 가지 일반 범주, 즉 반응 크기 측정 또는 시간 경과에 따른 반응 패턴 측정 값으로 그룹화할 수 있습니다.
성장 곡선 모델링은 하루 종일 개인에서 여러 표본을 수집하는 연구에 유용할 수 있습니다. 성장 곡선은 개별 또는 측정 수준에서 예측 변수를 추가하여 일주일 주기의 개인차를 허용하도록 맞출 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 가정에서 노인을 위해 타액을 채취하는 방법과 간병인에게 의학적으로 타액을 채취하는 방법을 가르치는 방법을 잘 이해하게 될 것이며, 실현 가능하고 규정 준수가 높으며 고품질 검체를 수율 얻을 수 있는 타액 분석물의 실험실 분석을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
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이 기사는 인지 장애가 있는 노인들의 타액 바이오마커를 수집하고 분석하는 절차를 제시합니다. 가정 환경에서 간병인이 타액 샘플을 수집하고 타액 내 코티솔 및 알파 아밀라제를 통한 스트레스 활동을 측정하는 단계를 설명합니다.
Measuring salivary cortisol and alpha-amylase provides a minimally invasive, cost-effective approach to assess stress physiology in frail older adults, supporting target validation in neurobehavioral and aging research. The protocol enables caregiver-mediated sample collection in home settings, improving feasibility and compliance for longitudinal biomarker studies. This method supports mechanistic de-risking by linking peripheral stress markers to central nervous system activity in preclinical and translational models of age-related frailty.
The method fits within the discovery continuum from hypothesis generation through lead optimization, particularly for compounds targeting stress pathways, neuroinflammation, or behavioral phenotypes in aging.