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이미징 세포 내 칼슘 2 + 유전자 인코딩 된 칼슘 표시기를 사용하여 성인 마우스의 선조체 ...
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JoVE Journal Neuroscience
Imaging Intracellular Ca2+ Signals in Striatal Astrocytes from Adult Mice Using Genetically-encoded Calcium Indicators

이미징 세포 내 칼슘 2 + 유전자 인코딩 된 칼슘 표시기를 사용하여 성인 마우스의 선조체 성상의 신호

Full Text
15,612 Views
12:19 min
November 19, 2014

DOI: 10.3791/51972-v

Ruotian Jiang1, Martin D. Haustein1, Michael V. Sofroniew2, Baljit S. Khakh1,2

1Department of Physiology,University of California Los Angeles, 2Department of Neurobiology,University of California Los Angeles

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study investigates the imaging of intracellular calcium signals in striatal astrocytes using genetically encoded calcium indicators. The methods involve the use of adeno-associated viruses to express these indicators and subsequent imaging techniques to observe the calcium dynamics in situ.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Imaging Techniques

Background

  • Astrocytes play crucial roles in brain function.
  • Intracellular calcium signaling in astrocytes is not fully understood.
  • Genetically encoded calcium indicators provide a method to visualize these signals.
  • Adeno-associated viruses can be used for targeted expression in specific cell types.

Purpose of Study

  • To develop methods for imaging calcium signals in striatal astrocytes.
  • To assess the specificity of calcium indicator expression in astrocytes.
  • To evaluate the impact of viral injection on astrocyte reactivity.

Methods Used

  • Injection of AAV2/5 into the mouse striatum.
  • Recovery period of two to three weeks post-surgery.
  • Preparation of acute brain slices from sacrificed mice.
  • Confocal calcium imaging to visualize calcium dynamics.

Main Results

  • Successful expression of Cyto G Camp three in astrocytes.
  • Calcium signals were reliably imaged in striatal astrocytes.
  • No significant astrocyte reactivity was observed post-injection.
  • Immunohistochemistry confirmed the specificity of the calcium indicator.

Conclusions

  • The methods described enable effective imaging of astrocytic calcium signals.
  • These findings enhance our understanding of astrocyte function in the striatum.
  • The approach can be applied to further studies on astrocyte signaling.

Frequently Asked Questions

What is the significance of astrocytic calcium signaling?
Astrocytic calcium signaling is crucial for various brain functions, including neurotransmitter release and synaptic modulation.
How are genetically encoded calcium indicators used?
They are expressed in specific cell types to visualize calcium dynamics in real-time using imaging techniques.
What are the advantages of using AAV for gene delivery?
AAVs provide targeted expression with minimal immune response, making them suitable for in vivo studies.
What imaging technique was employed in this study?
Confocal calcium imaging was used to visualize intracellular calcium signals in astrocytes.
Did the viral injection affect astrocyte health?
The study found no overt astrocyte reactivity following the viral injection, indicating cell health was maintained.
What is the next step for this research?
Future studies may explore the functional implications of calcium signaling in astrocytes under various conditions.

선조체에서 성상교세포 세포 내 Ca2+ 신호의 특성과 기능은 불완전하게 탐구된 상태로 남아 있습니다. 혈청형 2/5(AAV2/5)의 아데노 관련 바이러스를 사용하여 선조체 성상세포에서 유전적으로 암호화된 칼슘 지표를 발현하는 방법과 선조체 성상세포 내 Ca2+ 신호를 안정적으로 이미지화하는 절차를 설명합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 cyto G CAMP three와 같은 유전적으로 암호화된 칼슘 지표를 사용하여 성체 마우스의 stri AAL 성상세포에서 세포 내 칼슘 신호를 이미지화하는 것입니다. 이것은 먼저 마우스 선조체에 바이러스를 주입함으로써 수행됩니다. 그런 다음 수술 후 2-3주 동안 마우스가 회복할 수 있습니다.

다음으로, 쥐를 희생시키고 급성 뇌 절편을 준비합니다. 마지막 단계는 뇌 절편에 대한 컨포칼 칼슘 이미징을 수행하는 것입니다. 궁극적으로, 면역조직화학(immunohisto chemistry)은 Cyto G Camp three가 성상세포에서만 발현되고 뉴런에서는 발현되지 않으며, 바이러스 주입이 명백한 성상세포 반응을 일으키지 않는다는 것을 보여주기 위해 사용됩니다.

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