Name: 종양 세포 이동 연구를위한 인간 Glioblastoma Organotypic Slice 문화 모델 및 항 침윤성 약물의 환자 특이 적 효과 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: 배우세요 인간 교모세포종 조직에서 장기형 슬라이스 배양을 생성하고 유지하는 방법을. 이 기법은 종양 침윤 행동을 관찰하고 환자별 치료 반응을 연구하는 데 활용됩니다.

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Lee Niswander 박사와 Rada Massarwa 박사에게 기술 전문 지식과 여기에 설명 된 슬라이스 문화 공 촛점 이미징 프로토콜에 대한 공헌에 감사드립니다. 뇌 종양 조직 슬라이싱 및 배양 변수 최적화에 관한 전문 지식을 제공 한 Kalen Dionne 박사에게 감사드립니다.

<ol><li>Beadle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+myosin+II+in+glioma+invasion+of+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">The role of myosin II in glioma invasion of the brain.</a> Mol Biol Cell. 19, 3357-3368 (2008).</li>
<li>Farin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplanted+glioma+cells+migrate+and+proliferate+on+host+brain+vasculature%3A+a+dynamic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Transplanted glioma cells migrate and proliferate on host brain vasculature: a dynamic analysis.</a> Glia. 53, 799-808 (2006).</li>
<li>Panopoulos, A., Howell, M., Fotedar, R., Margolis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+motility+occurs+in+the+absence+of+actin+polymer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma motility occurs in the absence of actin polymer.</a> Mol Biol Cell. 22, 2212-2220 (2011).</li>
<li>Ivkovic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+inhibition+of+myosin+II+effectively+blocks+glioma+invasion+in+the+presence+of+multiple+motogens%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Direct inhibition of myosin II effectively blocks glioma invasion in the presence of multiple motogens.</a> Mol Biol Cell. 23, 533-542 (2012).</li>
<li>Assanah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+progenitors+in+adult+white+matter+are+driven+to+form+malignant+gliomas+by+platelet-derived+growth+factor-expressing+retroviruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glial progenitors in adult white matter are driven to form malignant gliomas by platelet-derived growth factor-expressing retroviruses.</a> J Neurosci. 26, 6781-6790 (2006).</li>
<li>Chaichana, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+glial+cytoarchitecture+from+ex+vivo+human+tumor+and+non-tumor+cerebral+cortical+explants%3A+A+human+model+to+study+neurological+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Preservation of glial cytoarchitecture from ex vivo human tumor and non-tumor cerebral cortical explants: A human model to study neurological diseases.</a> J Neurosci Methods. 164, 261-270 (2007).</li>
<li>Grube, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+fatty+acid+synthase+in+human+gliomas+correlates+with+the+WHO+tumor+grade+and+inhibition+with+Orlistat+reduces+cell+viability+and+triggers+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Overexpression of fatty acid synthase in human gliomas correlates with the WHO tumor grade and inhibition with Orlistat reduces cell viability and triggers apoptosis.</a> J Neurooncol. 118, 277-287 (2014).</li>
<li>Hovinga, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+notch+signaling+in+glioblastoma+targets+cancer+stem+cells+via+an+endothelial+cell+intermediate%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Inhibition of notch signaling in glioblastoma targets cancer stem cells via an endothelial cell intermediate.</a> Stem Cells. 28, 1019-1029 (2010).</li>
<li>Merz, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+cultures+of+human+glioblastoma+reveal+different+susceptibilities+to+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice cultures of human glioblastoma reveal different susceptibilities to treatments.</a> Neurooncol. 15, 670-681 (2013).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vorinostat+modulates+cell+cycle+regulatory+proteins+in+glioma+cells+and+human+glioma+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Vorinostat modulates cell cycle regulatory proteins in glioma cells and human glioma slice cultures.</a> J Neurooncol. 105, 241-251 (2011).</li>
<li>Verhaak, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+genomic+analysis+identifies+clinically+relevant+subtypes+of+glioblastoma+characterized+by+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22in+PDGFRA%2C+IDH1%2C+EGFR%2C+and+NF1.+Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Integrated genomic analysis identifies clinically relevant subtypes of glioblastoma characterized by abnormalities.</a> in PDGFRA, IDH1, EGFR, and NF1. Cancer cell. 17, 98-110 (2010).</li>
<li>Gill, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI-localized+biopsies+reveal+subtype-specific+differences+in+molecular+and+cellular+composition+at+the+margins+of+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">MRI-localized biopsies reveal subtype-specific differences in molecular and cellular composition at the margins of glioblastoma.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 111, 12550-12555 (2014).</li>
<li>Snuderl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+amplification+of+multiple+receptor+tyrosine+kinase+genes+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Mosaic amplification of multiple receptor tyrosine kinase genes in glioblastoma.</a> Cancer cell. 20, 810-817 (2011).</li>
<li>Kakita, A., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+and+dynamics+of+SVZ+cell+migration+in+the+postnatal+forebrain%3A+monitoring+living+progenitors+in+slice+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Patterns and dynamics of SVZ cell migration in the postnatal forebrain: monitoring living progenitors in slice preparations.</a> Neuron. 23, 461-472 (1999).</li>
<li>Meijering, E., Dzyubachyk, O., Smal, I., van Cappellen, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+in+cell+and+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Sem+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tracking in cell and developmental biology.</a> Sem Cell Dev Biol. 20, 894-902 (2009).</li>
<li>Parker, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gefitinib+selectively+inhibits+tumor+cell+migration+in+EGFR-amplified+human+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Gefitinib selectively inhibits tumor cell migration in EGFR-amplified human glioblastoma.</a> Neurooncol. 15, 1048-1057 (2013).</li>
<li>Brat, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudopalisades+in+glioblastoma+are+hypoxic%2C+express+extracellular+matrix+proteases%2C+and+are+formed+by+an+actively+migrating+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Pseudopalisades in glioblastoma are hypoxic, express extracellular matrix proteases, and are formed by an actively migrating cell population.</a> Cancer Res. 64, 920-927 (2004).</li>
<li>Shweiki, D., Itin, A., Soffer, D., Keshet, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+induced+by+hypoxia+may+mediate+hypoxia-initiated+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor induced by hypoxia may mediate hypoxia-initiated angiogenesis.</a> Nature. 359, 843-845 (1992).</li>
<li>Shamir, E. R., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organotypic+culture%3A+experimental+models+of+mammalian+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organotypic culture: experimental models of mammalian biology and disease.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15, 647-664 (2014).</li>
<li>Charles, N. A., Holland, E. C., Gilbertson, R., Glass, R., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21446047">The brain tumor microenvironment.</a> Glia. 60, 502-514 (2012).</li>
<li>Di Cristofori, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vacuolar+H%2B+ATPase+is+a+novel+therapeutic+target+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">The vacuolar H+ ATPase is a novel therapeutic target for glioblastoma.</a> Oncotarget. 6, 17514-17513 (2015).</li>
<li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> Proc Natl Acad Sci USA. , 8352-8356 (2010).</li>
<li>Gerlach, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slice+cultures+from+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%3A+a+novel+test+system+for+drug+susceptibility+and+mechanisms+of+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Slice cultures from head and neck squamous cell carcinoma: a novel test system for drug susceptibility and mechanisms of resistance.</a> Br J Cancer. 110, 479-488 (2014).</li>
<li>Holliday, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+practicalities+of+using+tissue+slices+as+preclinical+organotypic+breast+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">The practicalities of using tissue slices as preclinical organotypic breast cancer models.</a> J Clin Pathol. 66, 253-255 (2013).</li>
<li>Maund, S. L., Nolley, R., Peehl, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+comprehensive+characterization+of+a+faithful+tissue+culture+model+of+the+benign+and+malignant+human+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Optimization and comprehensive characterization of a faithful tissue culture model of the benign and malignant human prostate.</a> Lab Invest. 94, 208-221 (2014).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

인간의 암 조직에서 유래 한 organotypic slice culture는 전임상 번역 실험을위한 매력적이고 활용도가 낮은 플랫폼을 제공합니다. 토종 미세 환경에서 이동, 증식 및 세포 사멸과 관련하여 종양 세포의 인구 수준 행동을 이해하는 것은 부족합니다. 비판적으로, 세포 행동의 수준에서 역동적이고 시간 - 해결 방식으로 치료에 종양 반응을 연구 치료 저항의 새로운 메커니즘에 빛을 발산 수 있습니다. 인간의 종양 슬라이스 배양은 인간의 질병 과정과 현재의 생체 내 및 생체 내 모델링 기술 간의 연결 고리를 제공합니다 19 . 최근 EGFR 증폭 16 시그널링에 관련된 세포 이동 동작 최초로 측정 간 종양 변화를보고, GBM 이동을 연구하는 방법으로서, 여기에 기재된 기술을 검증. 이 연구는 또한 슬라이스 배양 모델을 사용하여 파티를 테스트했습니다GBM 16에 대한...

glioblastoma (GBM)에 대한 실험실 연구는 종양 세포의 이동과 침입과 같은 인간 질병의 필수 병리학 적 특징을 충실히 재구성하는 모델의 부족으로 인해 방해 받고 있습니다. 2 차원 및 3 차원 체외 침윤 분석 및 3D 설치류 슬라이스 배양 모델의 비교 연구는이 두 상황에서 기계적으로 다른 세포 이동 프로그램을 발견하여 2D 시스템에서 인간 질병 1 , 2 , 3으로 의 결과의 번역 가능성을 잠재적으로 제한합니다. 여기에 설명 organotypic 종양 슬라이스 문화 및 이미지 패러다임은 수술 절제에서 얻은 전직 인간의 종양 조직의 조각 내에서 종양 세포 마이 그 레이션의 연구 수 있습니다. 따라서, 시간 경과 공 촛점 현미경과 함께 외과 절제 종양 조직의 슬라이스 문화는 기본에서 종양 세포 이동을 연구하는 플랫폼을 제공합니다조직 용해 또는 배양 passaging없이 microenvironment. 인간 종양 이종 이식, 레트로 바이러스 유발 종양 및 세포 오버레이에서 생성 된 GBM의 설치류 뇌 절편 배양 모델을 사용하여 종양 침습 1 , 2 , 3 , 4 , 5 를 연구하는 광범위한 문헌이있다. 최근에 여러 그룹이 인간 GBM 조직 6 , 7 , 8 , 9 , 10 에서 직접 organotypic 슬라이스 문화의 세대를 설명했다. 그러나, 기술 및 배양 배지를 슬라이싱하는 것과 관련하여 공개 된 프로토콜 간에는 현저한 차이가있다. 더 나아가, organotypic 슬라이스 문화의 사용은 세포 signali의 변화를 포함 정적 실험 종점에 초점을 맞추고있다신장, 증식 및 사망을 초래할 수 있습니다. 여기에 설명 된 프로토콜은 시간 경과 레이저 스캐닝 공 촛점 현미경을 통해 동적 종양 세포 행동의 시간 분해 관찰을 통합하여 이전의 슬라이스 문화 패러다임을 확대합니다. 인간 GBM에서의 inter 11 및 intratumoral 12 , 13 유전 변이의 최근 발견은 종양 세포 거동과이 이질성을 연결시키는 중요성과 치료에 대한 종양 반응에 미치는 영향을 강조한다. 여기에 우리는 거의 실시간으로 종양 세포 이동을 시각화하기 위해 인간 암 조직에서 직접 슬라이스 문화의 사용에 대한 간소하고 재현 가능한 프로토콜을보고합니다.

<table><tbody><tr><td>DMEM 고혈당&nbsp;</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>11960-044</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal-A Medium, 마이너스 페놀 레드</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Supplement (50x), 무혈청</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민 (200 mM)</td><td>인비트로겐 (Gibco)</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>헤페스 (1 M)</td><td>인비트로겐 (Gibco)</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>니스타틴 현탁액</td><td>시그마-알드리치</td><td>N1638-20ML</td><td>10,000 unit/mL in DPBS, 무균 처리, BioReagent, 세포 배양에 적합</td></tr><tr><td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>16520-050</td><td>65.5 &#176에서 녹습니다. C, 37 &#176에서 유동적인 상태로 유지됨; C, 25 &#176;C 이하로 급격히 설정됩니다.</td></tr><tr><td>Griffonia simplicifolia의 Isolectin GS-IB4, Alexa Fluor 647 Conjugate</td><td>Thermo Fisher (Molecular Probes)</td><td>I32450</td><td>마이크로아교세포/대식세포 라벨링 매체에 사용</td></tr><tr><td>pRetroX-IRES-ZsGreen1 Vector</td><td>Clonetech</td><td>632520</td><td></td></tr><tr><td>Retro-X Concentrator&nbsp;</td><td>Clonetech</td><td>31455</td><td>바이러스 상등액의 비초원심분리 농도를 위한 결합 수지</td></tr><tr><td>pVSG-G Vector</td><td>Retro-X Universal Retroviral Expression System의 일부인</td><td>Clonetech</td><td>631530</td></tr><tr><td>GP2-293 바이러스 패키징 셀</td>, <td>Retro-X Universal Retroviral Expression System의 일부인</td><td>Clonetech</td><td>631530</td></tr><tr><td>Cyanoacrylate Glue (Super Glue)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z105899</td><td>중점도</td></tr><tr><td><강>장비</강력></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peel-A-Way 임베딩 몰드(정사각형 - S22)</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>18646A-1</td><td>종양 샘플 삽입용 금형</td></tr><tr><td>스테인리스 스틸 마이크로 스패튤라</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50823</td><td>숟가락 칼날 목 부분의 45도 굽힘 기구</td></tr><tr><td>곡선형 Fisherbrand 해부 세밀한 포인티드 펜치</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>08-875</td><td></td></tr><tr><td>싱글 엣지 면도날 (American Safety Razors)</td><td>Fisher Scientific</td><td>17-989-001</td><td>블레이드 엣지는 0.009" 두께입니다. 주름진 뭉툭한 가장자리 덮개는 비브라톰에 로드하기 전에 제거됩니다.</td></tr><tr><td>Leica VT1000 S Vibratome</td><td>Leica Biosystems</td><td>VT1000 S</td><td></td></tr><tr><td>친수성 PTFE 세포 배양 삽입물&nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>PICM0RG50</td><td>30mm, 친수성 PTFE, 0.4 &마이크로; m 기공 크기</td></tr><tr><td>35mm 유리 바닥 접시&nbsp;</td><td>MatTek</td><td>P35G-1.5-20-C 슬리브</td><td>20mm 유리 직경. 커버슬립 유리 두께 1.5 mm</td></tr><tr><td>LSM 510 컨포칼 미코스코프</td><td>Zeiss</td><td>LSM 510</td><td>10x Air Objective (c-Apochromat NA 0.45)</td></tr><tr><td>PECON Stagetop Incubator</td><td>PeCON Germany</td><td>(단종)</td><td>Incubator PM 2000 RBT는 Zeiss 현미경과 함께 사용하도록 설계된 호환 가능한 제품입니다.</td></tr></tbody></table>

종양 세포 이동 연구를위한 인간 glioblastoma organotypic slice 문화 모델 및 항 침윤성 약물의 환자 특이 적 효과

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

Glioblastoma (GBM)는 수술, 화학 요법 및 방사선 요법에도 불구하고 극도로 열악한 임상 예후를 계속 수행합니다. 주변 뇌 실질로 진행성 종양 침입은 지속적인 치료 도전을 나타냅니다. GBM에 대한 안티 - 마이 그 레이션 요법을 개발하기 위해서는 통제 된 실험을 위해 생리적으로 관련된 배경을 제공하는 모델 시스템이 필수적입니다. 여기, 우리는 수술 절제술 동안 얻은 인간의 GBM 조직에서 조각 문화를 생성하기위한 프로토콜을 제시한다. 이러한 배양 물은 동물 이종 이식 물 또는 단일 세포 배양 물을 통과하지 않고 생체 외 실험을 허용한다. 또한, 종양 세포의 이동성 및 치료제에 대한 관련 반응을 정량적으로 연구하기 위해 세포 추적과 함께 시간 경과 레이저 스캐닝 공 초점 현미경을 사용하는 방법을 설명합니다. 절편은 수술 조직 획득 90 분 이내에 재현 가능하게 생성됩니다. Retrovirally 중재 형광 세포 라beling, 공 촛점 이미징 및 종양 세포 이동 분석은 문화의 2 주 이내에 완료됩니다. 우리는 인간 GBM에서 증가 된 철새 행동과 관련된 유전 적 요인을 밝히기 위해 이러한 조각 문화를 성공적으로 사용했습니다. 또한, 우리는 안티 - 마이 그 레이션 요법에 대한 응답으로 환자 - 특정 변형을 감지하는 모델의 능력을 검증했다. 앞으로 인간 GBM 슬라이스 문화는 개인화 된 신경 종양 치료법을 발전시키기 위해 치료제에 대한 종양 감수성을 빠른 생체 내 평가를위한 매력적인 플랫폼입니다.

<html> 우리 그룹은 초기 GBM 절제술을받은 50 명 이상의 환자로부터 슬라이스 문화를 성공적으로 생성했습니다. 이 슬라이스 생성, 배양, 레트로 바이러스 라벨링, 이미징 및 마이그레이션 분석 프로토콜은 재현 가능한 워크 플로우로 간소화되었습니다 ( 그림 1 ). 비판적으로,이 organotypic GBM 조각 문화 ( 그림 2 ) 최대 15 일 pathologic의 각인 및 microglia의 유지 관리를 포함한 문화를 통해 원래 종양 조직과 일치를 보여줍니다. 또한, 우리는 미세 환경 변화에 대한 종양 반응의 기능적 분석을 수행하기 위해이 시스템을 활용 해 왔습니다. 생리적 무결성 측정으로, 우리는, GBM 슬라이스 배양 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 생체 내 (17)에 넘치게 GBM 미세 환경 내에서 일어나는 프로세스의 생성을 측정함...

glioblastoma (GBM)의 현재 ex vivo 모델은 생리 학적으로 인간 종양 침습 연구에 최적화되어 있지 않습니다. 여기, 우리는 신선한 인간 GBM 조직에서 organotypic 슬라이스 문화의 생성 및 유지를위한 프로토콜을 제시한다. 시간 경과 현미경 및 정량 세포 이동 분석 기술에 대한 설명이 제공됩니다.

종양 세포 이동 연구를위한 인간 Glioblastoma Organotypic Slice 문화 모델 및 항 침윤성 약물의 환자 특이 적 효과

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...

본 실험 절차의 전반적인 목적은 일차 인간 교모세포종 세포의 침습적 이동 행동을 관찰하고 분석하는 것입니다. 이 방법은 질병 진행 및 치료 반응에서 환자별 차이를 유발하는 표현형 및 분자적 특성은 무엇인가와 같은 신경종양학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 교모세포종의 생체 내 조직 구조와 세포 이질성을 보존하면서 일차 세포를 직접 조작할 수 있다는 점입니다.멸균 핀셋을 사용하여 웰당 1 mL의 슬라이스 배양 유지 배지가 들어 있는 6-웰 플레이트의 각 웰에 빈 PTFE 배양 인서트를 넣는 것으로 시작합니다. 모든 인서트를 넣은 후, 플레이트를 37 °C, 5% CO2 조건의 가습 수조식 조직 배양 인큐베이터에 넣습니다. 다음으로, 종양 조직 조각들을 얼음처럼 차가운 처리 배지가 담긴 페트리 접시에 넣고, 피펫을 사용하여 신선한 배지로 조직을 세 번 부드럽게 세척하여 부착된 적혈구를 제거합니다.세 번째 세척 후, 메스를 사용하여 종양 조각을 약 3 x 3 x 10 mm 크기의 스트립 모양으로 절단하며, 이때 부착된 혈관은 조심스럽게 제거하고 괴사되었거나 소작된 조직은 피합니다. 모든 조직의 트리밍이 완료되면, 2 cm³ 플라스틱 임베딩 몰드에 37 °C의 액상 아가로스를 5~7 mm 두께로 넣고, 얼음 위에 올려 1분 동안 냉각시킵니다. 조직 스트립 2~4개를 장축이 수직이 되도록 아가로스에 배치하고, 배치 후 다시 2~5분 동안 얼음 위에 둡니다.아가로스가 응고되면, 메스로 틀의 측면을 잘라 아가로스를 틀에서 조심스럽게 분리하십시오. 그리고 시아노아크릴레이트 접착제를 충분히 사용하여 아가로스 블록을 진동 절편기(vibratome) 표본 플레이트에 고정하십시오. 접착제가 굳으면, 아가로스 블록을 얼음처럼 차가운 처리 용액에 담그고, 끝을 자른 멸균 플라스틱 피펫을 사용하여 진동 절편기 저장조 내의 용액에 5%CO2, 95%O2 혼합 가스를 기포 형태로 주입하십시오.바이브라톰의 절편 두께를 300에서 350 microns로 설정하고, 조직의 경도와 바이브라톰의 사양에 따라 칼날 전진 속도와 칼날 진폭을 조절합니다. 계획된 실험 분석에 따라 적절한 수의 절편을 얻으며, 절편이 생성되는 즉시 스테인리스 스틸 마이크로 스패출러를 사용하여 얼음처럼 차가운 처리 배지가 담긴 페트리 접시로 옮깁니다. 모든 절편을 얻은 후, 마이크로 스패출러를 사용하여 각 절편을 단일 PTFE 인

a-human-glioblastoma-organotypic-slice-culture-model-for-study-tumor

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연구

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의학

이 비디오는 3D 공동 문화 시스템의 개발을 보여줍니다. 쥐의 뇌 절편을 막에 놓고 형광 표지된 인간 뇌종양 세포가 그 위에서 자랄 수 있도록 합니다. 시스템이 준비되면 이미징을 위해 염색됩니다.

Organotypic Slice 공동 배양 모델에서 뇌종양 확립

이 비디오는 교모세포종 조직에서 유기형 절편 배양의 생성 및 유지를 보여줍니다. 분리된 조직은 아가로스 매트릭스에 내장되고 얇은 절편은 비브라톰을 사용하여 얻습니다. 그런 다음 이러한 절편을 마이크로플레이트 내의 투과성 멤브레인 삽입물에 놓고 장기 유지 관리를 위해 슬라이스 배양 유지 매체에서 배양합니다.

인간 교모세포종 조직으로부터 Slice 배양 생성 및 유지

출처: Parker, J. J., et al. 항침습적 약물의 종양 세포 이동 및 환자 특이적 효과 연구를 위한 인간 교모세포종 기관형 절편 배양 모델. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 공초점 현미경을 통해 녹색 형광 단백질(GFP)을 발현하는 교모세포종 조직 절편의 이미징을 보여줍니다. 고해상도 이미지는 종양 세포의 움직임과 방향을 추적하기 위해 일관된 간격으로 캡처됩니다.

타임랩스 스캐닝 공초점 현미경을 사용한 교모세포종 조직에서 종양 세포 이동 이미징

암 세포와 뇌의 Organotypic 슬라이스 공 배양은 뇌 조직의 암 세포 침략의 과정에서 형광뿐만 아니라 시야 (비디오) 현미경으로 형태 학적 변화를 시각화 할 수 있습니다. 이 모델 시스템은 전지 교환 및 보충 접근이 가능하며 조작 및 분석의 다양한 제공합니다.

뇌의 Organotypic 슬라이스와 암 세포의 3 차원 회전 타원체와 공 배양 시스템

많은 유형의 인간 뇌종양은 뇌 내의 특정 영역에 국한되어 있으며 배양에서 성장하기 어렵습니다. 이 프로토콜은 종양 미세환경의 역할을 다루고 유기형 마우스 뇌 절편에서 자라는 형광 원발성 뇌종양 세포를 분석하여 신약 치료를 조사합니다.

약물 치료를 종양 미세 환경을 공부하고 대상에 대한 뇌종양 / Organotypic 슬라이스 공동 문화 시스템

Organotypic hippocampal 슬라이스 문화 (OHSC) 아주 잘 vivo에서 상황을 시뮬레이션 하는 체 외에서 모델을 나타냅니다. 여기 설명 vibratome 기반 소설 물질의 신경 가능성 또는 종양 세포의 생물학 행동 평가에 사용 하기 위해 고품질 슬라이스를 얻기 위해 프로토콜을 깔 끔 히 개선 합니다.

Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 연구 Neuroprotection 및 종양 세포의 침입을 모델로

여기에서는 교모세포종에 대한 사용하기 쉬운 침략 분석방법을 설명합니다. 이 분석은 교모세포종 줄기 와 같은 세포에 적합합니다. 침략, 마이그레이션 및 확산의 쉬운 정량화를 위한 피지 매크로도 설명되어 있습니다.

교모세포종을 위한 3D 스페로이드 모형

우리는 organotypic 종양 조직 조각에 있는 실시간 약 반응을 측정하기 위한 프로토콜을 소개합니다. 여기에 설명된 실험 전략은 생체 내 조건에서 임상 또는 마우스 종양에서 유래한 조직 조각에 중고 처리량 약물 스크린을 수행하는 플랫폼을 제공한다.

오르가노티픽 종양 조직 슬라이스에서 실시간 약물 반응 측정

병아리 배아는 ovo에서 인간 교모세포종(GBM) 뇌종양을 연구하는 데 사용되며 생체 외 뇌 절편 공동 배양. GBM 세포 거동은 생체 외 공동 배양에서 타임랩스 현미경으로 기록할 수 있으며, 두 제제 모두 상세한 3D 공초점 분석을 통해 실험 종점에서 분석할 수 있습니다.

병아리 배아 뇌를 인간 교모세포종 세포 행동의 생체 내 및 생체 외 분석을 위한 모델로 사용

여기에서는 유전자형-표현형 의존성을 조사하고 교모세포종 치료를 위한 잠재적 약물을 스크리닝하기 위해 실험실에서 엔지니어링한 교모세포종 오가노이드(LEGO)를 생성 및 활용하기 위한 포괄적인 프로토콜을 간략하게 설명합니다.

실험실에서 엔지니어링한 교모세포종 오가노이드 배양 및 약물 스크리닝

우리는 새로 진단되고 재발한 종양에서 생성된 환자 유도 자기 교모세포를 이용한 3D 교모세포종 이동 모델을 제시합니다. 이 플랫폼은 환자별 이동 역학을 시각화하고 치료 효과 평가를 가능하게 합니다. 이 분석법은 이동 후 다중화되어 단백질 위치와 발현 패턴을 평가할 수 있습니다.

저산소 조건에서 자기 나노입자를 이용한 구형 위치 측정을 이용한 재현 가능한 3D 교모세포종 이동 검사

배우세요 인간 교모세포종 조직에서 장기형 슬라이스 배양을 생성하고 유지하는 방법을. 이 기법은 종양 침윤 행동을 관찰하고 환자별 치료 반응을 연구하는 데 활용됩니다.

종양 세포 이동 연구를위한 인간 Glioblastoma Organotypic Slice 문화 모델 및 항 침윤성 약물의 환자 특이 적 효과

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