비 침습적 영상에 대한 생쥐 모델 검색 및 모니터 난소 암 재발

이 절차의 전반적인 목표는 난소암 환자에서 관찰된 임상 프로파일을 모방하는 복강내 난소암 이종이식 모델을 확립하는 것입니다. 이는 누드 마우스에서 mCherry 형광 표지된 난소암 줄기세포를 자궁 내 주입함으로써 달성됩니다. 다음으로, 종양 종양 진행의 확립과 치료에 대한 반응은 종양 부담에 대한 대리물로서의 형광을 측정하여 결정됩니다.

이를 통해 마우스를 희생할 필요 없이 종양 진행 또는 치료에 대한 반응을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다. 여기에 표시된 모델입니다. B는 난소암 환자에서 관찰된 임상 프로파일을 요약하여 질병의 생물학을 연구할 수 있을 뿐만 아니라 특히 재발성 난소암에 대한 새로운 치료법을 식별할

이 모델을 통해 종양의 진행을 모니터링하여 화학 요법에 반응하는지 실시간으로 판단하고 화학 요법을 중단할 경우 질병이 재발하는지 여부를 결정할 수 있습니다. 이 절차를 시작하려면 7-8주 된 2%의 불소가 함유된 흉선 누드 마우스를 마취합니다. 그런 다음 발 패드를 꼬집어 완전히 마취되었는지 확인합니다.

다음으로, 동물을 오른쪽에 눕히고 머리가 실험자에게서 멀어지도록 멸균 거즈 패드를 눕힙니다. 이후 마취 상태에서 건조함을 방지하기 위해 양쪽 눈에 연고를 바르십시오. 이소플루란 기화기에 연결된 노즈콘 시스템에 동물의 머리를 빠르게 삽입합니다.

알코올 패드를 사용하여 복부 오른쪽을 소독한 다음 요오드를 소독합니다. 그런 다음 멸균 수술용 가위와 집게를 사용하여 멸균 수술용 드레이프를 그 위에 놓습니다. 마우스의 왼쪽 하단 사분면에 1-2cm 두께의 피부를 절개합니다.

그 후 근육을 들어 올려 복막에 닿을 수 있도록 절개합니다. 그런 다음 비스듬한 근육을 절개하여 복강을 노출시킵니다. 그런 다음 멸균 지혈 클램프를 사용하여 뿔의 앞쪽과 뒤쪽 모두에 왼쪽 자궁 뿔을 찾습니다.

전방 클램프를 나팔관 바로 아래에 놓고 후방 클램프를 자궁 경부 바로 위에 놓습니다. 이 시점에서 두 번째 실험자가 있습니다. 바늘이 들어 있는 세포를 뿔에 수직인 45도 각도로 배치하여 세포 현탁액을 주입합니다.

그런 다음 50마이크로리터의 세포 현탁액을 자궁 뿔의 내강에 천천히 주입합니다. 다음으로, 전방 클램프를 풀고 후방 클램프를 해제합니다. 그런 다음 자궁 뿔을 복강에 다시 넣는다.

합성 흡수성 봉합사를 사용하여 복막을 닫습니다. 그런 다음 조직 접착제를 사용하여 피부를 닫습니다. 완료되면 노즈콘에서 마우스를 제거하고 케이지에 다시 넣습니다.

동물을 방치하기 전에 동물이 깨어 있고 활동적인지 확인하십시오. 수술 후 처음 48시간 동안은 식수에 이부프로펜을 넣어 주십시오. 이제 분자 이미징 소프트웨어를 연 다음 화성 캡처 소프트웨어를 엽니다.

이 모듈은 이미징 시스템 캡처 및 분석 기능을 활용하면서 화성 캡처 설정을 조정적으로 제어합니다. 다음으로, 미리 결정된 캡처 값을 입력합니다. 그런 다음 매개 변수를 개별 세션 파일로 저장합니다.

그런 다음 시스템 인터페이스 획득 창에서 create edit protocols 버튼을 선택하여 회전 시퀀스 프로토콜을 생성하고 이전에 저장한 형광 세션 파일을 선택하고 1단계로 저장합니다. 그런 다음 해당 X-ray 세션 파일을 선택하고 2단계로 저장합니다. 1단계를 선택합니다.

Before Image Capture 팝업 메뉴에서 set rotation series를 사용하여 원하는 시작 각도 범위와 증분을 설정합니다. 피처를 매끄럽게 시각화하기 위해 특정 값에는 시작 각도 마이너스 180도, 범위 375도 및 15도 증분이 포함됩니다. 프로토콜을 저장하고 완료 버튼을 클릭하여 화성을 초기화합니다.

그런 다음 획득 메뉴에서 미리보기 버튼을 선택하여 정렬을 시작하여 rotator 탭을 불러오고 M cherry 이미징에 지정된 형광 캡처 설정을 사용합니다. 미리보기 중에 도어를 열어 두어 위치 지정 속도를 높이고, 정렬 절차 중에 마우스 위치를 육안으로 검사할 수도 있습니다. 그런 다음 load mouse 옵션을 선택하고 일련의 위치 지정 메뉴를 진행합니다.

접을 수 있는 노즈콘의 튜브 끝이 노즈콘 홈에 있는지 확인하십시오. 그런 다음 마취된 마우스를 머리가 콧방울 안에 있는 엎드린 방향으로 놓습니다. 동물의 복부 쪽이 아래를 향하도록 0도 위치에서 보정을 시작합니다.

회전 시스템에 있는 두 개의 손잡이를 사용하여 동물이 미리보기 창의 중앙에 나타나도록 배치합니다. 마이너스 180, 마이너스 90 더하기 90 및 플러스 180도 위치에 대해 프롬프트에 따라 프로세스를 반복하고 완료를 클릭합니다. 다음은 획득한 이미지로부터 생성된 동영상의 예입니다.

이 그림은 복강내 종양 부담과 형광 X-ray 오버레이 이미지 사이의 상관관계를 보여줍니다. F, 2, M 체리 난소암 세포의 주입 후 약 32일 후에 2D 이미징을 수행하고 획득된 이미지를 실제 종양 부담과 연관시키기 위해 마우스를 희생했습니다. 그리고 여기에 표시된 것은 다각도 이미징 및 제어 중인 종양, 파클리탁셀 치료 및 재발성 마우스의 감지를 가능하게 하는 회전 데이터 세트입니다.

패널당 하나의 마우스 이미지는 Mars 시스템을 사용하여 회전할 때 표시됩니다. 상당한 종양 부담을 가진 대조군 마우스에서도 이미지를 촬영한 각도에 따라 종양 크기가 과소평가될 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 자궁 내 경로를 사용하여 복강내 난소암 이종이식 모델을 확립할 수 있을 뿐만 아니라 다중 모드 회전 시스템을 사용하여 살아있는 동물 이미징을 수행할 수