Name: 수술 절제 분석 플라나리아에 아이 재생을 유학을위한 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 47 s
Description: 학습하세요 플라나리아 눈 수술 절제 기법을 통해 재생 생물학 및 신경과학 연구를 수행하는 방법을. 이 방법은 줄기세포 유지와 분화 메커니즘을 연구하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 기능 분석에 대한 지원이 눈 절제 기술, 테일러 Birkholz 완성을 위해 미셸 Deochand 감사의 말씀을, 펠티어 플레이트에 대한 자세한 내용은 안티 아레스 항체 마이클 레빈, 그리고 준지 Morokuma. 이 작품은 WSB에 웨스턴 미시간 대학에서 SFSA 교부금에 의해 지원되었다.

1. 동물 문화와 처리 참고 :이 프로토콜은 Schmidtea의 MEDITERRANEA, 일반적으로 재생 연구에 사용되는 시퀀스 게놈 (16), (17)와 이배체 플라나리아 종을 사용합니다. 그러나, 분석은 Girardia의 tigrina 및 Girardia의 dorotocephala (이 상업적으로 사용할 수있는)와 같은 다른 종과 동등하게 성공적이다. <ol><li> 초순수 (또는 여과 탈) 물에 0.5 g / L의 바다 염으로 만든 &quot;웜 물&quot;웜을 유지한다. 웜 물을 유지하기 위해 멸균 폴리 프로필렌 또는 유리 용기를 사용합니다. 참조 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55594/Supplementary_File_1.docx" target="_blank">보충 파일 1</a> 웜 물 준비에 대한 자세한 내용을. 참고 : 비누와 같은 용기 (또는 기타 소모품) 청소 비누를 사용하지 마십시오 벌레에 독성; 대신 70 % 에탄올로 닦아 자연 건조 할 수 있습니다. &lt;OL&gt; <li> 오염으로부터 보호하기 위해 planaria와 함께 작업하는 동안 장갑을 착용 할 것. 참고 : 웜은 비누, 표백제, 샴푸, 컨디셔너, 핸드 로션을 포함한 환경 독소와 화학 물질에 매우 민감하다. </li></ol></li><li> 뚜껑 프로필렌 식품 용기 하우스 콜로니 ~ 20 ℃ (실온)에서의 공기 교환을 위해 부분적으로 열려. 페트리 접시에 보관하거나 실험 웜 (100mm의 접시 당 20 개 벌레) 또는 비 처리 된 조직 배양 플레이트 (12- 웰 플레이트 웰 당 1 개 웜). 스트레스를 줄일 어둠 속에서 모두 식민지와 실험을 계속합니다. 참고 : 식민지가 웜 물 리터 당 최대 500 ~ 1,000 이상의 웜이 있어야합니다. 공기 흐름이 이러한 요리로 설계되어 있기 때문에 실험을 위해, 완전히 자리에 뚜껑을 둡니다. </li><li> , 전송 피펫에서 퓌레를 삭제 컨테이너에 걸쳐 음식의 방울을 배치하여 퓌레 유기 쇠고기 또는 닭고기 간장과 일주일에 한 번이 아닌 실험 벌레 피드. 에서 음식을 소비하는 웜 2 시간 허용용기를 청소하기 전에 어두운 (단계 1.4 참조). 장기 (개월)에 대한 C °, 매장 단기 (주)에 대한 -20 ° C에서 퓌레 또는 -80 사용하기 전에; (박테리아가 꽃과 벌레에 문제를 야기 할 수 있습니다로) 다시 사용하기 위해 퓌레를 재 냉동하지 않습니다. 참고 : 간 더 호르몬이나 항생제를 포함되어야 바람직 이전에 냉동 수 없습니다. 원심 분리기로 이전 냉동 퓨레 (또는 이전에 공급)은 공기를 제거하고 유동에서 음식을 방지 할 수있다. 식품 용기의 바닥에 침몰한다. 퓌레 1 ㎖는 500-1,000 웜 충분하다. </li><li> 식민지와 실험을 모두 신선한 웜 물을 일주일에 한 번 교환. 콜로니 용기도 표백 종이 타월로 닦여한다 (점액 잔류 물을 제거하기 위해 포획 폐기물) (공급하고 다시 2 일 후 2 시간 후에) 공급 웜 회 주 웜 배고파 또는 일주일 번. 바이오 필름을 유지하기 위해, 컨테이너의 80 % 이상을 닦지 마십시오. </li><li> 용기 (또는 수술 세투 사이에 벌레를 이동P) 반송 피펫을 사용. 용기 표면에 부착 된 무료 웜에, 표면에서 분리 웜 뒤에 /를 통해 물을 분출. 피펫의 바닥 인치 (얇은) ​​부분에서 벌레를 유지하는 동안 그런 다음, 피펫에 벌레를 빨아. <ol><li> 그들을 빨아 전에 웜 소량의 물과 Backload 피펫. </li><li> 피펫으로 터치하여 부드러운 바디 웜을 찢어 방지하기 위해, 오히려 웜 자체보다, 웜 주위에 물을 이동하려고합니다. </li><li> 웜을 전송하거나 물을 교체하지 않는 한 덮여 실험적인 요리를 유지합니다. </li></ol></li></ol> 2. 준비 <ol><li> 이전 실험에 벌레에게 최소 1 주일 공급 중지합니다. <ol><li> ≥1 주 동안 공급과 길이가 적어도 5-7mm입니다하지 된 웜을 선택합니다. 웜 물이 가득 페트리 접시 2/3로 웜을 전송하고, 접시 아래 통치자를 밀어 웜의 길이를 확인합니다. 승 측정ORMS는 동안 완전히 확장 및 이동. 참고 : 다음 면역 및 현장 하이브리드 분석에 큰 벌레 (8-10mm)를 수행하는 작업을 쉽게 할 때 작은 (5~7mm) 웜이 더 잘 작동하는 동안 - 특히 브레이션 학습. </li><li> 웜, 전체 손상되지 않은, 최근 재생하지 있는지 확인합니다. 참고 : 일반 웜에 비해 재생성 벌레는 머리와 / 또는 꼬리 지역에서 훨씬 가볍고 (또는) 안료를해야합니다. </li><li> 웜에 RNAi의 또는 약물 치료를 수행하는 경우,이 시점에서 그렇게. 벌레는 처리 (RNAi를위한 등)의 일부로서 공급 된 경우, 2.2 단계로 진행하기 전에 7 일 이상 지난 후에 공급 기다린다. </li></ol></li><li> 70 % 에탄올로 작업 공간 및 해부 현미경 기반을 청소하고 완전히 건조 할 수 있습니다. 범위의 좌측에있는 선택 벌레의 접시를 놓습니다. 범위의 오른쪽 16분의 5 인치 인슐린 바늘 1과 # 5 포셉 한 쌍의 31 G 배치ml 주사기, 깨끗한 전송 피펫. <ol><li> 악기가 벤치를 (오염 물질을 소개 할 수있는)에 접촉 유지되어 있는지 확인합니다. 깨끗한 포셉, 바늘과 피펫을 유지하기 위해 (예 : 젓가락 받침대로) 단단한 항목을 사용합니다. 또한, 신선한 브라운 (표백) 종이 타월 위에 자리 악기. 주 :이 오른 손잡이 개인과 관련된 이러한 후속 지침이 기록됩니다. 왼손잡이 개인은 좌 / 우 방향을 반대로한다. </li></ol></li><li> 다음 작업 공간에 보풀이없는 조직 와이프의 상자, 신선한 웜 물 소스, 그리고 (벤치 위에서 보호) 몇 가지 추가 전송 피펫을 배치합니다. 분배의 편의를 위해 플라스틱 세척 병에 넣어 웜 물. 또한, 절제된 동물을 수집하는 범위의 오른쪽에 표지 된 12 웰 플레이트 (또는 100mm 배양 접시)를 배치했다. </li><li> 주문품 펠티어 플레이트를 이용하여 웜을 고정하는 경우, t의 우울증에 펠티에 판 위치그는 해부 현미경의베이스와 펠티어 플레이트의 작업 표면이 충분히 냉각 될 때까지 DC 전원의 출력을 조정합니다 (일반적으로 5 ~ V) .Alternatively, ½ 물을 가득 100mm 배양 접시를 작성하여 냉각 판을 적어도 24 시간 동안 동결. 뚜껑을 폐기하고 해부의베이스에 100mm 접시의 바닥에 배치 한 다음 얼음 (도 1a)의 표면에 직접 거꾸로 60mm 페트리 접시에 뚜껑을 배치했다. <ol><li> 물이 100mm 접시에 냉동 후, 얼음의 &quot;화산&quot;판의 중심에 나타날 수 있습니다. 이 경우, 표면에서 어떤 부정을 제거하기 위해, 얼음 평면을 긁어 면도날을 사용합니다. 참고 : 수술 중 얼음이 녹아 훨씬 더 어려운 절제를 만드는 것입니다. 사전에 여러 얼음 요리를 준비하고, 즉시 60mm 접시의 뚜껑을 떠 시작으로 분석하는 동안 사람을 용해하기위한 냉동 사람을 대체합니다. </li></ol></li><li> 준비합니다수술면. 파라핀 플라스틱 필름의 5cm X 10cm 조각 컷 (4cm 2 경우 페트리 접시 콜드 플레이트를 사용) 및 고정 장치의 중앙에 배치. 보풀이없는 조직을 접어 사각형 약 2cm 2로 닦아 필름 위에 놓습니다. 백색 여과지의 1.5 cm (2)의 일부를 잘라 와이프의 위에 배치. 그림 1B-1E를 참조하십시오. <ol><li> 접힌 상태에서 장갑을 낀 손가락으로 장소에 닦아 가볍게 그것이 접힌 상태를 유지하도록 닦아 저해 할 웜 물을 사용합니다. (가) 평면 닦아 롤 전송 피펫의 측면을 사용합니다. 참고 : 차가운 온도는 움직이는 벌레를 유지하는 데 도움이됩니다. 작업 &quot;건조&quot;도 고정에 도움이됩니다. 티슈는 웜 (치명적이다)이 완전히 건조 될 수없는 수술 중에 습기 웜 유지 여과지를 통해 물을 빨아들이도록 작용 와이프. </li></ol></li></ol> 3. 수술 절제 <ol><li> 에 배치하는 전송 피펫을 사용하여여과지 상 E 웜 등쪽까지. 에 광원을 켜고 빛이 웜에 집중되도록 구즈넥을 지시. 눈 (전체 웜이보기에있을 필요가 없습니다) 명확하게 볼 수 있도록 해부 범위 초점 및 배율을 조정; 5 배 확대는 좋은 출발점이 될 것입니다. 헤드 (현미경의 전방) 연구자 향해 지적되도록 오른쪽으로 각진 30-40 도의 파라핀 필름을 회전시켜 방향을 웜. <ol><li> 초과 웜의 움직임을 방지하기 위해 밝은 빛의 사용을 피하십시오. 플라나리아는 부정 phototaxis를 표시하고 밝은 빛을 회피하려고 시도합니다. </li><li> 이 웜 (인두 볼 개방으로) 위로 향하게 복부 측에 위치하는 경우, 부드럽게 (눈에 보이는) 웜 등쪽을 재배치 나이프의 무딘면을 사용한다. 동물을 재배치 할 때 부드러운 조직을 통해 찢어 가능성을 최소화하기 위해 포셉의 날카로운 팁 동물에 접근하지 마십시오. </li><li&gt; 눈의 초점이 명확하게되도록 현미경의 초점을 조정합니다. 또한 눈과 주변의 머리 조직 모두가보기에 있는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 이 (엄지와 검지 손가락 사이) 펜 것처럼 오른손에 신선한 바늘 / 주사기를 잡습니다. 펠티어 플레이트 (또는 페트리 접시 냉각 판)에 대한 좌측 엄지 손가락을 꽉 및 주사기의 저부 쉬게되는 지점에서 (도 2a)로 왼쪽 엄지 손가락을 사용한다. 현미경을 통해 봐, 바늘의 베벨을 볼 수 있는지 확인합니다. 참고 : 바늘은 매우 날카로운입니다. 를 취급 할 때주의하십시오. 라텍스 또는 니트릴 장갑을 착용하는 것은 몇 가지 보호 기능을 제공 할 수 있습니다. <ol><li> 절차 전반에 걸쳐 지속적으로 바늘 / 주사기를 유지하는 데 도움과 악수를 피하기 위해 왼쪽 엄지 손가락을 사용합니다. </li><li> 수술 표면 안정된를 유지하기 위해 왼쪽 엄지와 (수술 표면에 검지 손가락으로) 왼쪽 검지 손가락으로 약 40 °의 각도를 확인합니다. </li></ol></li><li> 와(스푼처럼) 위로 향하게 바늘의 베벨 눈 (도 2B)에 직각으로 니들의 위치. 부드럽게 오른쪽에서 왼쪽으로 떠서, 눈의 광학 컵 (백색 착색 영역) 위에있는 조직의 얇은 층을 관통하는 바늘의 끝을 사용한다. 아주 조심스럽게 바닥에 구멍 또는 광학 컵의 경계를 파괴 않도록주의하면서, 광학 컵 내에있는 모든 착색 된 조직을 제거합니다. <ol><li> 웜이 절차를 수행하는 동안 어느 시점에서&gt; 1-2 분 동안 필터 종이 된 경우, 웜을 재수하는 웜의 물 한 방울을 추가합니다. 참고 : 탈수 리핑 부상 웜의 감수성을 증가시킬 것이다. </li></ol></li><li> 반복 검은 색소 조직 (색소 세포)의 모든 때까지 단계 3.3뿐만 아니라, 광학 컵 (광 수용체 세포의 수상 돌기)의 흰색 조직의 모든 등이 제거된다. 주의 깊게 조직 닦아에게로 닦아 바늘의 끝 부분에 붙어 절제 조직을 제거합니다. 이중 눈 abla하는 경우능을 원하는 시점에서 상기 제 눈 브레이션된다. 참고 : 부상을 방지하려면, 바늘은 다음 닦아 멀리 엄지 손가락과 집게 손가락에서 통해 바늘을 끌어 다른 손을 사용하여 엄지 손가락과 집게 손가락 개최 닦아 깨끗한 티슈로 바늘을 잡고 세척 할 수 있습니다. 대안으로, 니들은 웨트 티슈 와이프의 표면에 와이 핑과 청결을 조사 할 수있다. </li><li> 완료되면, 신선한 웜 물을 포함하는 라벨이 접시에 벌레를 이동하는 전송 피펫을 사용합니다. 그룹 데이터를 분석하면, 하나의 100mm 배양 접시에 20 개 벌레까지 놓습니다. 시간이 지남에 따라 같은 개인의 재생을 추적하는 경우, 12 웰 플레이트의 각 웰에 1 개 웜을 배치합니다. 모든 벌레가 전송되면, 요리 / 우물에서 모든 웜 물을 제거하고 더 신선한 웜 물로 대체하여 벌레를 씻어. <ol><li> 필터로부터 웜을 제거하고, 웜 소량의 물로 피펫 backload 웜에 물을 방출. 이 t 올리한다여과지 오프 그는 웜은 즉시 전송 피펫에 흡입된다. </li></ol></li><li> 빛으로부터 보호 ~ 20 ℃ (실온)에서의 실험을 부화 회생 방법을 따른다. 주 : 웜 일정한 온도를 유지하는 온도 조절 배양기에 저장 될 수 있지만, 이것은 반드시 필요한 것은 아니다. 대부분의 실내 온도는 재생하는 웜의 기능에 영향을 미치지 않습니다 +5 ° C를 만 다릅니다. </li><li> 원한다면, 면역 용 웜 (도 3-4 참조) 및 / 또는 계내 혼성화는 유전자 발현 분석하여 고정한다. 다른 정착 방법은 면역 플라나리아 18, 19, 20 및 계내 혼성화 (21, 22), (23 개)의 프로토콜에 존재한다. </li><li> 실험이 체결되어, sacrifiCE는 접시에서 웜 물을 제거하고 70 % 에탄올로 대체하여 웜을 살고 있습니다. 용균 및 칙칙한 우회전 웜 검사 3-5 분 동안 인큐베이션 웜. </li><li> 한 번 희생 일반 폐기물의 처리하지 않은 벌레를 놓습니다. 환경, 특히 외래종에 살아있는 벌레를 도입하지 마십시오. </li></ol>

<ol><li>Gentile, L., Cebria, F., Bartscherer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+planarian+flatworm%3A+an+in+vivo+model+for+stem+cell+biology+and+nervous+system+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">The planarian flatworm: an in vivo model for stem cell biology and nervous system regeneration.</a> Dis Model Mech. 4 (1), 12-19 (2011).</li>
<li>Elliott, S. A., Sanchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+history+and+enduring+contributions+of+planarians+to+the+study+of+animal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The history and enduring contributions of planarians to the study of animal regeneration.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2 (3), 301-326 (2013).</li>
<li>Emili Saló, R. B. Chapter 3. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEmili+Sal%C3%B3%2C+RB+%22Animal+Models+in+Eye+Research%22">Animal Models in Eye Research</a>. Tsonis, P. A. , Academic Press. 15-26 (2008).</li>
<li>Lapan, S. W., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((dlx+and+sp6-9+Control+optic+cup+regeneration+in+a+prototypic+eye%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">dlx and sp6-9 Control optic cup regeneration in a prototypic eye.</a> PLoS Genet. 7 (8), e1002226(2011).</li>
<li>Lapan, S. W., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+analysis+of+the+planarian+eye+identifies+ovo+as+a+specific+regulator+of+eye+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Transcriptome analysis of the planarian eye identifies ovo as a specific regulator of eye regeneration.</a> Cell Rep. 2 (2), 294-307 (2012).</li>
<li>Inoue, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+functional+recovery+of+the+planarian+photosensing+system+during+head+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Zoolog+Sci%22%5BJournal%5D)">Morphological and functional recovery of the planarian photosensing system during head regeneration.</a> Zoolog Sci. 21 (3), 275-283 (2004).</li>
<li>Pineda, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetic+network+of+prototypic+planarian+eye+regeneration+is+Pax6+independent%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The genetic network of prototypic planarian eye regeneration is Pax6 independent.</a> Development. 129 (6), 1423-1434 (2002).</li>
<li>Paskin, T. R., Jellies, J., Bacher, J., Beane, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planarian+Phototactic+Assay+Reveals+Differential+Behavioral+Responses+Based+on+Wavelength%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Planarian Phototactic Assay Reveals Differential Behavioral Responses Based on Wavelength.</a> PLoS One. 9 (12), e114708(2014).</li>
<li>Raffa, R. B., Martley, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphetamine-induced+increase+in+planarian+locomotor+activity+and+block+by+UV+light%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Amphetamine-induced increase in planarian locomotor activity and block by UV light.</a> Brain Res. 1031 (1), 138-140 (2005).</li>
<li>Sandmann, T., Vogg, M. C., Owlarn, S., Boutros, M., Bartscherer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+head-regeneration+transcriptome+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">The head-regeneration transcriptome of the planarian Schmidtea mediterranea.</a> Genome Biol. 12 (8), R76(2011).</li>
<li>Vasquez-Doorman, C., Petersen, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+NuRD+complex+component+p66+suppresses+photoreceptor+neuron+regeneration+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Regeneration+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">The NuRD complex component p66 suppresses photoreceptor neuron regeneration in planarians.</a> Regeneration (Oxf). 3 (3), 168-178 (2016).</li>
<li>Deochand, M. E., Birkholz, T. R., Beane, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+regulation+of+planarian+eye+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Regeneration%22%5BJournal%5D)">Temporal regulation of planarian eye regeneration.</a> Regeneration. 3 (4), 209-221 (2016).</li>
<li>Sakai, F., Agata, K., Orii, H., Watanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+and+regeneration+ability+of+spontaneous+supernumerary+eyes+in+planarians+-eye+regeneration+field+and+pathway+selection+by+optic+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Zoolog+Sci%22%5BJournal%5D)">Organization and regeneration ability of spontaneous supernumerary eyes in planarians -eye regeneration field and pathway selection by optic nerves.</a> Zoolog Sci. 17 (3), 375-381 (2000).</li>
<li>Asano, Y., Nakamura, S., Ishida, S., Azuma, K., Shinozawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhodopsin-like+proteins+in+planarian+eye+and+auricle%3A+detection+and+functional+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Rhodopsin-like proteins in planarian eye and auricle: detection and functional analysis.</a> J Exp Biol. 201 (Pt 9), 1263-1271 (1998).</li>
<li>Cross, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Maintenance+and+Regeneration+of+Planarian+Eyes+by+ovo%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Control of Maintenance and Regeneration of Planarian Eyes by ovo.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (12), 7604-7610 (2015).</li>
<li>Robb, S. M., Gotting, K., Ross, E., Sanchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SmedGD+2.0%3A+The+Schmidtea+mediterranea+genome+database%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">SmedGD 2.0: The Schmidtea mediterranea genome database.</a> Genesis. 53 (8), 535-546 (2015).</li>
<li>Robb, S. M., Ross, E., Sanchez Alvarado,, A, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SmedGD%3A+the+Schmidtea+mediterranea+genome+database%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">SmedGD: the Schmidtea mediterranea genome database.</a> Nucleic Acids Res. 36, D599-D606 (2008).</li>
<li>Beane, W. S., Tseng, A. S., Morokuma, J., Lemire, J. M., Levin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+planar+cell+polarity+extends+neural+growth+during+regeneration%2C+homeostasis%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Inhibition of planar cell polarity extends neural growth during regeneration, homeostasis, and development.</a> Stem Cells Dev. 21 (12), 2085-2094 (2012).</li>
<li>Forsthoefel, D. J., Waters, F. A., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+cell+type-specific+monoclonal+antibodies+for+the+planarian+and+optimization+of+sample+processing+for+immunolabeling%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of cell type-specific monoclonal antibodies for the planarian and optimization of sample processing for immunolabeling.</a> BMC Dev Biol. 14, 45(2014).</li>
<li>Ross, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+monoclonal+antibodies+to+study+tissue+regeneration+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel monoclonal antibodies to study tissue regeneration in planarians.</a> BMC Dev Biol. 15, 2(2015).</li>
<li>Cardona, A., Fernandez, J., Solana, J., Romero, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+situ+hybridization+protocol+for+planarian+embryos%3A+monitoring+myosin+heavy+chain+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">An in situ hybridization protocol for planarian embryos: monitoring myosin heavy chain gene expression.</a> Dev Genes Evol. 215 (9), 482-488 (2005).</li>
<li>King, R. S., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization+protocol+for+enhanced+detection+of+gene+expression+in+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization protocol for enhanced detection of gene expression in the planarian Schmidtea mediterranea.</a> BMC Dev Biol. 13, 8(2013).</li>
<li>Pearson, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde-based+whole-mount+in+situ+hybridization+method+for+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde-based whole-mount in situ hybridization method for planarians.</a> Dev Dyn. 238 (2), 443-450 (2009).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

이것은 눈 박리 방법은 뇌 조직을 제외하고, 안구 조직에 주로 절단을 제한함으로써 (예컨대 펀치 구멍 등) 현재의 방법을 개선한다. 기술자 경험이 있지만 양심적 학부 학생들에게 microsurgeries 경험에서 연습으로,이 기술은, 대부분의 개인에 의해 수행 될 수있다. 이 기법은 이전에 면역하거나 눈 마커 (들) (4, 5), (13) 계내 혼성화 모든 눈 조직을 완전히 제거 (수)의 확인을 포함하여, 실험에 절제를 사용하여 여러 차례 실시하는 것이 권장된다. 이 프로토콜에서 가장 중요한 단계는 조직의 밖으로 떠 서입니다. 너무 많이 또는 너무 적게하거나 조직을 제거하지 않는 것이 중요하다. 이 웜의 복부 측면에 관통 방지하기 위해 바늘로 너무 깊게 떠서하지 않음으로써 피할 수 있습니다. 니의 끝DLE는 약 0.4 mm 깊이 ...

플라나리아는 성체 줄기 세포 매개 재생 연구를위한 강력한 모델 생물이다. 이 비 기생 담수 편형 동물은 중추 신경계와 뇌의 1을 포함한 모든없는 조직을 재생하는 능력을 가지고있다. (계내 혼성화, 면역 조직 화학, RNA 간섭 (RNAi의) 및 transcriptomics, 이러한 시퀀스 게놈 등)까지 거슬러 과거 10-15 년간 플라나리아 필드 1700 2, 기술적 진보로서 전공이 과거 모델 생물을 업데이트 한 . 특히, 플라나리아는 최근 눈 연구 3에 대한 새로운 모델로 인기를 얻고있다. 플라나리아는 두 조직 유형, 광 수용체 신경 세포와 색소 세포의 전형 눈을 가지고; 이는 눈 줄기 세포 인구의 특성을 활성화하고 동일한 유전자의 많은 척추 동물의 눈 드를 조절 것을 보여 주었다velopment은 플라나리아 4, 5에 보존되어있다. 시신경 컵 등쪽에 위치하고 있으며 광 수용체 뉴런의 흰색, 착색 수상 돌기 및 반 달 검은 색소 세포 구성하고, 눈은 광학 chiasm 통해 뇌에 분포되어있다. 재생 공정 6을 해명하기위한 모델 것에 더하여, 플라나리아 눈 시각기구 (7)의 진화 연구에 적합하고, 행동 반응은 광 (8)과 동작 (9)의 신경 기초 (플라나리아 마이너스 phototaxis 표시). 플라나리아 안구 재생성은 크게 두 가지 상황에서 연구되었다 : 재생 헤드의 일부가 잘린 (4), (10) 아래, 바로 눈 조직의 적출 (11)는 다음과 같이 12 </&gt; SUP. 이 단순하고 간단 그대로 눈의 재생에 대부분의 플라나리아 연구는 잘린 방법을 사용했다. 일부 연구는 단지 눈 (잘린 부분) (15) 뒤에 절단을 수행하고 있지만 현재까지 가장 흔한 플라나리아 눈 절단 방법은, 미세 유리 모세관 튜브 (13), (14)와 펀치 구멍을 통해왔다. 그러나, 이러한 방법의 모든 잠재적 결과의 해석을 복잡하게, (뇌, 내장, 그리고 nephridia 등) 만 눈이 아닌 다른 많은 조직의 손실을 포함한다. 여기에 제시된 눈 박리 프로토콜 눈에 더 구체적인 데이터의 결과 (특히 뇌 제외) 안구 조직에 절제를 제한한다. 또한, 공급 시작 7-14 일이 소요될 참수 웜 달리 눈 절제 웜 performe 될 (RNAi의 음식을 통해 제공되는)의 RNAi 실험을 가능하게 박리 (12)의 24 시간 이내에 사료 것d를 동시에. 눈 절제가 성공적으로 잘린 것보다 수행 할 기술적으로 어렵게하지만, 눈 절제술을 포함하는 현재의 연구는 그 절차에 대한 자세한 지침을 포함하지 않았습니다. 이 비디오 문서의 목적은 지속적으로 기본 뇌 조직을 방해하고 가능한 한 적은 수의 다른 조직을 제거하지 않고 플라나리아 광학 컵을 제거하기 위해 연구자 수 있도록하는 것입니다. 이 방법은 단일 및 이중 눈 제거에 사용 및 조사의 넓은 범위에 적용 할 수 있습니다. 가장 재생 분석처럼 눈 박리 잘 약리 유전 (RNAi의) 스크린뿐만 아니라 행동 연구 모두의 조합에 적합하다. 여기에서는, 웜의 취급 방법을 기술 플라나리아 콜로니를 유지하고, 눈 박리 법 자체.

<table><tbody><tr><td>인스턴트 오션 바다 소금</td><td>스펙트럼 브랜드&nbsp;</td><td>SS15-10</td><td>"10 갤런" 상자&nbsp; (순중량 3 파운드)</td></tr><tr><td>Kimwipes EX-L 린트-프리 티슈 와이프</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td>4.5 x 8.5 인치&nbsp;</td></tr><tr><td>Whatman #2 여과지</td><td>시그마&nbsp;</td><td>WHA1002125</td><td>Circles, 125 mm 직경, 흰색</td></tr><tr><td>Easy Touch 인슐린 주사기 (바늘 포함)</td> <td>Pet Health Market</td><td>17175-04</td><td>&nbsp; U-100 1 cc 주사기, 31 G 5/16 인치 바늘</td></tr><tr><td>100 mm 페트리 디쉬</td><td>VWR</td><td>25384-342</td><td>100 mm x 15 mm</td></tr><tr><td>60 mm 페트리 디쉬</td><td>VWR</td><td>25384-092</td><td>60 mm x 15 mm</td></tr><tr><td>Dumont #5&nbsp; 펜치&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>Inox, 직선 팁, 11cm</td></tr><tr><td>트랜스퍼 피펫&nbsp;</td><td>샘코 사이언티픽&nbsp;</td><td>225</td><td>눈금, 큰 전구, 7.5 mL, 비멸균</td></tr><tr><td>Parafilm M 파라핀 필름</td><td>브랜드&nbsp;</td><td>701606</td><td>&nbsp; 4 인치 x 125 피트 롤</td></tr><tr><td>12-웰 미처리 조직 배양 플레이트</td><td>VWR</td><td>15705-059</td><td>미처리, 평평한 바닥, 멸균, 팔콘 브랜드</td></tr><tr><td>플라스틱 식품 용기 (콜로니용)&nbsp;</td><td>Ziploc</td><td>대형 직사각형</td><td>2.25 qt (2.12 L), 10" x 6 -3/4 " x 3 -3/16"&nbsp;</td></tr><tr><td>플라나리아 (Girardia tigrina)</td><td>Carolina Biological</td><td>132954</td><td>"갈색" 플라나리아로 판매되며, 대부분은 G. tigrina (일명 Dugesia tigrina)이지만, 가끔은 G. dorotocephala (aka Dugesia dorotocephala)입니다. 둘 다 작동합니다.</td></tr><tr><td>플라나리아(Schmidtea mediterranea)</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>S. mediterranea은 상업적으로 이용할 수 없습니다. 현재 동물은 동물을 사용하고 여분의 동물을 키우는 실험실에서만 얻을 수 있습니다.</td></tr><tr><td>갈색 종이 타월&nbsp;</td><td>Grainger</td><td>2U229</td><td>9-3/16 x 9-3/8" 1-Ply Multifold 종이 타월, 표백되지 않은</td></tr><tr><td>세척 병(지렁이물용), 옵션</td><td>VWR</td><td>16650-275</td><td>세척 병, 저밀도 폴리에틸렌, 넓은 입, 500mL</td></tr><tr><td>항 시냅신 항체, 선택 사항</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td>3C11</td><td>상등액</td></tr><tr><td>Anti-arrestin 항체, 선택 사항</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>상업적으로 이용할 수 없습니다. 터프츠 대학교의 마이클 레빈이 준 친절한 선물</td></tr><tr><td>Nalgene Lowboy 카보이 (지렁이 물 저장용), 선택적</td><td>Nalge Nunc International Corporation</td><td>2324-0015</td><td>15 L,&nbsp; 폴리프로필렌, 로우 프로파일로 플라스틱 콜로니 용기를 채우기 쉽게 해줍니다&nbsp;</td></tr><tr><td>맞춤형 펠티에 플레이트, 선택적</td><td>윌리엄스 머신, 폭스보로, 매사추세츠&nbsp;</td><td>해당 사항 없음</td>: <td>Junji Morokuma, Tufts University:&nbsp; 펠티에 플레이트는 표준 열전 히트 펌프로 구성됩니다 (예: All Electronics Corp 카탈로그 # PJT-1, 30 mm2).&nbsp; 정사각형 열 펌프는 얇은 거울 표면으로 덮인 다음 원형 플렉시 유리 형태(직경 ~50mm)의 30mm2 정사각형 구멍 내부에 배치됩니다. 이 형태는 히트 펌프와 두께가 비슷하며 원형 방열판 (직경 ~ 115mm)의 중앙에 툴링 된 우물에 플러시로 맞습니다. 형태/히트 펌프는&nbsp; 실리콘 베이스 방열판 화합물로 싱크대에 "고정"됩니다. 리드는 형태와 방열판을 통해 뚫린 구멍을 통해 나사산으로 연결됩니다. 방열판의 아래쪽 절반은 현미경의 베이스 플레이트 개구부에 맞는 "발"로 공구화되어 있습니다.</td></tr><tr><td>DC 전원(펠티에 플레이트용), B 및 옵션</td><td>; K Precision</td><td>1665</td><td>레귤레이트 저전압 DC 전원 공급 장치, 1-18V(DC), 1-10암페어.</td></tr><tr><td>기타 일반적인 용품</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>장갑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>면도날&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>구즈넥 조명이</td><td></td><td></td><td></td>있는 해부 스코프</tr><tr><td>젓가락 받침대, 선택 사항</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

수술 절제 분석 플라나리아에 아이 재생을 유학을위한

Surgical Ablation Assay for Studying Eye Regeneration in Planarians

성체 줄기 세포 및 재생 메커니즘의 연구에서, 플라나리아 편형 동물은 생체 내 모델 시스템의 주식입니다. 이것은 그들의 풍부한 만능 줄기 세포 인구와 대부분의 동물에 대한 재앙이 될 것입니다 부상 후 모든 세포와 조직 유형을 재생하는 능력에 상당 부분 기인한다. 최근, 플라나리아는 눈 재생의 모델로 인기를 얻고있다. (두 조직 유형으로 구성 : 색소 세포 감광체) 전체에 눈을 재생하는 능력이 재생 시각 ​​시스템을 조절 메커니즘의 절개 허용한다. 눈 박리는 재생 만 크게 눈 조직에 한정된다 가장 중요한있는 눈 특정 경로 및 메커니즘을 조사하는 (예 잘린 또는 펀치 구멍 등의) 다른 기술에 비해 몇 가지 장점이있다. 이 비디오 문서의 목적은 확실하게 뇌를 방해하거나 주변 조직없이 플라나리아 광학 컵을 제거하는 방법을 설명하는 것입니다.웜 확립 콜로니의 유지 보수 처리도 설명된다. 이 기술은 수술 콜드 플레이트에 고정화 플라나리아의 광학 컵을 특종 31 G, 16분의 5 인치 인슐린 바늘을 이용한다. 이 방법은 다양한 애플리케이션을 가능하게 1 ~ 2 주 이내에 재생 눈으로, 단일 및 이중 눈 절제를 포함한다. 특히,이 절제 기술은 쉽게 재생 메커니즘과 진화, 눈 줄기 세포와 그 유지 보수 및 phototaxic 행동 반응과 신경 학적 기초의 더 나은 이해를위한 약물 및 유전자 (RNA 간섭) 화면과 결합 될 수있다.

처음 1 ~ 2 시간 후 수술을 위해, 동물은 그대로 웜 (그러나 그들은 여전히 ​​이동합니다)에 비해 움직임을 감소 발생할 수 있습니다. 원하는 경우, 웜 (RNAi의 공급을 위해, 예를 들어) 수술 24 시간 이내에 먹을 것이다. 시간이 지남에 따라 같은 개인의 눈의 재생을 다음과 같은 경우 모두 수술 전에 (그대로)과 1 시간 후 절제 (고전력 증폭기)에서 각 웜의 사진을해야합니다. 사일 포스트 어블 (DPA)에 의해 재생 색소 세포를 표시하고, (14) 전체에 눈이 완전히 재생 된 것이다 DPA (도 3A-B)를 기준으로한다. 이것은 감광체 신경 및 뇌 (도 3c)에 그들의 신경 분포뿐만 아니라 시각 시스템 (도 4A-C)의 기능 회복을 포함한다. 성공적인 절제 뇌 (그림 4D-E)의 기본 조직을 방해,도 동물 (그림 5A)에<...

이 프로토콜은 지속적으로 주변 조직을 방해하지 않고 플라나리아의 눈 (광학 컵)을 절제하는 방법을 보여줍니다. 어느 하나의 인슐린 바늘 및 주사기를 사용 또는 양쪽 눈은 눈의 재생, 영상 재생의 진화, 및 광 - 유도 행동 신경 기초 규제기구에 조사를 용이하게 절제 할 수있다.

In the study of adult stem cells and regenerative mechanisms, planarian flatworms are a staple in vivo model system. This is due in large part to their ...

이 절차의 전반적인 목적은 뇌나 주변 조직을 손상시키지 않고 플라나리아의 안배(optic cup)를 안정적으로 제거하는 방법을 시연하여, 모든 교육 단계의 연구자와 학생들이 이 기술을 구현할 수 있도록 하는 것입니다. 이 방법은 생체 내(in vivo)에서 내인성 안구 줄기세포의 유지 및 분화를 조절하는 메커니즘을 결정하는 것과 같이, 재생 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다른 조직의 간섭을 최소화하면서 안구 조직만을 제거할 수 있다는 점입니다.일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 사용자가 주변 조직의 절제를 피하면서 안구 전체를 절제하여 정확한 양의 조직을 안정적으로 제거하려면 충분한 연습이 필요합니다. 우선, 최소 일주일 동안 먹이를 주지 않았으며 길이가 최소 5~7 mm인 벌레를 선택하십시오. 웜 워터(worm water)가 3분의 2 정도 채워진 100 mm 페트리 접시에 15~30마리의 벌레를 옮긴 후 즉시 덮개를 닫으십시오.벌레의 머리나 꼬리가 하얗게 변하는 등 조직의 결손이나 탈색 여부를 관찰하여, 손상이 없으며 최근에 재생 중인 상태가 아님을 확인하십시오. 먼저, 작업 공간과 해부 현미경 베이스를 70% ethanol 용액으로 닦아낸 후 완전히 건조시키십시오. 선택한 벌레가 들어 있는 디쉬를 현미경 왼쪽에 놓으십시오.그 다음, 현미경 오른쪽에 5번 포셉 한 쌍, 1 mL 주사기가 장착된 31게이지 5/16인치 인슐린 바늘, 깨끗한 전송 피펫, 그리고 절제된 벌레를 수집하기 위한 라벨이 부착된 12-웰 플레이트를 배치합니다. 수술 중에 쉽게 사용할 수 있도록 보풀 없는 티슈 와이프 한 상자, 신선한 벌레 배양액(worm water)이 담긴 플라스틱 세척병, 그리고 추가 전송 피펫을 배치합니다. 해부 현미경 베이스 중앙에 펠티어 플레이트를 배치하고, DC 전원 장치의 출력을 설정하여 펠티어 플레이트 표면이 벌레를 고정시키기에 충분히 차가워지도록 합니다.또는 펠티어 플레이트(Peltier plate) 대신 얼음을 채운 페트리 접시를 사용할 수 있습니다. 수술 표면을 준비하려면, 먼저 5 cm x 10 cm 크기의 플라스틱 파라핀 필름을 잘라 펠티어 플레이트 중앙에 놓습니다. 그다음, 먼지가 나지 않는 티슈 와이프를 약 2 cm 크기의 정사각형으로 접어 필름 위에 올립니다.그런 다음, 접은 와이프를 제자리에 고정하고 벌레 용수(worm water)로 적신 후, 전이 피펫을 이용해 와이프를 평평하게 밉니다. 마지막으로 1.5~2cm² 크기의 흰색 거름종이를 잘라 와이프 위에 올립니다. 수술을 시작하려면 전이 피펫을 사용하여 벌레 한 마리를 거름종이 위에 등 쪽이 위로 오도록 놓습니다.조명을 켜고 광선을 벌레에게 집중시킵니다. 벌레의 눈이 명확하게 보이도록 해부 현미경의 초점과 배율을 조정합니다. 파라핀 필름을 회전시켜 벌레의 머리가 연구자를 향하고 오른쪽으로 30~40도 각도가 되도록 위치를 조정합니다.벌레의 복측이 위를 향하고 있고 인두 개구부가 보이는 경우에는, 포셉의 뭉툭한 면을 사용하여 벌레의 위치를 눈이 보이는 배측이 위로 오도록 조심스럽게 변경하십시오. 눈이 명확하게 초점에 잡히도록 현미경 설정을 다시 조정하십시오. 또한 양쪽 눈과 주변 머리 조직이 모두 시야에 들어오는지 확인하십시오.깨끗한 주사기를 오른손 엄지와 검지 사이에 잡습니다. 주사기의 하단부를 왼쪽 엄지로 지지하며 Peltier plate에 밀착시킵니다. 현미경을 통해 바늘의 베벨(bevel)이 보이는지 확인합니다.시술 중 표면이 안정적으로 유지되도록 왼쪽 검지 손가락을 수술 표면에 놓아 왼쪽 엄지손가락과 40도 각도를 이루게 합니다. 바늘의 사면(bevel)이 위를 향하도록 하여 눈과 90도 각도로 바늘을 배치합니다. 바늘 끝을 사용하여 흰색의 무색소 영역으로 보이는 안구의 시신경 컵(optic cup) 위를 덮고 있는 얇은 조직층을 조심스럽게 관통합니다.오른쪽에서 왼쪽으로 긁어내듯 하여, 안배(optic cup) 내에 위치한 모든 검은색 색소 조직과 모든 흰색 조직을 매우 조심스럽게 제거합니다. 양측 눈 절제술을 수행하는 경우, 지금 두 번째 눈을 절제하십시오. 수술을 마친 후, 피펫에 소량의 웜 워터(worm water)를 채워 웜 위에 떨어뜨려 필터 페이퍼에서 웜을 떼어냅니다.전달 피펫을 이용해 즉시 벌레를 흡입합니다. 벌레를 신선한 벌레 전용수가 2/3 정도 채워진 라벨이 부착된 12-웰 플레이트로 옮깁니다. 모든 벌레를 옮긴 후, 웰의 물을 신선한 벌레 전용수로 교체하여 벌레를 세척합니다.빛이 차단된 20°C 인큐베이터에서 벌레를 배양하며 재생 과정을 관찰합니다. 살아있는 벌레를 희생시키려면, 플레이트에서 벌레 배양액을 제거하고 70% ethanol로 대체합니다. 벌레를 3~5분 동안 배양하며 벌레가 용해되어 회색으로 변하는지 확인합니다.여기 제시된 사진들은 양쪽 눈 절제 및 한쪽 눈 절제를 거친 편형동물을 대상으로 수술 전, 수술 4일 후, 그리고 2주 후에 촬영한 것입니다. 이 이미지들은 시간에 따른 재생 과정을 보여줍니다. 절제된 벌레의 눈 재생은 arrestin의 면역조직화학적 염색과 새로 형성된 광수용체 뉴런을 통해 확인되었습니다.양안 절제 후 플랫웜의 시각 시스템 회복 여부를 야생형의 빛에 대한 광공포성 반응을 기반으로 한 기능 분석법을 통해 연구하였습니다. 절제 24시간 후, 눈이 없는 웜들은 빛을 피하지 않고 빛이 비치는 지점을 통과합니다. 시술 7일 후에는 광공포성이 회복되었으며, 이는 재생된 시각 시스템이 정상적으로 기능함을 나타냅니다.숙련되면 벌레 한 마리의 양안 절제술 절차는 약 3분 정도에 완료할 수 있습니다. 절제 시에는 양안 사이의 조직을 손상시키지 않고 눈 뒤쪽 조직을 찢지 않도록 주의하면서, 눈의 색소성 및 비색소성 조직 전체를 제거하는 것이 중요합니다. 이 절차 이후에는 특정 유전자의 역할과 재생 과정을 조사하기 위해 면역조직화학법 및 RNA 간섭과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다.또한, 재생 후의 눈 기능을 테스트하기 위해 행동 분석을 수행할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 주변 조직을 손상시키지 않고 플라나리아의 눈을 절제하는 방법에 대해 충분히 이해하셨을 것입니다. 바늘을 사용하는 작업은 위험할 수 있으므로, 장갑을 착용하고 바늘 끝이 몸 바깥쪽을 향하게 잡는 등의 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

surgical-ablation-assay-for-studying-eye-regeneration-in-planarians

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

인간의 급성 신장 상해 (아키)는 신장 nephrons을 구성하는 상피 세포 손상으로 인한 일반적인 임상 문제, 그리고 아키는 50~70% 1 높은 사망률 속도와 연결되어 있습니다. 이 현상을 안내하는 메커니즘과 한계가 제대로 이해 남아 있지만 상피 세포의 파괴에 따라 nephrons은 재생에 제한 기능이 있습니다. 이 비디오를 문서에서, 우리는 타겟 레이저 zebrafish 배아 신장의 신장 nephron 세포의 박리 또는 pronephros위한 기술을 설명합니다. 새로운 방법은 아키의 nephrotoxicity 유도된 모델을 보완하고 신장 nephron의 상피 조직이 재생된과 관련된 세포 및 분자 변경의 고해상도 이해하는 데 사용할 수 있습니다.

Zebrafish의 Pronephros의 레이저 절제는 신장 상피 조직이 재생된를 공부

살아있는 동물 이내에 줄기 세포 차별을 공부에 대한 매력적인 모델은 planarian의 flatworm입니다. 재생 쉽게 기본적인 실험실에서 수행하는 간단한 절단 실험에서 공부하고 약리 및 유전...

약리 및 기능성 유전자 Assays은 Planarian의 재생을 조작하는<em자포니카> Dugesia</em

planaria 사이에 정의하고 일관성있는 크기의 조직을 접목을위한 효과적인 방법이 설명되어 있습니다. 또한 이식에 사용되는 고정 기법이 살아있는 동물의 부분 조사를위한 리드 방패와 함께, 적응하는 방법에 대한 설명이 포함되어 있습니다.

Planarian의 부동화, 부분 조사 및 조직 이식

출처: Volpe, B. A.,  et al. 제브라피시 신경마스트 세포에서 컨포칼 현미경 기반 레이저 절제 및 재생 분석. J. Vis. 특급{{TAG_ 31}} (2020) 이 비디오는 컨포칼 현미경을 사용하여 제브라피쉬의 신경마스트 간 세포 회수를 모니터링하고 타임 랩스 형광 이미징을 통해 세포 사멸 및 복구를 추적하는 방법을 보여줍니다.

컨포칼 현미경을 사용한 제브라피시의 레이저 절제 신경마스트 세포의 회복 모니터링

신경 및 비 신경 질환의 많은 지브라 피쉬의 모델 성어보다는 배아 / 유생으로 연구되어 있기 때문에, 우리는 성인 zebrafish의 질병 모델에 적용 할 수있는 양적 측면 라인 회생 분석법을 개발 하였다. 분석은 1) neuromast 2) 개별 머리 세포 수준의 해상도를하고있었습니다.

성인 Zebrafish의의 측면 라인 재생을위한 분석

Zebrafish는 척추 동물의 망막 변성/중생의 메커니즘 연구 인기 동물 모델입니다. 이 프로토콜에서는 내부 망막에 최소한의 손상으로 외부 망막을 방해 하는 지역화 된 상해를 유도 하는 방법을 설명 합니다. 망막 형태학 및 망막 재생 내내 뮐러 명과 응답 이후, vivo에서 모니터링합니다.

레이저 유도 된 망막 변성 및 재생 Zebrafish 모델 뮐러 명과 셀 활성화

Schmidtea 서 planarian 줄기 세포 및 조직 재생을 공부에 대 한 우수한 모델입니다. 이 게시는 선택적으로 한 기관, 인 두, 화학 나트륨 아 지 드를 동물을 노출 하 여 제거 하는 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 또한 인 두 재생을 모니터링 하기 위한 방법을 설명 합니다.

화학 절단 및 Planarian Schmidtea 지중해 에 인 두의 재생

레이저 절제는 생물학적 시스템의 재생을 연구하는 데 널리 적용되는 기술입니다. 제시된 프로토콜은 제브라피시 측면에서 신경마비 세포를 재생시키는 레이저 절제 및 후속 시간 경과 화상 진찰을 위한 표준 레이저 스캐닝 공초점 현미경의 사용을 설명합니다.

제브라피시 간 신경종 세포의 공초점 현미경 기반 레이저 절제 및 재생 분석

이 기사는 망막 입력이 광학 텍텀의 성장과 발달에 어떻게 영향을 미치는지 조사하기위한 첫 번째 단계로 살아있는 제브라 피쉬 유충에서 눈을 외과 적으로 제거하는 방법을 설명합니다. 또한이 기사는 애벌레 마취, 고정 및 뇌 해부에 대한 정보를 제공하고 면역 조직 화학 및 공초점 이미징을 제공합니다.

살아있는 제브라 피쉬 유충의 눈 제거는 시각 시스템의 신경 의존적 인 성장과 발달을 조사합니다.

이 프로토콜은 형질전환 제브라피쉬 모델을 사용하여 망막 색소 상피(RPE)를 유전적으로 제거하는 방법론을 기술한다. 약리학적 화합물을 이용한 신호전달 경로 조절을 통합하도록 프로토콜을 적응시키는 것은 광범위하게 상세하다. 색소침착을 기반으로 RPE 재생을 정량화하기 위한 MATLAB 플랫폼이 개발되어 발표되고 논의됩니다.

니트로환원효소/메트로니다졸 매개 절제 및 제브라피쉬 망막 색소 상피의 재생 연구를 위한 MATLAB 플랫폼(RpEGEN)

여기서는 각막을 자극하는 감각 섬유를 손상시키는 세 가지 방법을 제안합니다. 이러한 방법은 생쥐의 축삭 재생에 대한 연구를 용이하게 합니다. 다른 동물 모델에 적용할 수 있는 이 세 가지 방법은 각막 신경 분포 생리학 및 재생 연구에 이상적입니다.

쥐 각막의 신경 영양성 각막염 및 신경 재생을 유도하는 세 가지 전략

학습하세요 플라나리아 눈 수술 절제 기법을 통해 재생 생물학 및 신경과학 연구를 수행하는 방법을. 이 방법은 줄기세포 유지와 분화 메커니즘을 연구하는 데 활용됩니다.

수술 절제 분석 플라나리아에 아이 재생을 유학을위한

더 많은 동영상 탐색