형광 염료와 성인 Zebrafish의 망막 신경절 세포의 퇴행성 라벨링

Adults.Debra Fish는 유모 세포, 후각 판막, T 슬랜드, 척수 및 시신경과 같은 손상 후 신경계를 재생하는 독특한 능력을 가지고 있습니다. CNS 시신경 손상의 일부로 인해 망막 신경절 세포의 생존과 퇴행을 유발할 수 있습니다. 그러나, HG 염색 및 항체 IHC는 모든 R GC를 표기한 형질전환 라인으로 rrg 질환을 특이적으로 표시할 수 없었으며, 이는 구축되지 않았다.

성체 제브라피시의 시신경 손상 후 R GC 수의 변화를 연구하기 위해 tum에서 RGC를 역행 라벨링하여 모든 RGC를 성공적으로 라벨링했습니다. 안녕하세요, 저는 중국 렉서스 판매 기술 대학의 신경 발달 및 수리 학교 연구소 회원입니다. 그리고 오늘 우리는 ABRA 물고기에서 RG CS를 역행하고 전체 산 망막에서 RG CS 번호를 얻는 방법을 보여 드리겠습니다.

시작하겠습니다. 첫째, 마취와 담수를 정독하기 위해 A 관류 시스템을 구축해야 합니다. 연산자에 대한 자세한 내용은 이 동영상의 첨부된 PDF 문서에서 확인할 수 있습니다.

상자를 위에 놓고 액체가 상자에서 물고기로 부드럽게 흐를 수 있는지 확인하십시오. 수술 중에는 모든 작업자를 소독하십시오. 스피드볼을 여러 개 준비하여 동굴에 넣으십시오.

75% 에탄올과 절대 에탄올을 떨어뜨립니다. 유리 바늘을 사용하여 신경 눈을 준비하여 지오 산 에칭, 광 경화 바인딩 집게, 보석 집게, 침술, 핑 블런트 실제로 집게, scle 직장, 가위, coum 면봉이 필요합니다. 눈에 띄는 파란색 LED 유리 바늘, 끝 부분에 neurore 눈, 라이터, 75% 에탄올.

0.03%MS 트리플 투로 물고기를 아니게 합니다. 그런 다음 스펀지의 틈새에 넣으십시오. 관류 속도만 1초에 약 1방울 더하면 됩니다.

산소를 공급하기 위해 물고기 입에 바늘을 넣으십시오. 피부가 젖지 않도록 생선 조각으로 생선을 덮으십시오. 이제 자세한 내용을 보려면 상단 뷰로 이동합니다.

먼저, 전체 sc의 피부를 제거합니다. 면봉으로 표면을 닦습니다. 돌출부로 세척하십시오.

그런 다음 귀 세척 전구로 말리십시오. 10초 동안 약제로 두개골을 부식시키고 제제를 완전히 닦아냅니다. 그런 다음 돌출부로 해당 부위를 씻고 건조시킵니다.

유입되는 부식에 대한 보호를 위해 광경화 인바운드가 있는 올바른 tectum을 수락하십시오. 청색광에 40초 동안 노출시켜 치료하십시오. 완전히 가장자리를 위해 오른쪽 Tum에 에이전트를 다시 놓습니다.

2분 동안 에이전트를 완전히 닦아냅니다. 그런 다음 돌출부로 해당 부위를 씻고 말리십시오. 5번 집게로 두개골을 조심스럽게 엽니다.

올바른 촉각을 노출시키려면 상처에서 나오는 대뇌 척수액을 지오 폼으로 흡수하십시오. 오른쪽 지단 전체에 염료를 코팅합니다. 그런 다음 D 눈의 geo formm 조각을 덮어 전체 오른쪽 tectum Tally에 부착합니다.

스터로 구멍을 덮으십시오.모래 물고기에서 비늘을 만드십시오. 광경화 바운드로 상처를 봉합하고 푸른 빛으로 고정합니다.

마취 용액을 끕니다. 담수로 물고기를 되살리십시오. 보통 우리는 그들이 빨리 스윙하지 않도록 그들의 물건을 잘라냅니다.

저희 연구실에서는 모든 수술이 숙련된 사람에 의해 이루어집니다. 물고기 한 마리당 10분에서 12분 정도 걸립니다. 약 20-30 마리의 물고기를 반나절에 표시 할 수 있습니다.

Retina는 Celia Zone에 포함되지 않습니다. 정맥 가위로 Celia 영역과 각막을 제거하여 눈컵을 만듭니다. 렌즈를 제거한 다음 I-C-P-B-S로 수성 유체를 씻어냅니다.

디스크에서 색소 절단 시신경을 씻어냅니다.공막을 제거하여 망막을 얻습니다. PFA의 2%에서 망막을 고정하는 것은 선택 사항입니다.

분리 후 이미징이 빠르게 이루어지지 않으면 장착하기 전에 혈액 구름과 색소 조각을 청소하십시오. 구부러진 커버 유리로 만든 숟가락으로 망막을 운반하십시오. 시대는 선으로 표시됩니다.

망막을 IC. 30%글리세린을 현미경에 넣습니다. 슬라이드. RGCL을 위쪽으로 유지하십시오.

글리세린을 제거한 다음 망막을 4개의 사분면으로 자릅니다. 20마이크로리터를 떨어뜨립니다. 망막에 75%글리세린이 보입니다.

샘플을 1.8cm의 침묵으로 사각형 커버 유리로 덮습니다. 커버 유리를 네일 오일과 시장으로 밀봉하십시오. 이 수술을 통해 형광 현미경으로 샘플을 관찰하십시오.

우리는 RTC를 성공적으로 역행합니다. 얼룩말 물고기를 적응시키고 전체 산 망막에서 RTC 번호를 얻습니다. 광경화 바운드를 사용함으로써 제브라피시 생존율을 향상시켜 이 방법을 보다 효과적으로 만듭니다.