Name: 인간의 전립선 암의 전 임상 동소 이식 쥐 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: 학습하세요 인간 전립선암의 동소 이식 쥐 모델 수립 방법을 통해 종양 미세환경에서의 분자 상호작용과 전이 메커니즘을 연구하고 새로운 치료법을 평가할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

원고 준비에 대한 지원과 도움을 주신 Roger Erickson 박사님께 감사드립니다. 이 작업은 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 국립암연구소(National Cancer Institute)에서 보조금 번호 RO1CA160079, RO1CA138642, UO1CA184966 및 VA 자금 지원 프로그램 프로젝트 번호 1P1 BX001604를 통해 지원했습니다.

동물과 관련된 모든 절차에 대한 프로토콜 검토 및 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 받아야한다. 관리 및 실험 동물의 사용을 위해 공식적으로 승인 된 절차를 따르십시오. 인트라 전립선 주입 오픈 복부 수술을 필요로하며, 동물은 수술 적절한 무균 기술은 전체 과정 동안 사용되는 수술 지정된 방 무균 환경에서 유지되어야한다. 주입을위한 세포의 1. 준비 주 : 연구 필요에 따라 임의의 전립선 암 세포주가 사용될 수있다. 세포주 공급자의 지침에 따라 배양한다. <ol><li> 안정적 반딧불 루시퍼 라제 유전자를 표현하는 PC3M 룩-C6 세포주 최소 필수 매체 (MEM)에서 배양 된 세포를 10 % 태아 소 혈청 (FBS), 1X 비 필수 아미노산이 보충 된, 1X Phleomycin D1 및 1mM의 피루브산 나트륨 . 인큐베이터 w에서 셀을 유지i 번째 37 ° C에서 95 % 공기 및 5 % CO 2의 가습 된 분위기. PC3M 룩-C6 세포는 UCSF의 핵심 시설에서 조달했다. </li><li> 트립신 처리하여 수확 세포. 인산염 완충 식염수 (PBS)로 한번 배양 접시를 씻으십시오. 세포가 분리되는 때까지 37 ° C에서 95 % 공기 및 5 % CO 2의 가습 된 분위기 인큐베이터에서 10cm 접시에 2 ml의 0.05 % 트립신을 첨가하고 3-5 분 동안 배양한다. <ol><li> 응집을 방지하기 위해, 타격 또는 세포 분리를 기다리는 동안 접시를 흔들어 세포를 선동하지 않습니다. 완전한 미디어 5ml에 세포를 수집하고 200 x g에서 5 분 동안 스핀 다운. 트립신을 제거하기 위해 PBS로 세포 펠렛을 씻으십시오. </li></ol></li><li> 은 트리 판 블루 배제 분석법에 의해 생균 열거. 0.4 %의 10 μL (중량 / V) 트리 판 블루 용액을 PBS에서 세포 현탁액 10 μL를 혼합한다. 혈구 계산 또는 챔버 슬라이드에 혼합물을 넣고 현미경으로 즉시 세포 계산 또는 셀 COU에서 챔버 슬라이드를 읽어nter. <ol><li> 10 μl의 배지에서 2.5 × 105 세포를 함유하는 세포 현탁액을 준비한다. 10 μl의 기저막과 같은 세포 외 기질 추출물과 세포 현탁액을 혼합하고 얼음에 세포를 배치합니다. 세포 현탁액에 루시페린 추가 (1 : 200 μL, 재고 30 ㎎ / ㎖ 농도) 마우스에 주입하기 전에. 참고 :이 다른 실험군 중 세포 주입의 일관성을 확인하기 위해 동물의 즉각적인 바이오 이미징을 할 수 있습니다. 세포 생존율은 박리 후에 급격히 감소 이후 트립신 처리 후, 바람직하게는 30 분 이내에 가능한 빨리 세포를 주입한다. </li></ol></li></ol> 외과 영역 2. 준비 <ol><li> 무균을 촉진 정돈, 소독 지역에서 수술을 수행합니다. </li><li> 수술 전 표백제 용액으로 카운터 / 실험실 벤치를 소독. 참고 : 알코올의 사용으로 인해 효과 (15 분)을 취할 필요가 긴 접촉 시간에 실망입니다. </li><li> 멸균 커튼을 사용하여흡수 패드 나 수건을 청소하고, 각각의 수술 세션 후 이러한 자료를 대체합니다. 사용하기 전에 모든 악기를 소독. 바람직한 방법은 증기 오토 클레이브 유리 비드 살균제, 산화 에틸렌 가스, 과산화수소 증기 멸균한다. </li><li> 수술 절차를 수행하기 위해 무균 청소 해부 현미경을 사용하거나 경험이 풍부한 연구자들은 현미경없이 수행 할 수 있습니다. </li></ol> 종양 세포의 주입 3 <ol><li> 남성 6~8주 된 면역을 Balb / C 또는 NOD / SCID 마우스를 사용합니다. 참고 : 종양의 성장과 전이의 느린 반응 속도를 갖는 경향이 작은 동물과 큰 동물에서 작동하는 것이 더 어렵다. </li><li> 동물 시설의 지시에 따라 미리 수술 통증 약물을 주입. 예를 들어, 0.1 ㎎ / ㎏ 체중의 투여 량으로 복강 내 부 프레 놀핀 사용할 수있다. </li><li> 산소와 웨스턴 오스트 레일 리아 1-3 %의 이소 플루 란과 함께 이소 플루 란 챔버로 배치하여 동물을 마취그것은 동물은 완전히 마취 될 때까지. 이 시점에서의 근육의 어떠한 토우 반사가 없다는 것을 보장한다. 전신 마취 중에 안구 건조증으로 인한 실명을 방지하기 위해 적절한 수의 안과 연고 윤활제를 사용합니다. 주 : 펜토 바르 비탈 나트륨을 위해, 연구자의 ​​바람직한 방법의 예에 의해 동물을 마취는 g 체중 당 0.05 ㎎을 복강 내 또는 케타민 / 크 실라 진 용액을 투여 (농도 : 17.16 ㎎ / ㎖) 65 밀리그램의 용량 / kg 체중 피하 사용됩니다. 이소 플루 란 흡입은 마취의 바람직한 방법이다. 눈 연고 부드럽게 각막에 마찰없이 적용되어야한다. </li><li> 이소 플루 란 챔버에서 동물을 제거하고 동물을 진행하기 전에 전체 마취 있는지 확인하기 위해 산소의 1 ~ 2 %의 이소 플루 란의 연속적인 흐름과 코 콘 장치에 배치합니다. <ol><li> 면도에 의해 쥐에서 머리를 제거하거나 절차를 시작하기 전에 헤어 크림을 사용합니다. 주 : 수술 중 멸균 가열 패드에서 마우스를 배치하는 것이 바람직 할 것이다. </li></ol></li><li> 부정사 위치에 마우스를 놓습니다. 포비돈 - 요오드 용액을 70 % 에탄올 면봉 다음에 W / W 10 %와 하복부를 청소합니다. </li><li> 미세 집게 한 쌍, 2mm 포피 선 위의 음경의 외​​피 위 약 1-2cm, 그리고 흉곽의 바닥 아래에 2 ~ 3 cm의 피부의 영역을 올립니다. </li><li> 제 메스로 피부를 통해 다음 시저 (도 1)와 근육층 통해 길이 정중선 절개 1cm합니다. </li><li> 체강에서 방광을 찾습니다. 그것은 절개 (그림 1) 바로 아래에있는 노란색 밝은 갈색 구형 기관이다. </li><li> 미세 겸자 파지하는 한 쌍의 블래 더와 음경 시스 향해 체강에서 하방 후 상방으로 들어 올려. 이 흰색 주머니 모양의 기관의 쌍과 명확하게 구별되는 두 개의 정낭에 노출됩니다. </li><li> 와면봉은 각 손에서 정낭 하나씩 구체화 한 체강 그들을 끌어들이 중간에 블래 더 (도 2)와 복부의 외면에 아래로 향하게 배치. </li><li> 두 지느러미 전립선 엽 명확하게 표시되도록 면봉을 사용하여 부드럽게, 음경 피복으로, 방광의 목 근처에 삽입 지점에 정낭을 뒤로 기울이십시오. 조직 손상 (그림 3)을 방지하기 위해 젖은 면봉을 사용합니다. </li><li> 주사기에 넣기 전에 마이크로 피펫을 가진 세포 현탁액을 교반한다. </li><li> 면봉 위치에 정낭을 배치하는 동안, 현미경 지느러미 전립선 엽 (그림 4)에 주사기 바늘을 삽입합니다. 수포 형성이 확인 될 때​​까지 천천히 세포 현탁액 20 μL를 주입. X 창 수포는 주사가 올바른지을 나타냅니다. </li><li> 와 주사 부위에 가볍게 침을 누릅니다 후퇴하는 동안몇 초 동안 면봉 길게는 누설을 방지합니다. </li><li> 조심스럽게 면봉과 정낭을 들어 올려 방광 다음에 의해 다시 체강 하나에 삽입. 이 절차를 수행하는 동안 &#39;달리기&#39;내부 장기를 피하십시오. </li><li> 체강 내로 다시 장기를 배치 한 후, 비 흡수성 4-0 나일론 봉합사와 외과 피부 폐색 하였다 흡수성 장선 4-0 크롬 봉합사와 중단 패턴 제 근육층 봉합사. 피부는 완전히 절개를 닫 함께 뽑아 외과 클램프로 닫을 수 있습니다. 참고 : 마우스는 봉합과 함께 추천 긁힘 때문에, 상처의 개방을 다시 조직 접착제의 사용 될 수 있습니다 자신의 상처에 무는 습관이있다. 이미지 동물은 즉시 모든 실험군 중 동일한 생물 발광 강도가 있음을 확신합니다. </li><li> 새장을 청소하고, 온난화 램프 또는 열에서 그들을 유지하기 위해 동물을 반환패드를 보내고. 그들이 완전히 마취에서 회복하고 흉골 드러 누움을 유지 지속적 때까지 동물을 모니터링합니다. </li></ol> 동물의 4. 모니터링 <ol><li> 기관 프로토콜에 따라, 실험이 종료 될 때까지 주기적으로 동물을 모니터한다. 수술 금속 클립을 사용하는 경우, 1 ~ 2 주 후 제거합니다. 실험 기간은 특정 연구의 필요성에 따라 달라집니다. 주 :이 실험은 마우스에서 전립선 암세포 이식의 성공 확립을 확인 21 일간 실시 하였다. </li><li> 동물 시설의 지침에 따라 진통제를 관리 할 수​​ 있습니다. 필요에 따라 예를 들어 0.1 ㎎ / ㎏ 체중의 투여 량으로 복강 내 부 프레 놀핀 6 시간 추가 투여 후 제 복용량 절차시​​ 매 8-12 시간을 사용할 수있다. </li><li> 동물 체중, 음식 소비, 피부 색깔과 질감 활성 및 소변 및 배변 빈도를 모니터한다. 동물에게 IMMED를 안락사iately 15 %보다 더 큰 체중의 상당한 손실이있는 경우. <ol><li> 안락사 무의식 완전한 마취제가 발생되도록 CO 2 천천히 챔버를 입력 할 수 있도록, 상기 챔버 또는 케이지 볼륨 / 분 10-30 %의 변위 유량 미 혼잡 케이지에 가압 된 탱크로부터 CO 2 전달 사망하기 전에. </li><li> 호흡 정지 후 1 분 이상이 CO 흐름을 유지하고 죽음 물리적 방법을 수행하기 전에 발생되도록 충분한 시간 동안 상기 챔버에 동물을 떠난다. </li><li> 수행 잘린, 자궁 경부 전위 또는 다른 IACUC는 화학적으로 동물을 안락사 후 물리적 방법을 승인했다. 주 : 상당히 감소 체중 종종 혼수 상태를 나타낸다. 종양 함유 동물 실험이 끝날 때까지 종양의 존재를 제외하고 건강하게해야한다. 안락사는 안락사에 AVMA 지침과 일치해야하고 liste해야합니다승인 된 IACUC 프로토콜 라. </li></ol></li></ol> 동물의 5. 비 침습적 바이오 이미징 <ol><li> 주간 암세포, 종양 성장 및 원격 전이의 정착을 추적하기 위해 비 침습성 영상화 기술을 사용하여 동물을 모니터한다. 참고 : 등 GFP 이미징, 루시 페라 이미징, X 선 또는 3D 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (UCT)와 같은 이미징 양식이 특정 연구에 따라 사용할 수는 12-15이 필요합니다. </li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2015%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2015.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li>
<li>Andrieu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+protein+27+confers+resistance+to+androgen+ablation+and+chemotherapy+in+prostate+cancer+cells+through+eIF4E%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Heat shock protein 27 confers resistance to androgen ablation and chemotherapy in prostate cancer cells through eIF4E.</a> Oncogene. 29 (13), 1883-1896 (2010).</li>
<li>Fusi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+options+in+hormone-refractory+metastatic+prostate+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Tumori%22%5BJournal%5D)">Treatment options in hormone-refractory metastatic prostate carcinoma.</a> Tumori. 90 (6), 535-546 (2004).</li>
<li>Hughes, C., Murphy, A., Martin, C., Sheils, O., O'Leary, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathology+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathology of prostate cancer.</a> J Clin Pathol. 58 (7), 673-684 (2005).</li>
<li>Pavese, J., Ogden, I. M., Bergan, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+murine+model+of+human+prostate+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An orthotopic murine model of human prostate cancer metastasis.</a> J Vis Exp. (79), e50873(2013).</li>
<li>Pettaway, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+highly+metastatic+variants+of+different+human+prostatic+carcinomas+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Selection of highly metastatic variants of different human prostatic carcinomas using orthotopic implantation in nude mice.</a> Clin Cancer Res. 2 (9), 1627-1636 (1996).</li>
<li>Rembrink, K., Romijn, J. C., van der Kwast, T. H., Rubben, H., Schroder, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+implantation+of+human+prostate+cancer+cell+lines%3A+a+clinically+relevant+animal+model+for+metastatic+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Orthotopic implantation of human prostate cancer cell lines: a clinically relevant animal model for metastatic prostate cancer.</a> Prostate. 31 (3), 168-174 (1997).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+tumor+cells+and+tumor-associated+endothelial+cells+for+therapy+of+androgen-independent+human+prostate+cancer+growing+in+the+bone+of+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Blockade of epidermal growth factor receptor signaling in tumor cells and tumor-associated endothelial cells for therapy of androgen-independent human prostate cancer growing in the bone of nude mice.</a> Clin Cancer Res. 9 (3), 1200-1210 (2003).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+platelet-derived+growth+factor+receptor+on+endothelial+cells+of+multidrug-resistant+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Targeting platelet-derived growth factor receptor on endothelial cells of multidrug-resistant prostate cancer.</a> J Natl Cancer Inst. 98 (11), 783-793 (2006).</li>
<li>Park, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+SRC+family+kinases+inhibits+growth+and+lymph+node+metastases+of+prostate+cancer+in+an+orthotopic+nude+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Targeting SRC family kinases inhibits growth and lymph node metastases of prostate cancer in an orthotopic nude mouse model.</a> Cancer Res. 68 (9), 3323-3333 (2008).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AFAP-110+is+overexpressed+in+prostate+cancer+and+contributes+to+tumorigenic+growth+by+regulating+focal+contacts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">AFAP-110 is overexpressed in prostate cancer and contributes to tumorigenic growth by regulating focal contacts.</a> J Clin Invest. 117 (10), 2962-2973 (2007).</li>
<li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Curr Protoc Pharmacol. Chapter 14, Unit 14.15(2010).</li>
<li>Johnson, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+live+animal+micro-CT+allows+for+quantitative+analysis+of+tumor-induced+bone+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Longitudinal live animal micro-CT allows for quantitative analysis of tumor-induced bone destruction.</a> Bone. 48 (1), 141-151 (2011).</li>
<li>Steinbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP-transfected+tumor+cells+are+useful+in+examining+early+metastasis+in+vivo%2C+but+immune+reaction+precludes+long-term+tumor+development+studies+in+immunocompetent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">GFP-transfected tumor cells are useful in examining early metastasis in vivo, but immune reaction precludes long-term tumor development studies in immunocompetent mice.</a> Clin Exp Metastasis. 20 (2), 135-141 (2003).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fluorescent+orthotopic+bone+metastasis+model+of+human+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A fluorescent orthotopic bone metastasis model of human prostate cancer.</a> Cancer Res. 59 (4), 781-786 (1999).</li>
<li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> J Natl Cancer Inst. 84 (12), 951-957 (1992).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation%3A+a+bridge+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li>
<li>Wang, X., An, Z., Geller, J., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-malignancy+orthotopic+nude+mouse+model+of+human+prostate+cancer+LNCaP%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">High-malignancy orthotopic nude mouse model of human prostate cancer LNCaP.</a> Prostate. 39 (3), 182-186 (1999).</li>
<li>An, Z., Wang, X., Geller, J., Moossa, A. R., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+orthotopic+implantation+allows+high+lung+and+lymph+node+metastatic+expression+of+human+prostate+carcinoma+cell+line+PC-3+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Surgical orthotopic implantation allows high lung and lymph node metastatic expression of human prostate carcinoma cell line PC-3 in nude mice.</a> Prostate. 34 (3), 169-174 (1998).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+c-Met+expression+by+an+adenovirus+expressing+a+c-Met+ribozyme+inhibits+tumorigenic+growth+and+lymph+node+metastases+of+PC3-LN4+prostate+tumor+cells+in+an+orthotopic+nude+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced c-Met expression by an adenovirus expressing a c-Met ribozyme inhibits tumorigenic growth and lymph node metastases of PC3-LN4 prostate tumor cells in an orthotopic nude mouse model.</a> Clin Cancer Res. 9 (14), 5161-5170 (2003).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

이 원고는 인간의 소성을 전립선 암 이종 이식 마우스 모델을 설정하기위한 상세한 절차를 설명합니다. 이 모델은 면역 쥐의 등 전립선 로브에 인간 전립선 암 세포주 PC3M 룩-C6의 직접 주입에 의해 수립되었다. 종양은 실험의 과정을 통해 발전 할 수 있었다. 종양 성장 실험 동안에 비 침습적 생물 발광 이미징 시스템에 의해 매주 모니터링 하였다. 이종 이식 종양 모델을 확립하는데 가장 중요한 요소는 종양 세포의 주입에 걸쳐 일관성을 달성한다. 통계적으로 유의 한 결과를 얻기 위해, 각 실험 그룹은 5-10 마우스를 포함해야하고, 종양 크기의 변화는 평균 종양 크기의 10 % 이상을 초과하지 않아야한다. 이를 위해, 프로토콜 내의 몇몇 중요한 단계 같은 중요하다 : I) 수술 동안 무균 촉진 영역에서 수술을 수행; ⅱ) 세포를해야 transplante가능한 한 빨리 d를 문화로부터 분리 한 후, ⅲ) 사출 볼륨이 일치해야합니다; 세포의 주입시와 체강 중 내부 장기의 ⅳ)주의 ...

전립선 암은 옆에있는 폐와 기관지 (28 %) 1 암, 미국 남성 중 암 사망 (9 %)의 두 번째 가장 일반적인 원인이다. 최근의 데이터에 따르면, 220, 800 새로 진단 전립선 암의 경우 27, 540 사망 2015 1에서 발생할 것으로 예상된다. 고급 전이성 질환 즉 동안 초기 전립선 암 오년 상대 생존율은&gt; 99 %이고 28 % 1. 고급 전이성 질환의 치료에 대한 주요 과제는, 특히 전립선 암 빈번한 사이트 뼈에 다른 장기로 전이이 질병의 경향을 기초 분자 메커니즘에 대한 이해의 부족이다. 따라서, 진보 된 전이성 질환 2,3-으로 진행에 대한 효과적인 치료법을 개발하기 위하여 이러한 전립선 종양의 분자 화장 공부 분명한 필요성이 존재한다. 전립선은 전시 HIG를 종양이진행에 잘 정의 된 경로가없는 시간 생물 학적 이질성. 전이는 종종 종양의 침윤 4없이 이전의 표시와 함께 발생합니다. 이 이질성은 임상 적 전립선 암의 분자 다양성에 기인한다. 이러한 치명적인 종양의 분자 메이크업을 이해하는 것은이 질병에 대한 더 나은 진단 및 치료 전략을 설계하는 열쇠입니다. 따라서, 전립선 암 연구 현재 이해 및 전이를 방지하는데 초점을 맞추고있다. 전임상 생체 내 마우스 모델 고급 전이성 전립선 암의 진행의 분자 메커니즘을 이해하기 위해 다양한 옵션을 제공한다. 또한, 이러한 모델은 본 질병에 대한 새로운 치료 전략의 임상 평가에 중요하다. 가장 흔히 사용되는 동물 모델은 트랜스 제닉 마우스 모델의 꼬리 정맥 주사, 인트라 심장 이식 인간 소성을 마우스 모델을 포함한다. 형질 전환 연구는 시간 consumi 있습니다NG 인간의 그것과 생쥐의 전립선 암 발생의 상관 관계 변화 (11)을 보여 주었다. 자발적 전이 마우스 모델에서, 세포 순환에 직접 주입되고, 이들이 신속한 처리 시간을 가질지라도, 이들은 차 종양 또는 전이성 캐스케이드 (5)의 초기 단계를 연구하기 위해 사용될 수 없다. 동소 이종 이식 모델은 뼈 전이성 병변 전립선 암 전이 공통 사이트 개발의 한계를 가지고있다. 그럼에도 불구하고, 인간의 동소 전립선 암 이종 이식 마우스 모델 잘 특성화 널리 일차 종양 발생, 종양 및 장기 미세 치료 개입 6 전이성 질환 실험 약물 사용의 초기 위상 사이의 크로스 토크 (cross-talk)의 분자 사건을 연구하는 데 사용되는 , 7,8-11.

<table><tbody><tr><td>PC3 전립선암 세포주&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1435</td><td></td></tr><tr><td>최소 필수 매체(MEM)&nbsp;</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>11095-080</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Zeocin</td><td>Invitrogen,Life Technology</td><td>R250-01</td><td></td></tr><tr><td>트립신&nbsp;</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>25300-54</td><td></td></tr><tr><td>IVIS&nbsp;</td><td>Xenogen-Caliper</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인슐린 주사기(300 &micro; l, 28.5 g)</td><td>Becton Dickinson</td><td>309300</td><td></td></tr><tr><td>Mice</td><td>Charles River Laboratories, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>알코올 면봉</td><td>MEDEquip Depot</td><td>326895 BD</td><td></td></tr><tr><td>PVP 요오드 준비 패드</td><td>MEDEquip Depot</td><td>C12400PDI</td><td></td></tr><tr><td>Surgical CatGut 크롬 봉합사</td><td>Demetech</td><td>CC224017F0P</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr></tbody></table>

인간의 전립선 암의 전 임상 동소 이식 쥐 모델

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

전립선암의 다면적인 생물학을 연구하기 위해 전임상 생체 내 모델은 이 질병에 대한 중요한 생물학적 정보를 밝힐 수 있는 다양한 옵션을 제공합니다. 인간 정소성 전립선암 이종이식 마우스 모델은 유전적으로 및 분자적으로 변형된 종양 세포, 장기 미세환경 간의 특정 상호 작용을 이해하고 치료 요법의 효능을 평가하는 데 유용한 대안 접근 방식을 제공합니다. 이것은 원발성 종양 발달의 분자 사건을 연구하기 위해 고안된 잘 특성화된 모델이며, 색전증 및 종양 세포의 순환 진입 전에 전이성 연쇄 반응의 초기 사건을 요약합니다. 따라서 전이성 질환의 초기 단계의 기저에 있는 분자 메커니즘을 설명할 수 있습니다. 또한 이 모델은 임상적 관련성이 있는 약물 표적에 주석을 달 수 있으며 전립선암 진행을 연구하는 데 유용한 도구입니다. 이 원고에서는 인간 정형소 전립선암 이종이식 마우스 모델을 확립하기 위한 자세한 절차를 설명합니다.

후방 전립선 로브로 PC3M 룩-C6 세포의 동소 이식 이후, 생쥐는 주간의 실험 과정 (- B도 5a)를 통해 세포의 정착 종양의 성장을 모니터링하는 살아있는 동물의 생물 발광 이미징 시스템을 사용하여 영상화 하였다. 생물 발광 신호의 정량화는 PC3M 룩-C6 세포가 성공적으로 전립선 로브를 식민지 것으로 나타났다. 증가 생물 발광 실험 (도 5b)에 걸쳐 증가 차 종양의 성장을 나타낸다. 연구 목표에 기초하여, 마우스는 종양 성장 및 먼 전이성 병변을 모니터링하는 방사선 형광 또는 발광 이미징에 의해 주간 비 침습적 모니터링 할 수있다. 이 모델에 의해 달성 될 수있는 다른 매개 변수는 : 체중 실험에 걸쳐 음식 섭취의 변화; 종양의 크기 및 중량에 약물 치료의 효과; 부량실험 종결시 종양 크기와 중량; DNA / RNA / 단백질의 추출 실험 종료 후 차 종양 내부에 발생...

전립선암은 미국에서 암 관련 사망의 두 번째로 흔한 원인입니다. 정소성 암 모델은 전립선암의 생물학을 이해하고 치료 요법의 효능을 평가하는 데 유용한 접근 방식을 제공합니다. 이 프로토콜은 정형소 전립선암 마우스 모델을 확립하는 데 필요한 자세한 단계를 설명합니다.

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

이 절차의 전반적인 목표는 전이 연쇄의 초기 단계에서 일어나는 일차 종양 발생의 분자적 사건을 연구하는 데 유용한 접근 방식을 제공하는 마우스 전립선암 정위 이식 제노그라프트 모델을 구축하는 것입니다. 이 모델은 성장하는 종양의 미세환경 내에서 유전적 및 분자적으로 변형된 종양 세포 간의 공간적 상호작용에 관한 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 또한, 인간 전립선암에 대한 새로운 치료법의 전임상 평가에도 기여할 수 있습니다.이 기술이 자발적 전이 모델보다 갖는 주요 장점은 원발성 종양 발달의 분자적 사건뿐만 아니라, 종양 세포가 혈류로 진입하여 색전증을 일으키기 전의 초기 전이 단계를 재현하여 연구할 수 있다는 점입니다. 전립선암의 정위 모델은 전립선암 세포가 어떻게 다른 장기로 전이되는지 이해하기 위한 최적의 전임상 모델 중 하나입니다. 대부분의 전립선암 환자가 전이로 인해 사망하므로, 이 모델은 전이의 분자적 기전을 조사하는 데 매우 중요합니다.이 모델을 사용하여 전이 경로에 특이적인 신경 화합물을 이용한 전이 치료의 더 나은 전략을 설계할 수 있습니다. 본 절차는 저희 실험실의 대학원생인 Melissa Colden과 연구원으로 Dr.Varahram Shahryari가 시연하겠습니다. 절차를 시작하기 전에, 대상 종양 세포 배양물을 PBS로 세척하고 세포 배양 인큐베이터에서 0.5% trypsin 2 mL와 함께 3~5분 동안 배양하십시오.세포가 떨어져 나오면 5 mL의 완전 배지로 반응을 중단시키고, 트립판 블루 제외법으로 세포 수를 측정합니다. 세포를 배지 10 µL당 2.5 × 10⁵ cells 농도로 희석한 다음, 세포 현탁액을 10 µL의 기저막 유사 세포외 기질 추출물과 혼합합니다. 세포를 얼음에 보관하고, 마취된 6~8주령의 면역 결핍 수컷 실험용 마우스를 멸균 가열 패드 위에 등으로 누운 자세로 배치한 후 발가락 꼬집기 반응이 없는지 확인합니다.동물의 눈에 연고를 도포하고 하복부의 털을 제거합니다. 10% povidone iodine scrub으로 수술 부위를 소독한 후, 음낭 초 상단 약 1~2cm와 흉곽 하단 약 2~3cm 부위를 70% ethanol로 소독합니다. 미세 핀셋을 사용하여 음경초샘 상단의 피부를 2mm 들어 올립니다.메스를 사용하여 피부 중앙선을 따라 1 centimeter 절개한 후, 근육층을 1 centimeter 절개합니다. 절개 부위 바로 아래에 있는 노

pre-clinical-orthotopic-murine-model-of-human-prostate-cancer

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

방광 종양은 catheterization, 지역 소작하고, 화상 사이트에 암종 세포의 후속 유착을 통해 법으로서 방식으로 여성의 생쥐에 설립되었습니다.

Murine 방광 암의 Orthotopic 모델

이 비디오에서는 전립선암 세포를 마우스 모델에 전립선 내 주사를 투여하는 절차를 보여줍니다. 정소성 쥐 모델은 비침습적이고 임상적으로 관련된 환경에서 질병의 기원과 치료 요법에 대한 반응을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

암세포의 전립선 내 주입: 정소성 전립선 암 마우스 모델을 확립하기 위한 암세포 전달 기술

쥐 전립선 암 모델에서 종양 침윤에 응고 된 혈장 단백질에 특정한 MRI 조영제를 대상으로 작은 펩티드와 암 MR 분자 이미징을 입증.

작은 분자 CLT1 펩타이드 표적 조영제와 전립선 암의 MR 분자 영상

인간의 전립선 암이 동 소성 모델에 폐 종양 세포와 구별 전이의 형성을 순환, 종양 크기의 정량을 허용한다. 세포가 일차 장기 탈출해야 같이, 혈류를 입력하고, 보조 사이트에 이식,이 모델은 인간에서 효과적으로 시나리오 되풀이되었습니다.

인간의 전립선 암 전이의 동소 쥐과 모델

이 원고는 순환 종양 세포(CTC)에서 전립선암 환자 유래 이종이식편(PDX)을 생성하는 데 사용되는 방법을 자세히 설명합니다. CTC에서 PDX 모델을 생성하면 전립선암을 연구하기 위한 대체 실험 모델을 제공합니다. 가장 흔하게 진단되는 종양이며 남성의 암으로 인한 사망 원인이 빈번합니다.

전립선 암 환자의 발생은 종양 세포를 순환에서 이종 이식 모델을 파생

이 원고는 실험실 쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세에 대한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 또한이 프로토콜에 의해 생성 된 대표적인 결과를 도시한다. 마지막으로, 우리는 장점과 이러한 프로토콜의 사용에 대해 설명합니다.

쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세

이 프로토콜은 암컷 C57BL / 6J 마우스의 종양 성장을 모니터링 뮤린 동소 방광 종양의 발생을 설명한다.

쥐 동소 이식 방광 종양 모델 및 종양 탐지 시스템

이 프로토콜의 목표 후속 거세와 전립선 암 세포의 내부 전립선 주사를 설명 하는 것입니다. 안 드로 겐 의존 및 거세 저항 전립선 암의 Orthotopic 전 임상 모델은 임상 관련 종양 microenvironment 및 immunocompetent 호스트의 컨텍스트에서 질병 연구에 중요 한.

발광 및 형광 Orthotopic Syngeneic Murine 모델 Androgen 종속 및 거세 내성 전립선 암

이 프로토콜 murine 전립선에 바이러스 배달 하는 새로 설립된 방법을 설명합니다. CRISPR/Cas9 기술, 유전자 overexpression 또는 Cre recombinase 배달 사용 하 여, 기술 유전자 발현의 orthotopic 변경 허용 하 고 전립선 암에 대 한 새로운 마우스 모델을 구현.

CRISPR의 바이러스 배달 Murine 전립선 유전자 변경에 대 한 가이드

유전자 조작된 생쥐 전립선 암 메커니즘을 조사를 위해 유용한 모델이 있습니다. 여기를 식별 하 고 마우스 비뇨 생식 기 시스템에서 전립선 엽 해 부, 조직학에 따라 구분 하 고 분리 다운스트림 분석에 대 한 spheroids로 기본 전립선 세포에는 생체 외에서 문화 프로토콜 선물이.

식별, 조직학 특성화 및 체 외 3D 회전 타원 체 문화 모델에 대 한 마우스 전립선 돌출부의 해 부

여기서, 본 발명자들은 골전이 병변이 있는 마우스 모델을 생성하기 위해 인간 전립선암 세포의 심장내 주사를 위한 프로토콜을 제시한다.

인간 전립선암 세포의 심장내 주사를 통해 뼈 전이 이종이식 마우스 모델 생성

학습하세요 인간 전립선암의 동소 이식 쥐 모델 수립 방법을 통해 종양 미세환경에서의 분자 상호작용과 전이 메커니즘을 연구하고 새로운 치료법을 평가할 수 있습니다.

인간의 전립선 암의 전 임상 동소 이식 쥐 모델

더 많은 동영상 탐색