Name: 신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: 배우세요 저산소-허혈성 뇌증의 돼지 모델을 통해 신생아 뇌손상 연구 방법을. 진정, 기계환기, 진폭 통합 EEG 모니터링을 활용한 72시간 생존 모델로 임상 적용 가능한 치료 전략 개발에 기여합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 덴마크 오르후스 대학병원 커뮤니케이션학과의 존 크리스텐슨(John Kristensen)과 쇠렌 브라드 안데르센(Søren Braad Andersen)에게 촬영과 편집에 탁월한 도움을 준 것에 대해 감사의 뜻을 전한다. 동물 치료를 지원한 덴마크 오르후스 대학 병원 임상 의학 연구소의 동물 기술자 Diana Gyldenløve와 수의사 Birgitte Kousgaard. 이 연구는 룬드벡 재단(Lundbeck Foundation), 라에르달 급성 의학 재단(Laerdal Foundation for Acute Medicine), 중부 덴마크 지역 연구 재단(Central Denmark Region's Research Foundation), 아우구스티누스 재단(Augustinus Foundation), 아세(Aase) 및 에즈나르 다니엘센스(Ejnar Danielsens) 재단, 오르후스 대학병원 임상의학연구소(Institute of Clinical Medicine Aarhus University Hospital), 브뢰드렌 하르트만스 재단(Brødrene Hartmanns Foundation), 카렌 엘리스 옌센스(Karen Elise Jensens) 재단, Fonden til Lægevidenskabens Fremme, Marie Dorthea og Holger From의 지원을 받았다. Haderslevs 좋아.

본 프로토콜은 덴마크 동물 실험의 검사관에 의해 승인되었다. 모든 실험 동물은 절차 내내 마취시켰다. 이 프로토콜를 무단 복제하는 행위는 국가의 윤리와 동물 복지 가이드 라인에 따라 수행하고, 지역 윤리위원회의 승인을 받아야한다. 1. 동물 <ol><li> 2,000g - 약 1,500 무게 덴마크어 랜드 레이스의 새끼 돼지 &lt;24 시간 이전. </li></ol> 2. 마취 및 유지 보수 유체 <ol><li> 세보 관리, 알코올 솜, 말초 정맥 카테터, 고무 밴드, 식염수와 주사기, 프로포폴 (5 ㎎ / ㎏)을위한 마스크, 펜타닐 (10 μg의 / ㎏), 및 프로 카인 벤질 페니실린 : 마취에 필요한 장비 (그림 1) 준비 (15,000 IU / ㎏). </li><li> 호흡 마스크를 통해 1 ~ 2 %의 세보 플루 란을 전달하여 마취를 유도한다. <ol><li> 눈꺼풀 금단 REFL 대해 평가함으로써 마취 깊이를 평가예전 친구. 돼지 깊이 마취되는 경우 특정, 경피적 귀 정맥에 주변 정맥 카테터를 삽입합니다. </li><li> 주변 정맥 카테터의 개통을 확인하려면, 멸균 0.9 % 식염수 1-2 mL로 카테터를 세척합니다. 프로포폴 (5 ㎎ / ㎏)과 펜타닐 (/ kg을 10 μg의)의 일시 주사를 관리합니다. 일시 주사 투여에이어서 멸균 0.9 % 식염수 1-2 ml를 사용하여 정맥 내 카테터를 두 번 세척. </li><li> 두 개의 주사기 주입 펌프에서 프로포폴 (10 ㎎ / ㎖) 및 펜타닐 (10 μg의 / mL)로 장소 주사기. 정맥 카테 테르에 접속되어 하나의 라인에 합류 주입 삼방 스톱 콕으로 두 시린지 펌프 IV 튜브를 연결한다. 연속 정맥의 propofol의 주입 (4-12 ㎎ / ㎏ / 시간)과 펜타닐 (10 μg의 / ㎏ / 시간)를 시작합니다. 연속 주입이 실행되면, 프로포폴과 펜타닐의 추가 루스 주사를 제공하지 않습니다. </li><li> 세보 가스 ANEST의 중단 관리hesia. </li><li> 항생제 예방을위한 지역 가이드 라인에 따라 근육 프로 카인 벤질 페니실린 (15,000 IU / ㎏) 피하 또는 주입. 매일 반복합니다. 비디오는 새끼 돼지에서 IM 투여에 비해 더 높은 혈장 농도 긴 반감기를 초래하는 것으로 나타났다 (SC) 투여를 나타낸다. </li><li> 눈의 건조를 방지하기 위해 눈의 윤활 연고를 적용합니다. 주머니 형 개구부를 형성하기 위해 부드럽게 아래 눈꺼풀을 아래로 당겨. 주머니 연고 소량 짜내. 닫기 눈 연고를 배포합니다. 건조를 위해 매시간 확인하고 필요에 따라 다시 적용합니다. </li><li> 5 % 포도당의 지속적인 속도로 주입 / 10 ㎖ / ㎏ / 시간에서 0.45 % 염화나트륨 IV를 시작합니다. 동안과 저산소증 후 5 ㎖ / ㎏ / 시간에 속도를 줄입니다. 2-10 밀리몰 / L 사이에서 혈당 수준을 유지하기 위해 주입 속도를 조정한다. </li></ol></li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52454/52454fig1.jpg" /> Figu마취와 삽관 1. 장비 재. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52454/52454fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 3. 삽관 및 환기 <ol><li> 삽관에 필요한 장비 (도 1)를 준비 : 오프닝 rocuronium 브로마이드 (1 ㎎ / ㎏) 근육 이완은 로프 밧줄 (도 1에 도시 된 바와 같은 4 밀리 나일론 로프의 양 단부를 묶어 함께 원을 형성하는) 입,면은 직선 블레이드, xylocaine 스프레이 (100 ㎎ / ㎖), 커프스와 다양한 크기의 기관 내 튜브, 500 ml의 자기 팽창 가방 (3.0 mm, 2.5 mm, 2.0 mm 크기) (가방 밸브 면봉 및 수의학 후두경을 밀고 환기, 커프 인플레이션, 청진 2 ML의 주사기에 대한) 마스크. </li><li> 다음 단계에 따라 삽관 : <ol><li> 각 측면에서 목을 지원하는 앙와위에서 장소 돼지는 직선 후두 PAS을 확보하기삽관에 대한 세이지. </li><li> 흉골 노치 (일반적으로 약 13cm)에 주둥이의 끝에서 측정하여 기관 내 튜브의 길이를 추정한다. </li><li> 위 턱 주위에 배치 로프 슬링 (아래로 향하게) 열린 입을 유지하기 위해 위로 아래 턱과 혀를 개최합니다. </li><li> 근육 이완을 유도하기 위해 rocuronium 브로마이드 (1 ㎎ / ㎏) IV를 관리합니다. </li><li> 위쪽으로 혀를 들어 올려 후두경을 사용합니다. </li><li> 면 어느 식도로 retroverted 또는 부드러운 미각 뒤에 발견 할 수있다 돼지의 긴 후두개를 무료로 면봉을 밀고 사용합니다. </li><li> 피열 연골과 성대의 전체보기를 가능하게 혀베이스에 올려 후두개을 유지하기 위해 후두경을 진행합니다. </li><li> 후두 경련을 방지하기 위해 국소 후두 xylocaine 스프레이 (100 ㎎ / ㎖)을 적용한다. </li><li> 성대를 통해 기관 내 튜브를 진행합니다. 좁은 기관 연골의 통과를 돕기 위해 회전 운동을 사용합니다. 사전 튜브 ACCO미리 측정 된 거리 rding 및 수동 환기 자기 팽창 가방 (백 밸브 마스크)에 연결합니다. xylocaine 스프레이와 기관 내 튜브의 말단 1/3 스프레이 삽관시의 마찰을 줄일 수 있도록합니다. </li><li> 올바른 기관 내 튜브 위치를 확인하려면 : 호흡 곤란의 징후에 대한 관찰, 양쪽 폐에 양자 공기 항목에 대해 듣고 가슴을 ausculate, 시각적으로 기관 내 튜브의 인접면에서 응축의 존재를 확인하고, 최종 갯벌 탄소의 존재를 확인 비색 이산화탄소 감지기 또는 가능한 경우 인공 호흡기에 호기 이산화탄소 독서에 의한 이산화. 정상 종료 조력 이산화탄소는 약 5 %이다. 정상 나타나는 파형과 함께 2 % 이상 값이 기관 내 튜브 기관에 있음을 확인합니다. </li><li> 흡입을 방지하는 기관 튜브 커프 팽창. 해야 커프 팽창 압력보다 25cm 허혈성 손상을 방지하기 위해 H 2 O<html> 주변 조직에 관한 것이다. 장소에 기관 내 튜브를 들고, 관 주위에 테이프의 조각을 바람, 턱을 닫고 장소에서 튜브를 고정 주둥이 주위에 테이핑을 계속합니다. 조심스럽게 제자리에 유지되도록 튜브를 당겨. </li><li> 인공 호흡기에 기관 내 튜브를 연결합니다. </li></ol></li><li> 인공 호흡기 설정을 조정 : 볼륨 제어 환기, 호흡량 (TV) : 10 ㎖ / ㎏ [또는 최대 흡기 압력 15cm 압력 제어 환기 (PIP)]. 긍정적 인 말 호기 압력 (PEEP) : 5cm. I : E 비율 1 : 2. 호흡 속도 : 35 (4.5-5.5 kPa의 사이에 호 기말 이산화탄소를 유지하기 위해 속도를 조절). </li></ol> 4. 모니터링 및 바디 유체 샘플링 <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52454/52454fig2.jpg" /> 모니터링 2. 장비를 그림.ANK &quot;&gt;이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <ol><li> 연속 직장 온도 측정, 심전도 (ECG) 전극, 맥박 산소 측정기, 면도기, 및 뇌파 전극을 위해 접착 테이프, 멸균 윤활유, 프로브 모니터링 (그림 2)에 필요한 장비를 준비합니다. <ol><li> 뒷다리에 배치 포화 프로브, 직장 온도 프로브에 기름칠을하고 직장에 6cm를 삽입, 38.5-39 ° C의 생리 학적 수준에서 직장 온도를 유지하기 위해 오버 헤드 복사 난방 및 / 또는 가열 풍선 공기 매트리스를 배치하고 장소 심전도 전극. </li><li> 피하 바늘 뇌파 전극의 배치를위한 1cm X 1cm의 영역을 면도하기 쉬운 위치에 돼지를 놓고; 각 귀 앞의 하나, 단지 눈 뒤 정중선에 기준 전극. 알코올 면봉으로 전극 사이트를 청소 한 후 바늘 전극 피하에 삽입합니다. 부정사 포에 접착 테이프 및 반환 돼지로 고정 전극sition. </li><li> aEEG 모니터의 전원을 켭니다. 참고 : 뇌파 통합 진폭이 상하 여백 치밀한 추적으로 구성되어 있습니다. 이 모델의 하부 및 상부 마진은 일반적으로 유아에서 본 것보다 종종 더 높은 15 ~ 50 μV입니다. 저산소증시는 심전도에서 해당 이슈 거짓 aEEG 추적을 높일 수 있습니다주의하는 것이 중요하다. 일시 약물 (프로포폴 또는 펜타닐)도 일시적으로 aEEG 추적을 억제 할 수 있고, 실험 기간 동안 가능하면 피해야한다. 약물과 임상 이벤트의 관리 aEEG 추적의 해석을 용이하게 표시되어야한다. </li></ol></li><li> 멸균 장갑, 멸균 입체 재단, 메스, 알코올 면봉, 살균 물티슈, 제대 정맥 카테터 (5 프랑), 제대 동맥 카테터 (3.5 프랑 : 중앙 동맥 혈압 모니터링 및 혈액 샘플링 (그림 3) 배꼽 카테터를 배치에 필요한 장비를 준비합니다 )는, 봉합은 집게, 곡선 마이크로 집게, 가위, 바늘 홀더 및 봉합 (설정예를 들어, 크기 3-0), 투명 접착 패치, 혈액 샘플링을 5 ml 주사기. </li></ol><img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52454/52454fig3.jpg" /> 배꼽 라인과 혈액 샘플링 3. 장비를 그림. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52454/52454fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol start="3"><li> 소독과 배꼽 주위를 드레이프. 가능한 한 피부에 가깝게 탯줄을 잘라 메스를 사용합니다. 이 마취에서 돼지 제대 혈관에 노출되지 않으면 혈관을 노출 제대 피부에 탯줄 2mm 이하를 잘라. 두 개의 작은 배꼽 동맥과 하나의 큰 제대 정맥 (그림 4)를 확인합니다. </li><li> 동맥 (그림 4) 팽창과 제대 동맥 카테터를 삽입하는 곡선 마이크로 집게를 사용하여(3.5 프랑). 3 × 무게 CM에서 추정 삽입 길이 (㎏) + 10 (부검에 신장 동맥 위의 대동맥을 내림차순으로 정확한 위치를 기반으로 실험식). </li><li> 제 5 천을 카테터에게 제대 정맥에 5cm (그림 4)을 놓습니다. 혈액 반환에 의해 혈관 내 카테터의 위치를​​ 확인합니다. 배꼽 주위에 지갑 문자열 봉합을 배치하여 안전 카테터, 봉합사는 배꼽 카테터의 각 주위에 종료 전달하고 매듭을 묶어. 투명 접착 드레싱 카테터를 커버. </li><li> 미리 지정된 시점에서 혈액 샘플을 수집 : 45 분 저산소 모욕 4) 저산소 모욕 후 2 시간의 끝에서 저산소 모욕 3)에 1) 즉시 저산소증 전에, 2) 30 분. 혈액 샘플에 대한 실험 다른 시점의 목적에 따라 선택하는 것이 될 수있다. </li><li> 저산소 허혈 (표 1)에 의한 혈액 가스 변경을 확인하는 동안 촬영 저산소증 혈액 샘플로부터의 동맥 혈액 가스 분석을 사용한다. 새끼 돼지가 낮은 헤모글로빈을 가지고 있습니다T의 탄생과 (8g / dL로 주위에) 자주 혈액 샘플링에서 빈혈이 될 수 있습니다. 24 시간 이내에 무승부 미만 2 ml의 혈액 / kg의 체중 미만 5 ml의 혈액 / kg의 체중을 철회하고 혈액 샘플링을위한 현지 가이드 라인을 준수합니다. 빈혈의 증상은 적혈구 용적률과 빈맥 감소 등이 있습니다. </li><li> 동맥 혈압 모니터 (MABP)를 계속하기위한 모니터에 동맥 라인을 연결합니다. 유체 및 약물 관리를위한 정맥 라인을 사용합니다. </li></ol><img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/52454/52454fig4.jpg" /> 4. 배꼽 혈관을 그림. 제대 정맥 (오른쪽)과 두 개의 배꼽 동맥 (왼쪽) 중 하나를. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52454/52454fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 5. 저산소증 <ol><li> 모니터링을 완료 한 후 60 분을 기다립니다. 4 % O 2로 전환하여 저산소증을 유발 </suB&gt; / 96 % N 2 가스 혼합물. 밀접하게 중요한 매개 변수와 aEEG를 모니터링하고 45 분 동안 저산소증을 계속합니다. </li><li> aEEG 트레이스 (상부 여백 &lt;7 μV) 평면되면 고무 산소 분획 (FIO 2)를 변경하여 산소를 조정하고,도 5에 도시 된 흐름도에 따른 aEEG 평탄한 트레이스를 유지 최고 FIO 2 레벨기도 압력을 의미한다. 적어도 10 분 동안 기준의 70 % 이하로 MABP을 목표로하고 낮은 FIO이 필요한 경우 저혈압과 허혈을 보장합니다. 저혈압의 레벨은 이전에 기술 된 관련 저산소 허혈성 뇌 손상을 생성하기 위해 다른 19,13,30 의해 밝혀졌다. </li><li> 심한 저혈압 인 경우 (MABP &lt;25mm 수은)은 다음과 같이 단계적 치료 : 간단히 1-5%에 의해 FIO 2 증가, 식염수 러스 (10 ㎖ / ㎏), 도파민의 주입 (5 ~ 20 μg의 / ㎏ / 분), 과 노르 아드레날린 (20 NG-1 μg의 / ㎏ / 분)의 주입. </li><li> &gt; 10 분을 지속 발작 경우 (대성, 토닉 오R 근간 대성 발작은 일반적으로 초점 또는 aEEG 진폭의 급격한 변화)로 표시 ()를 다음 주사로 진행하기 전에 30 분을 허용와 함께 단계적으로 치료 : 페노바르비탈의 IV 20 ㎎ / ㎏을 반복, 페노바르비탈의 IV 20 ㎎ / ㎏의 느린 덩어리를하고, 미다 졸람의 IV 0.5 ㎎ / ㎏. <ol><li> 발작 개발 및 약물 치료의 안락사에 응답하지 않는 경우 표시됩니다. </li></ol></li></ol><img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/52454/52454fig5.jpg" /> 산소에 조정을 보여주는 그림 5. 저산소증 - 허혈 순서도. 순서도 aEEG 응답에 따라 (F I O 2와 P의 AW). 기도 압력 (P의 AW)을 의미하는 것은 PIP / TV (낮은 PIP 낮은 P의 아를 제공)와 호흡을 변경하여 조정 (낮은 RR 낮은 P의 아을 제공합니다). aEEG = 상단 추적의 마진 &lt;5 μV 및 추적의 낮은 마진&gt; 3 μV (평균 4 μV)을 대상입니다. 목표심박수 (HR) =&gt; 80 대상의 의미 동맥 혈압 (MABP) = MABP&gt; (25) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52454/52454fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 6. 72 시간 생존 <ol><li> 저산소 모욕 후 밀접하게 돼지를 모니터링하고, 점차적으로 프로포폴과 펜타닐의 주입 속도를 줄일 수 있습니다. 동물이 자발적으로 호흡하는 지점에서 Extubate. </li><li> 생존 기간 동안 집중 치료 및 모니터링에 훈련받은 사람이 24 시간 시계와 동물 시설에서 돼지를 유지한다. 정맥 내 포도당 주입을 20 ㎖를 관리 / 시간당 2 ~ 3 킬로그램. 저산소 - 허혈 부분 수유 후 26-48 시간에 개시 될 수있다. 개그 반사가없는 경우 기관지와 폐에 흡인 병 공급에 의해 발생할 수 있습니다. </li><li> 실험과 관련이 있다면, 썰 에센 등에 의해 개발 된 점수 시스템을 사용하여 신경 학적 상태를 평가한다.에 기재된해당 출판물 (17)의 세부 사항. </li></ol> 7. 결과 평가 <ol><li> 72 시간 후, 마취 및 제 2 항에 설명 3. Munkeby 등 (31) 등 2에 의해 설명 된 바와 같이 자기 공명 영상 관련 영상 방식으로 검사 수행으로 다시 환기. </li><li> 실험의 끝에서 펜 토바 비탈 치사량으로 새끼 돼지를 안락사 (5g / kg IV). </li><li> 실험의 목적에 따라 검사를 위해 뇌를 준비합니다. <ol><li> 포르말린 고정 조직에 뇌 조직 검사의 경우 :.. 로버트슨 등 (2)에 의해 설명 된 바와 같이 파라 포름 알데히드의 해부 및 사후 고정 다음 PBS에서 4 % 파라 포름 알데히드와 심장 관류를 사용, Chakkarapani 등의 알 1 류 등 18은 뇌를 제거 안드레 등에 의해 기술 된 바와 같이 4 % 파라 포름 알데히드에 담그지. 32 </li><li> 분석을 위해 스냅 냉동 조직을 필요로하는 (예를 들어, RNA분석 또는 효소 활성 분석 33). 관심의 뇌 영역을 해부, 뇌를 제거하고 스냅인 동결 최대 1cm의 조직 블록을 액체 질소에 X 1cm Munkeby 등에 의해 설명 된 바와 같이 (33) </li></ol></li></ol>

<ol><li>Chakkarapani, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenon+enhances+hypothermic+neuroprotection+in+asphyxiated+newborn+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of%22%5BJournal%5D)">Xenon enhances hypothermic neuroprotection in asphyxiated newborn pigs.</a> Annals of. 68, 330-341 (2010).</li>
<li>Robertson, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+augments+hypothermic+neuroprotection+in+a+perinatal+asphyxia+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+%3A+a+journal+of+neurology%22%5BJournal%5D)">Melatonin augments hypothermic neuroprotection in a perinatal asphyxia model.</a> Brain : a journal of neurology. 136, 90-105 (2013).</li>
<li>Lawn, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Every+Newborn%3A+progress%2C+priorities%2C+and+potential+beyond+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Every Newborn: progress, priorities, and potential beyond survival.</a> Lancet. 384, 189-205 (2014).</li>
<li>Lee, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrapartum-related+neonatal+encephalopathy+incidence+and+impairment+at+regional+and+global+levels+for+2010+with+trends+from+1990%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">Intrapartum-related neonatal encephalopathy incidence and impairment at regional and global levels for 2010 with trends from 1990.</a> Pediatric research. 74, Suppl 1. 50-72 (2013).</li>
<li>Kurinczuk, J. J., White-Koning, M., Badawi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+neonatal+encephalopathy+and+hypoxic-ischaemic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Early+human+development%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of neonatal encephalopathy and hypoxic-ischaemic encephalopathy.</a> Early human development. 86, 329-338 (2010).</li>
<li>Shankaran, S., Woldt, E., Koepke, T., Bedard, M. P., Nandyal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+neonatal+morbidity+and+long-term+central+nervous+system+sequelae+of+perinatal+asphyxia+in+term+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Early+human+development%22%5BJournal%5D)">Acute neonatal morbidity and long-term central nervous system sequelae of perinatal asphyxia in term infants.</a> Early human development. 25, 135-148 (1991).</li>
<li>Robertson, C. M., Finer, N. N., Grace, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((School+performance+of+survivors+of+neonatal+encephalopathy+associated+with+birth+asphyxia+at+term%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+pediatrics%22%5BJournal%5D)">School performance of survivors of neonatal encephalopathy associated with birth asphyxia at term.</a> The Journal of pediatrics. 114, 753-760 (1989).</li>
<li>Bennet, L., Booth, L., Gunn, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+biomarkers+for+hypoxic-ischemic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+feta.%2C+%26+neonatal+medicine%22%5BJournal%5D)">Potential biomarkers for hypoxic-ischemic encephalopathy.</a> Seminars in feta., & neonatal medicine. 15, 253-260 (2010).</li>
<li>Yager, J. Y., Ashwal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+perinatal+hypoxic-ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of perinatal hypoxic-ischemic brain damage.</a> Pediatric neurology. 40, 156-167 (2009).</li>
<li>Buckley, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maturation+of+circulatory+system+in+three+mammalian+models+of+human+development%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+biochemistry+and+physiology.+A%2C+Comparative%22%5BJournal%5D)">Maturation of circulatory system in three mammalian models of human development.</a> Comparative biochemistry and physiology. A, Comparative. 83, 1-7 (1986).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt%5BTitle%5D)+AND+%22Early+human+development%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early human development. 3, 79-83 (1979).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+growth+and+development+of+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+disease+in+childhood%22%5BJournal%5D)">Quantitative growth and development of human brain.</a> Archives of disease in childhood. 48, 757-767 (1973).</li>
<li>Foster, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+survival+model+of+hypoxia%2Fischaemia+in+the+piglet+suitable+for+neuroprotection+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">An improved survival model of hypoxia/ischaemia in the piglet suitable for neuroprotection studies.</a> Brain research. 919, 122-131 (2001).</li>
<li>LeBlanc, M. H., Li, X. Q., Huang, M., Patel, D. M., Smith, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMPA+antagonist+LY293558+does+not+affect+the+severity+of+hypoxic-ischemic+injury+in+newborn+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">AMPA antagonist LY293558 does not affect the severity of hypoxic-ischemic injury in newborn pigs.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 26, 1908-1914 (1995).</li>
<li>Andresen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotine+affects+the+expression+of+brain-derived+neurotrophic+factor+mRNA+and+protein+in+the+hippocampus+of+hypoxic+newborn+piglets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Perinat+Med%22%5BJournal%5D)">Nicotine affects the expression of brain-derived neurotrophic factor mRNA and protein in the hippocampus of hypoxic newborn piglets.</a> J Perinat Med. 37, 553-560 (2009).</li>
<li>Cheung, P. Y., Gill, R. S., Bigam, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+swine+model+of+neonatal+asphyxia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A swine model of neonatal asphyxia.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li>
<li>Thoresen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+piglet+survival+model+of+posthypoxic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">A piglet survival model of posthypoxic encephalopathy.</a> Pediatric research. 40, 738-748 (1996).</li>
<li>Liu, X., Tooley, J., Loberg, E. M., Suleiman, M. S., Thoresen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+hypothermia+reduces+cardiac+troponin+I+after+hypoxic-ischemic+encephalopathy+in+newborn+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">Immediate hypothermia reduces cardiac troponin I after hypoxic-ischemic encephalopathy in newborn pigs.</a> Pediatric research. 70, 352-356 (2011).</li>
<li>Bjorkman, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxic%2FIschemic+models+in+newborn+piglet%3A+comparison+of+constant+FiO2+versus+variable+FiO2+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Hypoxic/Ischemic models in newborn piglet: comparison of constant FiO2 versus variable FiO2 delivery.</a> Brain research. 1100, 110-117 (2006).</li>
<li>Robertson, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Which+neuroprotective+agents+are+ready+for+bench+to+bedside+translation+in+the+newborn+infant%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+pediatrics%22%5BJournal%5D)">Which neuroprotective agents are ready for bench to bedside translation in the newborn infant.</a> The Journal of pediatrics. 160, 544-552 (2012).</li>
<li>Jacobs, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooling+for+newborns+with+hypoxic+ischaemic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Cooling for newborns with hypoxic ischaemic encephalopathy.</a> Cochrane Database Syst Rev. 1, CD003311(2013).</li>
<li>Andresen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resuscitation+with+21+or+100%25+oxygen+in+hypoxic+nicotine-pretreated+newborn+piglets%3A+possible+neuroprotective+effects+of+nicotine%5BTitle%5D)+AND+%22Neonatology%22%5BJournal%5D)">Resuscitation with 21 or 100% oxygen in hypoxic nicotine-pretreated newborn piglets: possible neuroprotective effects of nicotine.</a> Neonatology. 93, 36-44 (2008).</li>
<li>Karlsson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+hypothermia+as+selective+head+cooling+or+whole+body+cooling+does+not+protect+brain+or+body+in+newborn+pig+subjected+to+hypoxia-ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">Delayed hypothermia as selective head cooling or whole body cooling does not protect brain or body in newborn pig subjected to hypoxia-ischemia.</a> Pediatric research. 64, 74-78 (2008).</li>
<li>Kovacs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asphyxia-induced+release+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone+in+newborn+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Asphyxia-induced release of alpha-melanocyte-stimulating hormone in newborn pigs.</a> Peptides. 22, 1049-1053 (2001).</li>
<li>Varvarousi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asphyxial+cardiac+arrest%2C+resuscitation+and+neurological+outcome+in+a+Landrace%2FLarge-White+swine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animals%22%5BJournal%5D)">Asphyxial cardiac arrest, resuscitation and neurological outcome in a Landrace/Large-White swine model.</a> Laboratory animals. 45, 184-190 (2011).</li>
<li>Tammela, O., Pastuszko, A., Lajevardi, N. S., Delivoria-Papadopoulos, M., Wilson, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+tyrosine+hydroxylase+in+the+striatum+of+newborn+piglets+in+response+to+hypocapnic+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Activity of tyrosine hydroxylase in the striatum of newborn piglets in response to hypocapnic hypoxia.</a> Journal of neurochemistry. 60, 1399-1406 (1993).</li>
<li>Cote, A., Barter, J., Meehan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+metabolic+effects+of+repeated+hypoxemia+in+piglets%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+journal+of+physiology+and+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Age-dependent metabolic effects of repeated hypoxemia in piglets.</a> Canadian journal of physiology and pharmacology. 78, 321-328 (2000).</li>
<li>Tichauer, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+severity+of+perinatal+hypoxia-ischemia+in+piglets+using+near-infrared+spectroscopy+to+measure+the+cerebral+metabolic+rate+of+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">Assessing the severity of perinatal hypoxia-ischemia in piglets using near-infrared spectroscopy to measure the cerebral metabolic rate of oxygen.</a> Pediatric research. 65, 301-306 (2009).</li>
<li>Jasani, M. S., Salzman, S. K., Tice, L. L., Ginn, A., Nadkarni, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetic+regimen+effects+on+a+pediatric+porcine+model+of+asphyxial+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Resuscitation%22%5BJournal%5D)">Anesthetic regimen effects on a pediatric porcine model of asphyxial arrest.</a> Resuscitation. 35, 69-75 (1997).</li>
<li>Chakkarapani, E., Thoresen, M., Liu, X., Walloe, L., Dingley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenon+offers+stable+haemodynamics+independent+of+induced+hypothermia+after+hypoxia-ischaemia+in+newborn+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+care+medicine%22%5BJournal%5D)">Xenon offers stable haemodynamics independent of induced hypothermia after hypoxia-ischaemia in newborn pigs.</a> Intensive care medicine. 38, 316-323 (2012).</li>
<li>Munkeby, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+piglet+model+for+detection+of+hypoxic-ischemic+brain+injury+with+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+radiologica%22%5BJournal%5D)">A piglet model for detection of hypoxic-ischemic brain injury with magnetic resonance imaging.</a> Acta radiologica. 49, 1049-1057 (2008).</li>
<li>Andresen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newborn+piglets+exposed+to+hypoxia+after+nicotine+or+saline+pretreatment%3A+long-term+effects+on+brain+and+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Matern+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Newborn piglets exposed to hypoxia after nicotine or saline pretreatment: long-term effects on brain and heart.</a> J Matern Fetal Neonatal Med. 22, 161-168 (2009).</li>
<li>Munkeby, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resuscitation+with+100%25+O2+increases+cerebral+injury+in+hypoxemic+piglets%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">Resuscitation with 100% O2 increases cerebral injury in hypoxemic piglets.</a> Pediatric research. 56, 783-790 (2004).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

인해 복잡성 설명한 모델은 공인 시설에서 구현 될 수 있고, 동물 연구에서 경험. 지역 윤리위원회의 승인 전에 실험의 시작을 얻을 수 있어야하며, 최적의 동물 복지는 항상 확보해야합니다. 모델 실험 동물의 생존을 기반으로, 이는 무균 환경이 감염을 방지하기 침습적 동안 유지하는 것이 중요하다. 모든 마취제가 잠재적 인 신경 속성이있는 경우 마취의 선택은 가장 중요하다. 이전에 발행 된 모델 간의 결과 차이는 할로 탄 또는 프로포폴 (17, 19)로 사용되는 마취제의 차이에 부분적으로 기인되었을 수도 있습니다. 마취를 생략 할 수 없기 때문에 이것은 거의 문헌에 접촉되지 않은 점이며,이 모델에 적용될 수 소수의 증거가있다. 우리의 실용적인 접근 방식은 몇 differen로 사용하는 것입니다가능한 T 마취제, 즉 세보는 다음 프로포폴과 펜타닐이 지속적으로 주입되는에, 간단하게 사용됩니다. 연속 주입에 대한 지정된 범위 내에서 머물고하지 않지만 우리의 실험에서 ...

주 산기 질식는 저산소 성 허혈성 뇌증 (HIE)과 관련된 급성 및 자주 예상치 못한 상태이다. 이 프로토콜의 전반적인 목표는 주 산기 저산소 성 허혈성 뇌증의 돼지 생존 모델을 설명하는 것입니다. 이 모델은 신생아의 뇌 및 혈액, 뇌척수액 및 소변과 같은 체액에서의 신경 병리학에 실험적 치료, 자기 공명 영상 및 분광기 (MRI 및 MRS) 및 바이오 마커 저산소 허혈 다양한 정도의 효과를 조사하기 위하여 사용될 수있다 . 또한이 모델은 글로벌 저산소 - 허혈에 영향을 모두 심혈 관계, 호흡 기계, 신장과 간을 조사하는 데 유용 입증되었습니다. 산기 질식이 손상 산소 공급 분만 또는 즉각적인 산후 기간에서의 결과이다. 분만 중 저산소 이벤트는 세계의 2.9 공장의 약 4 분의 1, 전 세계적으로 0,660,000 명이 사망 매년 계정2012 3 이온 신생아 사망. 2010 1150000 아기에서 출생 질식 4 다음 신생아 뇌를 개발 한 것으로 추정했다. HIE 임신 34 주 이후 태어난 유아에서 뇌 질환으로 정의는 선진국에서 1-3 / 1,000 출산 5 발생하고 8.5 / 1,000 출산까지 개발 도상국 4. 사망의 위험 10-60%이고, 생존자 30-100% -6,7-에서 신경 학적 장애의 위험. 50200000 장애 조정 생명 년 (DALYs)는 분만 저산소 이벤트 (4)에 기인한다. 현재 HIE에 대한 지원 이외의 유일한 치료 후 저산소 저체온증이다. 따라서, 진단 절차 및 치료 전략의 발전은 HIE (8)의 관리를 개선하기 위해 필수적이다. 산기 질식 및 신생아의 뇌 손상 후 예후 관리에 개선 기저 질환 메커니즘의 지식을 확장에 기초D 가능한 치료. 다른 임상 이벤트가 HIE로 이어질 수 있으며, 단일 출생 센터에서 발생 빈도가 낮은 5로 HIE의 동물 모델은 특히 유용하다. 예후 및 진단 도구 및 새로운 치료 전략을 테스트 할 때 생물학적 변동의 영향이 최소화 될 수있는 실험 장치가 필수적이다. 동물 모델은 따라서 유도 손상과 질병 키우면 결과 9에 관련된 동적 프로세스를 기본 병리 기전의 이해에 기여 가능한 가깝게 임상 상황에 근사한다. 신생아 HIE의 동물 모델은 설치류, 양 및 돼지를 포함하는 다수의 종을 포함했다. 비교, 신생아 돼지는 전달 11, 12시 크기에 대해, 심장 혈관 시스템 (10)과 뇌의 성숙과 인간의 신생아에 높은 유사성을 가지고있다. 돼지 모델에서 감시, 계측 및 결과 평가는 그쪽과 유사HIE와 유아의 임상 치료에 사용되는 T. 따라서,이 모델로부터 신생아 케어 번역에 고도가있다. 주 산기 저산소증과 HIE의 새끼 돼지 모델은 여러 그룹에 의해 사용 영역 (13)의 수에 차이가 있습니다. 실험의 목적에 따라, 세심한주의가 약물의 선택에 지불해야합니다, 저산소증 - 허혈, 모욕 기간 및 정도, 포스트 모욕 소생술 및 관리, 및 결과 평가를 제어하는​​ 방법을 유도하는 방법. 무작위 시험 디자인은 항상 중재 연구에 사용되어야 편견을 방지 할 수 있습니다. 저산소 - 허혈 손상을 유도하는 방법을 적용 할 때 중요하다. HIE에 선도적 인 글로벌 저산소증은 종종 뇌, 심장, 폐, 신장 및 간을 포함한 다 장기 부전을 초래한다. 평가 결과에 따라 HIE의 모델은 국소 허혈, 예에 의존하기보다는 글로벌 저산소증과 국소 빈혈에 근거해야한다. 자동차의 결찰에 의해otid 동맥 (14). 평균 동맥압&gt; 40mm 수은이 유지하면서 최근 논문은 저산소증의 조합 (FIO 2 내지 12 %) 및 경동맥 압축을 적용 하였다. 또 다른 그룹은 기저 초과&gt; 20 밀리몰 / L까지 8 % O 2 글로벌 저산소증을 유발하거나 동맥 혈압 (MABP) &lt;15mm 수은을 의미하고, 4 시간 15 동물을 희생. 저산소증도 심 박출량에 의해 적정되었습니다 MABP (기준 30 ~ 40 %까지) 및 동맥의 pH (6.95-7.05) (16) (30-35mm 수은에). 이 보고서에 제시된 것과 유사한 aEEG 억제에 의해 적정 글로벌 저산소 - 허혈의 모델 electrophysiologically, 임상 적이다 뇌증을 입증하고, 질식 용어 유아 (17, 18)에서 볼 수있는 상태로 neuropathologically 비교했다. 유도 HIE의 정도는 필수적이다. HIE의 유용한 동물 모델은 신규 디아 테스트 허용해야절차 및 치료 옵션 영지주의. 이를 사용하려면, 모델은 새로운 치료법을 평가할 때 관련성이 적은 것이 거의 또는 전혀 치료 가능성이있는 심각한 뇌 손상 등의 치료 가능성이 적당한 HIE를 유도해야한다. 저산소증에 대한 허용 오차는 실험 동물 사이에 상당히 다릅니다. 이전의 연구는 더 일관성 뇌 손상이 달성 될 수 있다는 것을 보여 주었다 많은 동물 진폭 집적 뇌파 (aEEG)에 의해 평가 된 각 돼지의 뇌 응답에 따라 유발 된 저산소증을 개체화보다는 걸쳐 집합 FIO 2 값을 이용하여 17,19 생존한다는 저산소 이벤트. aEEG 억제의 지속 시간은 45 분 aEEG 억제 &lt;로 증가하고 20 분 aEEG 억제 및 중증 경련&gt;에서 몇몇의 병리학 적 변화, 뇌 손상의 정도와 상관. HIE 대한 신경 보호 치료제의 최근 평가는 행동 결과 MEAS있게 생존 모델에 대한 필요성을 식별동물 모델 20 URES. 제시된 HIE의 돼지 모델의 많은 장점이 있습니다. 그것은 결과가 인간의 생리에 번역 할 가능성이 높다 종을 기반으로합니다. aEEG 세계적인 저산소 - 허혈 모델 다 장기 부전과 저산소 - 허혈의 적정 바이오 마커가, MRI 및 행동이 적절한 시점에서 평가 될 수 있도록 생존 임상 관련 결과와 뇌 손상의 일관성 정도를 유도한다. 주 산기 질식과 HIE의 돼지 모델 만 HIE의 병태 생리에 현재의 통찰력에 크게 기여하지 않은,하지만 성공적으로 궁극적으로 인간의 새로운 치료법의 결과로, 임상 시험에 앞서있다. 돼지 모델 연구는 HIE (21)에 대한 치료로 저체온증을 수립에 중요한 역할을하고, 신생아 소생술 연구 (22)에서 사용된다. 질식과 HIE, 내 연구를 수행 할 때 다양한 그룹은 돼지 모델을 사용하고 있습니다D 연구 저체온증 23, 알파 - 멜라노 사이트 자극 호르몬 (24), 심장 정지 (25), 티로신 수산화 효소 활성을 26 반복 저산소 노출 27, NMDA 수용체 활성 (14)을 포함하고, 근 적외 분광기 (28). 절차의 과정에서 약간의 조정이 너무 경미하거나 너무 심한 뇌 손상 29,2 중 하나가 발생할 수 있으므로이 보고서에 제시된 돼지 HIE 모델은 작업 할 기술적 도전이다. 우리는 기존의 문학은 이전에 발행 된 모델을 재현하기에 충분한 세부 사항이 부족 것을 발견했다. 따라서, 우리는 여기에 HIE의 연구를 위해이 고급 모델을 수립하는 연구를 가능하게,이 보고서에서 돼지 72 시간 생존 모델의 설립에 필요한 기술적 인 절차의 각 단계를 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>웜-터치-소아용 담요</td><td>Covidien</td><td>5030840</td><td></td></tr><tr><td>접착제 Apertrue Drape</td><td>Barrier</td><td>915447</td><td></td></tr><tr><td>Utility Drape (sterile) 75x80 cm</td><td>Barrier</td><td>800530</td><td></td></tr><tr><td>Neoflon</td><td>BD - Luer</td><td>391350</td><td></td></tr><tr><td>Laryngoscope</td><td>Miller</td><td>85-0045</td><td></td></tr><tr><td>Endotracheal tube 2.5 mm&nbsp;</td><td>Covidien</td><td>111-25</td><td></td></tr><tr><td>기관내관 3.0mm(커프 포함</td>) <td>Unomedical</td><td>MM61110030</td><td></td></tr><tr><td>기관내관 3.5mm(커프 포함</td>) <td>Unomedical</td><td>MM61110035</td><td></td></tr><tr><td>마취 기계</td><td>GE Healthcare</td><td>1009-9002-000</td><td></td></tr><tr><td>EEG - 전극/일회용 피하 바늘 전극</td><td>Cephalon</td><td>ACCE120550</td><td></td></tr><tr><td>ECG - 전극</td><td>medtronic</td><td>3010107-003</td><td></td></tr><tr>MR <td>필립스</td><td>용</td><td>ECG 전극</td> ACCE120550 <td></td></tr><tr><td>동맥 혈액 샘플러 - 흡인기</td><td>방사선계 의료 ApS</td><td>956552</td><td></td></tr><tr><td>폴리 우레탄 배꼽 정맥 카테터 (5 Fr / Ch)</td><td>Covidien</td><td>8888160341</td><td></td></tr><tr><td>폴리 우레탄 배꼽 정맥 카테터 (3,5 Fr / ch)</td><td>Covidien</td><td>8888160333</td><td></td></tr><tr><td>봉합사 세트 (크기 3-0)</td> <td>Covidien</td><td>8886 623341</td><td></td></tr><tr><td>BD 척추 바늘 0.7x38mm</td><td>BD 바늘</td><td>405254</td><td></td></tr><tr><td>가스 96 % 질소 / 4 % 산소</td><td>공기 액체</td><td>주문</td><td></td>제작</tr><tr><td>NeuroMonitor (CFM) 시스템</td><td>Natus Medical Incorporated</td><td>OBM70002</td><td></td></tr></tbody></table>

신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

저산소 성 허혈성 뇌증 (HIE)을 발생 출생 질식는 전 세계적으로 0,660,000 명이 사망 매년 세계 290 만 신생아 사망의 1/4 정도를 차지한다. HIE의 동물 모델은 HIE의 병태 생리의 이해에 기여하고, 인한 주 산기 질식에 뇌 손상에서 발생하는 역동적 인 과정을 강조했다. 따라서, 동물 연구 후 모독 치료 전략에 대한 시간 - 윈도우를 제안했다. 저체온증은 pdiglet 모델 HIE에 대한 치료로 테스트 이후 임상 시험에서 효과가 입증되고있다. 모델의 변화가 부속 신경 보호 방법과 크세논과 멜라토닌의 돼지 연구의 연구에 적용되었다하는 것은 임상 단계로 이끈 I 및 II 시험 1, 2. 돼지의 HIE 모델은 더 신생아 resuscitation- 및 혈역학 적 연구뿐만 아니라 세포 수준에서 대뇌 저산소증의 조사에 사용된다. 그러나, 기술적 도전프로토콜 모델과 변화 중 하나 너무 경미하거나 너무 심한 뇌 손상의 원인이 될 수 있습니다. 이 글에서, 우리는 신생아 HIE의 안정적인 돼지 모델을 구축하기 위해 필요한 기술적 절차를 보여줍니다. 첫째, 신생아 돼지 (&lt;24 시간 이전, 중간 무게 1,500g)은 마취 삽관 및 신생아 중환자 실에서 발견 된 것과 유사한 설정에서 모니터됩니다. 글로벌 저산소 허혈 글로벌 저산소증, 저혈압 통해 대뇌 허혈 및 저산소 상태를 나타내는 평면 추적 진폭 집적 EEG (aEEG)를 달성하기 위해 흡기 산소 분율을 낮춤으로써 유도된다. 생존 aEEG 응답과 혈압에 따라 산소 조절에 의해 추진된다. 뇌 손상을 72 시간 후 조직 병리학 및 자기 공명 촬상에 의해 정량화된다.

유도 모욕하는 동안 발생하는 뇌에​​ 저산소증 - 허혈의 효과는 aEEG 추적을 기록하여 설명되어 있습니다. 대표적인 aEEG 트레이스는도 6에 도시된다. <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/52454/52454fig6.jpg" /> 그림 6. 대표 aEEG 추적. 때문에 저산소 - 허혈 낮은 진폭. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52454/52454fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 저산소증 동안에 pH를 초과하는베이스, 및 락 테이트의 극대값은 심박수 및 혈압과 함께 기록된다. 임상 스코어링 신경 17...

주산기 질식에 따른 저산소성 허혈성 뇌병증은 동물 모델을 사용하여 연구할 수 있습니다. 우리는 신생아 저산소성-허혈성 뇌병증의 새끼 돼지 모델을 확립하는 데 필요한 절차를 보여줍니다.

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

본 실험의 전반적인 목표는 새끼 돼지를 이용한 주산기 저산소성 허혈성 뇌병증 모델을 구현하는 것입니다. 이 모델은 이후 신생아 뇌 손상 연구에 활용될 수 있습니다. 먼저, 새끼 돼지를 신생아 중환자실과 유사한 환경에서 진정시키고 인공호흡을 실시하며 상태를 모니터링합니다.본 원고에서 설명하는 기술은 진폭 통합 EEG를 사용하여 저산소증을 적정합니다. 개별 연구 대상의 회복력에 따라, 생존을 보장하면서 진폭 통합 EEG가 억제된 상태를 유지하며 제어된 방식으로 동물 저산소증을 유도합니다. 이 4일 생존 모델에서 동물들은 저산소증 유도 72시간 후에 안락사됩니다.마지막으로, 실험 목적에 따라 자기공명영상, 신경병리학 및 체액과 장기 분석을 통해 뇌 및 기타 결과를 평가할 수 있습니다. 본 연구에서는 신생아 저산소성 허혈성 뇌병증 새끼 돼지 모델을 구축하는 데 필요한 기술적 절차를 단계별로 시각화하여 보여줍니다. 신경 발달 결과는 신생아 집중 치료의 모든 영역에서 주요 관심 사항입니다.신생아 뇌 손상 관리를 개선하기 위해서는 우수한 동물 모델이 필수적입니다. 이제 보시게 될 모델은 저산소성 허혈의 임상 경과를 잘 근사화한 모델입니다. 이러한 이유로, 본 영상에서 제시하는 모델의 결과는 임상 환경으로의 전이성이 뛰어납니다. 여기서는 저산소성 손상의 중증도와 타이밍을 조절함으로써 생물학적 변이를 최소화하였습니다.임상 연구의 해석을 어렵게 만드는 요인이 있지만, 본 연구에서는 생후 18~24시간 된 덴마크 랜드레이스(land race) 새끼 돼지를 사용합니다. 이들의 평균 체중은 1000~2000g이며, 생리적 특성이 여러 면에서 신생아와 유사합니다. 이 모델은 자기공명영상, 신경병리학 및 뇌척수액, 소변, 혈액과 같은 체액 내 바이오마커에 미치는 치료 효과를 조사하는 데 활용될 수 있습니다.이 모델은 다루기 기술적으로 까다로운 모델입니다. 다음에서는 모델 완성을 위해 필요한 각 단계를 시연합니다. 마취 시작에 필요한 장비는 세보플루레인 투여용 마스크, 말초 정맥 카테터, 식염수가 든 주사기, 프로포폴, 펜타닐, 근이완제 및 페니실린입니다.입을 벌리기 위한 슬링, 면봉, 직선형 블레이드가 장착된 수의용 후두경, Sloane spray 커프 endotracheal tubes(SIIS 3 0 2 0.5 및 2.0), 커프 팽창용 자가 팽창식 백 시린지 및 청진기를 준비합니다. 마스크를 통해 VO fluorine을 투여하고 마취 깊이를 모니터링합니다. 프로토콜에 따라 귀 정맥에 말초 정맥 카테터를 삽입하고 salan으로 플러싱합니다.이 시점에서 동물은 진정 상태이지만 자가 호흡을 하고 있습니다. 킬로그램당 30 µg의 fentanyl을 투여하여 정맥 마취를 시작하고, 삽관 직전에 킬로그램당 5 mg의 propofol와 1 mg의 broon을 투여합니다. 삽관을 위해 새끼 돼지를 앙와위로 배치합니다.기관내 튜브의 길이는 코끝에서 흉골 돌출부 위까지 측정합니다. 일반적으로 약 13 cm이며, 면봉을 사용하여 긴 후두개를 앞으로 당겨 들어 올릴 수 있게 합니다. 후두경을 사용하여 성대의 아데노이드 연골이 완전히 보이도록 합니다.경련을 예방하기 위해 후두에 국소적으로 리도카인 스프레이를 도포합니다. 미리 측정된 거리에 따라 성대를 통해 기관내관을 천천히 삽입한 후, 수동 환기를 위해 기관내관을 자가 팽창식 백에 연결합니다. 흉부의 대칭적 움직임 관찰, 청진기를 이용한 청진, 튜브 내 성에의 시각적 확인 및 모니터에 표시되는 흰색의 tid CO2 곡선을 통해 기관내관의 배치가 정확한지 확인합니다.마지막으로, 기도를 확실히 확보하기 위해 커프를 팽창시킵니다. 이제 기관내관을 인공호흡기에 연결하여 기계 환기를 실시합니다. 마지막으로, kg당 시간당 5 mg의 propofol과 fentanyl을 주입합니다.시간당 kg당 10 µg을 투여하기 시작합니다. 인공호흡기는 kg당 1회 호흡량 10 mL를 전달하는 용량 제어 모드로 설정하며, 모니터링 장비를 준비합니다. 새끼 돼지에게 ECG 전극, 펄스 옥시미터, 직장 온도 프로브 및 장비를 장착합니다.중심 동맥압 모니터링을 위해 펄스 옥시미터를 장착한 후, 직장 온도 프로브를 삽입합니다. 전극을 배치하기 전 가슴의 털을 제모합니다. 화면에는 ECG, 심박수, 중심 동맥압 및 산소 포화도가 표시됩니다.제대 카테터 삽입에 필요한 장비는 멸균 드레이프, 메스, 마이크로 기구, 3.5 French 및 5 French 크기의 제대 카테터, 혈액 샘플링 및 플러싱용 주사기, 제대 혈관 시각화를 위한 봉합 세트입니다. 탯줄은 피부 높이에서 절단합니다. 사진의 오른쪽에 제대 정맥이 보이며, 왼쪽에는 두 개의 제대 동맥 중 하나가 보입니다.먼저, 새끼 돼지의 체중(kg)에 3을 곱하고 10cm를 더한 깊이까지 동맥 카테터를 삽입합니다. 혈액을 흡인하여 정확한 위치에 삽입되었는지 확인합니다. 이어서 정맥 카테터를 5cm 깊이로 삽입합니다.카테터는 봉합을 통해 고정합니다. 3-0 봉합사를 사용하여 전극 배치를 위해 머리 부분을 삭모합니다. 진폭 통합 EEG 모니터링을 위해, 두정엽 전극은 서로 최소 2~4 cm 간격을 두고 배치해야 하며, 참조 전극은 정중선에, 접지 전극은 머리의 어느 곳에나 배치합니다.임피던스 테스트를 통해 4개의 전극이 적절한 위치에 배치되었으며 신호 대 잡음비가 양호함이 확인되었습니다. 화면 하단에는 실시간 EEG가 표시되고, 화면 상단에는 시간 압축된 진폭 통합 EEG가 표시됩니다. 새끼 돼지는 저산소증 유도 전 60분 동안 휴식을 취하게 합니다. 저산소증은 질소와 4% oxygen 혼합 가스를 공급하는 인공호흡기로 전환함으로써 시작됩니다.심각한 저산소증에 해당하는 진폭 통합 EEG의 평탄한 파형(flat trace)이 나타나기까지는 평균 2분이 소요됩니다. 45분 동안 뇌 저산소증을 유도합니다. 흡입 산소 분율은 조절됩니다.저산소증 동안 EEG 진폭을 7 µV 미만의 평탄한 상태로 유지하기 위해, 새끼 돼지는 초기에 심박수를 증가시켜 보상합니다. 저산소증이 지속됨에 따라 새끼 돼지는 보상 부전 상태에 진입하기 시작하며 평균 동맥압이 하락합니다. 이 시점에서는 생존을 보장하기 위해 흡입 산소 분율을 조절하는 것이 매우 중요합니다.45분 후, 흡입 산소 분율을 21%로 높여 뇌 활동을 증가시킵니다. 저산소증 유도 후, 새끼 돼지의 기관 내 튜브를 제거하고 이후 4일 동안 깨어 있도록 합니다. 숙련된 동물 기술자가 새끼 돼지에게 먹이를 공급하고 매일 신경학적 점수를 측정하며 관리합니다.72시간 후에 돼지에게 진정제를 투여하고 인공호흡기를 연결합니다. 다시 한번 언급하자면, 자기공명영상 및 분광법은 뇌를 검사하는 강력한 도구입니다. 자기공명영상은 신경병리학적 검사를 통해 보완됩니다.숙련된 신경병리학자가 뇌의 각 영역을 세심하게 절개하여 조사합니다. 본 영상을 시청하신 후에는 신생아 저산소성 허혈성 뇌병증의 새끼 돼지 모델을 구축하는 방법에 대해 충분히 이해하시게 될 것입니다. 이 모델을 통해 신생아 뇌 손상의 진단 및 치료와 관련된 적절한 문제들을 연구할 수 있습니다.궁극적으로는 영향을 받은 영아의 관리를 최적화하는 것입니다.

a-piglet-model-of-neonatal-hypoxic-ischemic-encephalopathy

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

hypoxic - 허혈성 뇌 손상에 대한 출생 후의 쥐 모델은 인간의 신생아 hypoxic 허혈성 뇌증 (히에)의 잘 설립 모델입니다. 이 문서에서는, 우리는 포스트 나탈 쥐 새끼의 히에의 모델을 설명합니다.

Perinatal 국소 빈혈의 Hypoxic 허혈성 뇌증 모델

대형 동물 모델은 신생아 질식의 생리학과 약리학의 시험에서 좋은 병진 값을 가진다. 신생아 piglets를 사용하여, 우리는 조직과 지역 혈류 역학, 생화학 및 pathologic 경로와 상관 관계가있는 산소 수송을 공부의 장점을 가지고 신생아 질식을 시뮬레이션 할 수있는 실험 프로토콜을 개발합니다.

신생아 질식의 돼지 모델

이 비디오는 신생아 저산소성-허혈성 뇌 손상을 연구하기 위한 마우스 모델을 만드는 절차를 보여줍니다. 외과적으로 허혈을 유도하고 동물에게 저산소증을 가하여 뇌 손상을 악화시키는 단계를 설명합니다. 마지막으로, 결과로 생성된 뇌 병변을 평가하는 방법을 보여주어 마우스 모델이 추가 과학적 조사를 위해 준비되었는지 확인합니다.

신생아 저산소성-허혈성 뇌 손상의 마우스 모델 확립

출처: Jantzie, L. L., et. al입니다. Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats(쥐에서 양막내 지방다당류를 사용한 산전 저산소증-허혈을 사용한 미숙아 뇌병증 모델링). J. Vis. Exp. (2015)이 비디오는 자궁 혈류를 제한하고 LPS를 주입하여 태아 쥐에서 저산소성 허혈성 및 염증성 상태를 유도하는 프로토콜을 보여주며, 조산 연구와 관련된 신경 염증 및 뇌 발달 장애를 모델링합니다.

태아기 쥐의 뇌병증을 모델링하기 위한 저산소성 허혈성 및 염증성 질환 유도

Encephalopathy of prematurity는 조산으로 인한 손상과 관련된 중추 신경계 이상을 포함합니다. 이 보고서는 융모막염을 모방한 자궁 내 일시적인 전신 저산소증-허혈 및 양수 내 지질다당류 투여(LPS)에 대한 임상적으로 관련된 쥐 모델, 그리고 감염 자극 및 태반 관류 부족이 CNS 발달에 미치는 관련 영향을 설명합니다.

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

마취에 의해 유발 된 발달 신경 독성 (AIDN) 연구는 인간에게 광범위하게 적용 할 수없는 설치류에 초점을 맞 춥니 다. 비인간 영장류 모델은 더 적절하지만 비용이 많이 들지 않으며 실험에 사용하기가 어렵습니다. 대조적으로, 돼지는 마취 성 신경 독성의 연구에 이상적이며 임상 적으로 관련이 있고 실용적인 동물 모델입니다.

마취 유발 신경 독성 (AIDN) 연구를위한 돼지 모델의 사용 : 번역 신경 과학적 접근법

본 원고는 저산소증-허혈을 앓고 있는 신생아 마우스의 다중 깊이 전극을 이용한 연속 비디오 EEG 레코딩방법을 설명합니다.

신생아 쥐의 저산소증-허혈 중 연속 비디오 뇌전도

이 새끼 돼지 모델에는 수술 기구, 심정지까지 질식, 소생술 및 소생술 후 관찰이 포함됩니다. 이 모델은 동물당 다중 샘플링을 허용하고 지속적인 침습적 동맥 혈압, ECG 및 비침습적 심박출량 모니터링을 사용하여 주산기 질식 및 신생아 심폐소생술에서 혈역학 및 심장 병태생리학에 대한 지식을 제공합니다.

심정지, 소생술 및 자발순환 회복 후 심장 손상 및 혈역학을 연구하기 위한 새끼돼지 주산기 질식 모델

이 프로토콜은 기관지폐 이형성증의 분자 유발 요인에 대한 이해를 용이하게 하고 치료 번역을 향상시키기 위해 적절하지 않은 계면활성제 양, 고산소증, 고압 환기 및 염증을 포함하여 미숙아 폐에서 발생하는 초기 병원성 사건을 모델링하는 급성 폐 손상의 신생아 새끼 돼지 모델의 개발을 설명합니다.

미숙아 폐의 초기 환경을 재현하는 신생아 새끼 돼지 급성 폐 손상 모델 개발

만성 전립선 염 / 만성 골반 통증 증후군의 전임상 모델을 유도하기 위해 신생아 산모의 분리, - 우리는 생애 초기 스트레스 패러다임을받은 남성 C57BL / 6 마​​우스의 전립선에 perigenital 기계적 감도와 비만 세포 활성화를 측정한다.

신생아 모자 분리의 마우스 모델에서 Perigenital 감도 및 전립선 비만 세포 활성화의 평가

배우세요 저산소-허혈성 뇌증의 돼지 모델을 통해 신생아 뇌손상 연구 방법을. 진정, 기계환기, 진폭 통합 EEG 모니터링을 활용한 72시간 생존 모델로 임상 적용 가능한 치료 전략 개발에 기여합니다.

신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델

더 많은 동영상 탐색