내분비 및 외분비 리 프로그래밍과 대량 살상 무기 확산 모델로 췌관의 결찰을 통해 마우스 췌장 외과 부상

이 절차의 전반적인 목표는 설치류 성인 췌장에 심각한 손상을 입혀 베타 세포의 신생과 증식이 가능한 환경을 조성하는 것입니다. 이것은 췌장이 노출될 수 있도록 먼저 정중선 개복술을 시행함으로써 이루어집니다. 그런 다음 췌장의 목 부위에 있는 주요 췌관을 두 개의 수술 매듭을 사용하여 결찰합니다.

마지막 단계에서는 부분관 결찰 또는 PDL 췌장을 채취합니다. 궁극적으로 면역조직화학 분석과 Q-R-T-P-C-R은 부분관 결찰술에 의해 유도된 조직 리모델링, 내분비 증식 및 신생과 관련된 요인을 연구하는 데 사용됩니다. 췌장 절제술 및 화학적 베타 세포 절제술과 같은 다른 췌장 손상 모델에 비해 이 기술의 주요 장점은 부분 관 결찰이 췌장 조직의 제거나 베타 세포의 파괴를 포함하지 않는 간단한 절차라는 것입니다.

쥐의 췌장에 의한 부분관 결찰술은 20여 년 전에 본 연구소에 소개되었습니다. 우리는 유전자 세포 계통 추적과 기능 손실 및 획득 실험을 용이하게 하기 위해 이 기술을 마우스에 적용했습니다. 이러한 실험 조건에서 베타 세포 생성의 메커니즘을 평가하려면 절차를 시작하기 전에 8 주 된 마취 된 마우스의 복부 인 흉부를 소독 클로르헥시딘 용액으로 소독하십시오.

다음으로, 복부의 2.5 x 1.5cm 부분을 면도하고 소독제와 에탄올을 번갈아 가며 수술 부위를 소독합니다. 마지막 스크럽 후 발가락으로 적절한 마취 깊이를 확인하십시오. 동물을 꼬집어 드레이프합니다.

그런 다음 멸균 칼날을 사용하여 멸균 가위를 사용하여 xiphoid process에서 배꼽까지 연장하여 피부의 상부 정중선을 절개합니다. 밑에 있는 선형 팔꿈치와 복막을 분리하여 상복부 사분면을 노출시킵니다. 그런 다음 위를 위쪽으로 수축시켜 비장을 노출시킵니다.

그런 다음 췌장의 비장 엽 또는 꼬리 부분을 노출시킵니다. 다음으로, 십이지장과 상부 제주넘의 일부를 오른쪽 상복부 사분면으로 부드럽게 집어넣어 췌장의 머리, 목, 몸통을 노출시킵니다. 췌장의 목 부위에서 췌장 주관을 찾습니다.

췌장의 몸통과 꼬리 부위는 이제 췌관을 결찰하기 위해 노출됩니다. 목 부위 아래에 6.0 봉합 바늘을 조심스럽게 놓고 문맥의 왼쪽을 접합하여 위십이지장과 비장엽을 분리합니다. 두 번째 결찰을 첫 번째 결찰에 가깝게 배치하여 엽이 적절하게 분리되었는지 확인합니다.

그런 다음 장기를 복강으로 되돌리고 4개의 제로 폴리 글리콜 필라멘트 실을 사용하여 근육층을 연속적인 봉합사 패턴으로 닫습니다. 마지막으로, 불연속적인 봉합사로 피부를 닫고 동물이 완전히 회복될 때까지 모니터링한다. PDL 췌장은 크기가 줄어들고 거의 반투명하게 보입니다.

구멍이 작은 흰색 점으로 나타나면 췌장 머리가 불투명한 분홍색으로 나타나 멸균 가위를 사용하여 뚜렷한 외분비 LOI를 식별할 수 있습니다. 비장을 따라 잘라 췌장의 결찰된 꼬리와 비장, 췌장의 꼬리와 내부 장기를 연결하는 결합 조직을 분리합니다. 그런 다음 ation 바로 앞에서 PD L 꼬리를 자릅니다.

같은 방법으로 가짜 꼬리 조직을 분리하십시오. 그러나 가짜 췌장의 꼬리와 머리 부분은 모두 불투명한 분홍색입니다. 두 부분을 개별적으로 분리하려면 목 부위의 가짜 결찰 췌장을 자릅니다.

PDL이 올바르게 수행되면 마우스는 건강해 보이고 체중이나 혈당에 큰 차이를 보이지 않습니다. 가짜 수술 동물과 비교했을 때, PD L 수술 후 외분비 asar 조직이 점차적으로 소실되어 PDL Thein R 조직 형태가 명백한 asar 세포 자멸사로 파괴된 PD L 꼬리의 크기와 무게가 감소합니다. 일주일 후, 췌장 조직은 CD 45 양성 면역 세포에 침투하여 삼켜집니다.

2주 후, 많은 ASIN r 소엽이 섬유성 및 지방 조직으로 대체되어 PD L 꼬리 췌장이 반투명하게 나타나고 구멍이 육안으로 보이게 됩니다. asar apoptosis의 시작과 동시에 연성 상피의 세포 활성이 증가하는 것도 관찰됩니다. 더욱이, PDL 2주 후, PDL 꼬리의 총 베타 세포 부피는 비결찰 가짜 꼬리에서 관찰된 것과 비교하여 두 배로 증가하며, 이는 베타 세포 증식의 증가, 배아 내분비 전구 마커 뉴로겐의 활성화를 동반합니다.

이 절차를 시도하는 동안 수술의 모든 단계에서 적절한 무균 기술을 사용하고 아래 동맥과 주변 조직에 대한 손상을 최대한 최소화하면서 췌관 결찰을 수행하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라, 세포의 운명 및 기원에 대한 추가 질문에 답하기 위해 부분 덕트 결찰 형질전환 마우스에서 계통 추적과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. PD L. 이후.